专利摘要

本发明涉及基于香草醛及其异构体，构建的式Ⅰ所示的含有羟基和甲氧基的2‑(2‑苄亚肼基)‑5‑酰基噻唑及其药学上可接受的盐，药物组合物以及其在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂中的应用。采用香草醛及其异构体作为原料，制备含有羟基和甲氧基的2‑(2‑苄亚肼基)‑5‑酰基噻唑：其中，R选自：甲基、乙基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、溴甲基、二溴甲基、三溴甲基、氯甲基、二氯甲基或三氯甲基；Y＝2‑羟基‑3‑甲氧基、2‑羟基‑4‑甲氧基、2‑羟基‑5‑甲氧基、2‑羟基‑6‑甲氧基、3‑羟基‑2‑甲氧基、3‑羟基‑4‑甲氧基、3‑羟基‑5‑甲氧基、3‑羟基‑6‑甲氧基、4‑羟基‑2‑甲氧基或4‑羟基‑3‑甲氧基。

权利要求

1.一类化学结构式Ⅰ所示的化合物及其在药学上可接受的盐：

其中，R选自：甲基、乙基、C₃～C₄直链或C₃～C₄支链烷基；R¹选自：氢、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链或C₃～C₄支链烷基、氟甲基、二氟甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、溴甲基、二溴甲基、三溴甲基、氯甲基、二氯甲基或三氯甲基；Y＝2-羟基-3-甲氧基、2-羟基-4-甲氧基、2-羟基-5-甲氧基、2-羟基-6-甲氧基、3-羟基-2-甲氧基、3-羟基-4-甲氧基、3-羟基-5-甲氧基、3-羟基-6-甲氧基、4-羟基-2-甲氧基或4-羟基-3-甲氧基。

2.权利要求1所述的化合物，选自：

3.权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于选用香草醛及其异构体作为原料制备化合物(I)；制备反应如下：

式中；R、R¹和Y的定义如权利要求1所述；X选自：Cl或Br。

4.权利要求1或2所述的化合物及其在药学上可接受的盐在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂中的应用。

5.一种药物组合物，包括权利要求1或2中的一种化合物和制药学上可用的载体。

说明书

技术领域

本发明涉及一类新化合物、其制备方法与应用，具体是选用香草醛及其异构体作为原料，制备含有羟基和甲氧基的2-(2-苄亚肼基)-5-酰基噻唑及其在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂的应用。

背景技术

香草醛(香兰素，4-羟基-3-甲氧基苯甲醛)及其异构体结构如下：

中国发明专利[ZL201610061123.5，2017.12.29授权]公开了选用香草醛及其异构体合成含有羟基和甲氧基的2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯及其作为制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂方面的应用。

P.Makam等[Eur.J.Med.Chem.,2013.69:564-576，Eur.J.Pharm.Sci.,2014.52:138-145]公开了选用香草醛及其异构体合成含有羟基和甲氧基的2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸乙酯，该噻唑-5-羧酸乙酯具有良好的抗结核分枝杆菌作用和抗疟疾作用。

A.Grozav等[The Synthesis and Antiproliferative Activities of NewArylidene-Hydrazinyl-Thiazole Derivatives Int.J.Mol.Sci.2014,15,22059-22072]公开了2-(2-苄亚肼基)-5-酰基噻唑及其制备方法。

发明内容

本发明解决的技术问题是基于香草醛及其异构体，构建并提供含有羟基和甲氧基的2-(2-苄亚肼基)-5-酰基噻唑、其制备方法、药物组合物和用途。

为解决本发明的技术问题，本发明提供如下技术方案：

本发明技术方案的第一方面是基于香草醛及其异构体，提供了一类如结构式Ⅰ所示含有羟基和甲氧基的2-(2-苄亚肼基)-5-酰基噻唑及其药学上可接受的盐：

其中，R选自：甲基、乙基、C₃～C₄直链或C₃～C₄支链烷基；R¹选自：氢、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链或C₃～C₄支链烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、溴甲基、二溴甲基、三溴甲基、氯甲基、二氯甲基或三氯甲基；Y＝2-羟基-3-甲氧基、2-羟基-4-甲氧基、2-羟基-5-甲氧基、2-羟基-6-甲氧基、3-羟基-2-甲氧基、3-羟基-4-甲氧基、3-羟基-5-甲氧基、3-羟基-6-甲氧基、4-羟基-2-甲氧基和4-羟基-3-甲氧基。

本发明技术方案的第一方面还提供的一类含有羟基和甲氧基的2-(2-苄亚肼基)-5-酰基噻唑选自下列化合物：

本发明技术方案的第二方面是选用香草醛及其异构体作为原料，提供了含有羟基和甲氧基的2-(2-苄亚肼基)-5-酰基噻唑的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：

其中，R选自：甲基、乙基、C₃～C₄直链或C₃～C₄支链烷基；R¹选自：氢、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链或C₃～C₄支链烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、溴甲基、二溴甲基、三溴甲基、氯甲基、二氯甲基或三氯甲基；Y＝2-羟基-3-甲氧基、2-羟基-4-甲氧基、2-羟基-5-甲氧基、2-羟基-6-甲氧基、3-羟基-2-甲氧基、3-羟基-4-甲氧基、3-羟基-5-甲氧基、3-羟基-6-甲氧基、4-羟基-2-甲氧基和4-羟基-3-甲氧基；X选自：Cl或Br。

本发明技术方案的第三方面是提供含有第一方面所述化合物及其药学上可接受的盐的药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的本发明的含有羟基和甲氧基的2-(2-苄亚肼基)-5-酰基噻唑及其药学上可接受的盐，以及任选的含有药用载体。其中所述的药用载体指药学领域常用的药用载体；该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物及其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂组合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物及其药学上可接受的盐在其药物组合物中的含量通常为0.1％～95％重量百分比。

本发明化合物及其药学上可接受的盐或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。

本发明化合物及其药学上可接受的盐可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

为了将本发明化合物及其药学上可接受的盐制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。

还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物及其药学上可接受的盐与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物及其药学上可接受的盐先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物及其药学上可接受的盐片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物及其药学上可接受的盐的胶囊剂。

为将本发明化合物及其药学上可接受的盐制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。

为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。

本发明技术方案的第四方面是提供本发明所述含有羟基和甲氧基的2-(2-苄亚肼基)-5-酰基噻唑及其药学上可接受的盐以及第三方面所述药物组合物在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂方面的应用。

有益技术效果：

本发明的含有羟基和甲氧基的2-(2-苄亚肼基)-5-酰基噻唑是一类新结构类型的具有流感病毒神经氨酸酶抑制活性的化合物。

具体实施方式

以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

实施例1

2-(2-(2-羟基-3-甲氧基苄亚肼基))-4-甲基-5-乙酰基噻唑的制备

(1)3-溴乙酰丙酮的制备：

20.00g乙酰丙酮，35.60g NBS，30mL丙酮，冰浴反应2h，抽滤，滤液旋蒸，加入50mLCH₂Cl₂、水洗3次，无水Na₂SO₄干燥，旋蒸得红色液体，备用。

(2)2-(2-羟基-3-甲氧基苄亚肼基)硫代甲酰胺的制备

0.76g(5.0mmol)2-羟基-3-甲氧基苯甲醛，0.46g(5.0mmol)硫代氨基脲和12mL乙醇，回流6h；抽滤，滤饼依次用冰水洗、冰乙醇洗，干燥得白色2-(2-羟基-3-甲氧基苄亚肼基)硫代甲酰胺，备用。

(3)2-(2-(2-羟基-3-甲氧基苄亚肼基))-4-甲基-5-乙酰基噻唑的制备

上步得到的2-(2-羟基-3-甲氧基苄亚肼基)硫代甲酰胺溶于12mL乙醇溶液中，加入1.07g(2.0mmol)3-溴乙酰丙酮于12mL乙醇溶液中，回流6h，10％NaHCO₃调pH＝7～8，抽滤，滤饼依次用冰水洗、冰乙醇洗，干燥得绿色2-(2-(2-羟基-3-甲氧基苄亚肼基))-4-甲基-5-乙酰基噻唑；m.p.240～242℃，收率83.3％；¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.40(s，1H，NH)，8.43(s，1H，＝CH)，7.24～6.84(m，3H，C₆H₃)，3.82(s，3H，OCH₃)，2.50(s，3H，噻唑环-CH₃)，2.41(s，3H，COCH₃)。

实施例2

2-(2-(3-羟基-4-甲氧基苄亚肼基))-4-甲基-5-乙酰基噻唑的制备

(1)2-(3-羟基-4-甲氧基苄亚肼基)硫代甲酰胺的制备

0.76g(5.0mmol)3-羟基-4-甲氧基苯甲醛，0.46g(5.0mmol)硫代氨基脲和12mL乙醇，回流6h；抽滤，滤饼依次用冰水洗、冰乙醇洗，干燥得白色2-(3-羟基-4-甲氧基苄亚肼基)硫代甲酰胺，备用。

(2)2-(2-(3-羟基-4-甲氧基苄亚肼基))-4-甲基-5-乙酰基噻唑的制备

上步得到的2-(3-羟基-4-甲氧基苄亚肼基)硫代甲酰胺溶于12mL乙醇溶液中，加入1.07g(2.0mmol)3-溴乙酰丙酮于12mL乙醇溶液中，回流6h，10％NaHCO₃调pH＝7～8，抽滤，滤饼依次用冰水洗、冰乙醇洗，干燥得黄色2-(2-(3-羟基-4-甲氧基苄亚肼基))-4-甲基-5-乙酰基噻唑；m.p.230～232℃，收率59.2％；¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.31(s，1H，NH)，9.30(s，1H，＝CH)，7.97(s，1H，C₆H₃)，7.05～6.93(m，2H，C₆H₃)，3.81(s，3H，OCH₃)，2.50(s，3H，噻唑环-CH₃)，2.41(s，3H，COCH₃)。

实施例3

2-(2-(4-羟基-3-甲氧基苄亚肼基))-4-甲基-5-乙酰基噻唑的制备

(1)2-(4-羟基-3-甲氧基苄亚肼基)硫代甲酰胺的制备

0.76g(5.0mmol)4-羟基-3-甲氧基苯甲醛，0.46g(5.0mmol)硫代氨基脲和12mL乙醇，回流6h；抽滤，滤饼依次用冰水洗、冰乙醇洗，干燥得白色2-(4-羟基-3-甲氧基苄亚肼基)硫代甲酰胺，备用。

(2)2-(2-(4-羟基-3-甲氧基苄亚肼基))-4-甲基-5-乙酰基噻唑的制备

上步得到的2-(4-羟基-3-甲氧基苄亚肼基)硫代甲酰胺溶于12mL乙醇溶液中，加入1.07g(2.0mmol)3-溴乙酰丙酮于12mL乙醇溶液中，回流6h，10％NaHCO₃调pH＝7～8，抽滤，滤饼依次用冰水洗、冰乙醇洗，干燥得绿色2-(2-(4-羟基-3-甲氧基苄亚肼基))-4-甲基-5-乙酰基噻唑；m.p.229～230℃，收率81.3％；¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.30(s，1H，NH)，8.00(s，1H，＝CH)，7.25～6.83(m，3H，C₆H₃)，3.83(s，3H，OCH₃)，2.50(s，3H，噻唑环-CH₃)，2.41(s，3H，COCH₃)。

实施例4

含有羟基和甲氧基的2-(2-苄亚肼基)-5-酰基噻唑的抗流感病毒神经氨酸酶活性

1.实验原理

化合物MUNANA是神经氨酸酶的特异性底物，在神经氨酸酶作用下产生的代谢产物在360nm照射激发下，可以产生450nm荧光，荧光强度的变化可以灵敏地反应神经氨酸酶活性。酶都来自A/PR/8/34(H₁N₁)病毒毒株。

2.实验方法

在酶反应体系中，一定浓度样品与流感病毒神NA悬浮于反应缓冲液中(pH 6.5)，加入荧光底物MUNANA启动反应体系，37℃孵育40分钟后，加反应终止液终止反应。在激发波长360nm和发射波长为450nm的参数条件下，测定荧光强度值。反应体系的荧光强度可以反映酶的活性。根据荧光强度的减少量可以计算化合物对NA活性的抑制率。

3.检测样品：实施例化合物

4.活性结果

优选化合物在反应系统中检测浓度40.0μg/mL时对神经氨酸酶的抑制率和IC₅₀(μg/mL)值列入表1；与2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯活性对比见表2。

表1化合物(40.0μg/mL)对神经氨酸酶H1N1的抑制活性和IC₅₀(μg/mL)

表2化合物(40μg/mL)对神经氨酸酶(H1N1)的抑制活性比较

表中“-”为抑制率小于50％的未进行H1N1活性测试

含有羟基和甲氧基的2-(2-苄亚肼基)-5-酰基噻唑具有抗流感病毒神经氨酸酶活性，可用于制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂。

香草醛及其异构体在制备NA抑制剂中的应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。