专利摘要
本发明涉及化学结构式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ所示的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮或其混合物：其中，R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基；X选自：氟、氯、溴或碘；X1～X5选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基、硝基、氨基或NHCOR，其中R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基。2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮或其混合物在制备神经氨酸酶抑制剂中的应用。
权利要求
1.化学结构式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ所示的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮或其混合物：
其中，R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基、氟代C1～C2烷基、氯代C1～C2烷基、溴代C1～C2烷基或碘代C1～C2烷基；X选自：氟、氯、溴或碘；X1、X5选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基、二甲氨基、硝基、氨基或NHCOR，其中R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；X2、X4选自：二甲氨基、硝基、氨基或NHCOR，其中R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；X3选自：二甲氨基、硝基、氨基或NHCOR，其中R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；Ⅰ式所示的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮为(2E,5Z)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮；Ⅱ式所示的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮为(2Z,5Z)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮；Ⅲ式所示的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮为(2E,5E)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮；Ⅳ式所示的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮为(2Z,5E)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮。
2.权利要求1所述的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮选自下列化合物：
其中，R1和X如权利要求1所述；n选自1、2或3；(NH2)n选自：2-NH2、3-NH2、4-NH2、2,4-(NH2)2、2,5-(NH2)2、2,6-(NH2)2、3,4-(NH2)2、3,5-(NH2)2、2,3,4-(NH2)3或2,3,5-(NH2)3。
3.权利要求1所述的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮选自下列化合物：
其中，R1、X如权利要求1所述；R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；n选自1、2或3；(NHCOR)n选自：2-NHCOR、3-NHCOR、4-NHCOR、2,4-(NHCOR)2、2,5-(NHCOR)2、2,6-(NHCOR)2、3,4-(NHCOR)2、3,5-(NHCOR)2、2,3,4-(NHCOR)3或2,3,5-(NHCOR)3。
4.权利要求1所述的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮选自：2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]-5-(3-硝基亚苄基)噻唑啉-4-酮、2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]-5-(4-硝基亚苄基)噻唑啉-4-酮、5-(3-氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮、5-(4-氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮、5-(3-乙酰氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮、5-(4-乙酰氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮。
5.权利要求1所述的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：
式中，R1、X如权利要求1所述；X1、X5选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链烷基、C3～C4支链烷基或硝基；X2、X4选自：硝基、二甲氨基；X3选自：硝基或二甲氨基。
6.5-(氨基亚苄基)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮和5-(乙酰氨基亚苄基)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮的制备方法，其特征在于它们的制备反应如下：
式中，R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；R1、X如权利要求1所述；(NH2)n如权利要求2所述；(NHCOR)n如权利要求3所述；n选自1、2或3；(NO2)n选自：2-NO2、3-NO2、4-NO2、2,4-(NO2)2、2,5-(NO2)2、2,6-(NO2)2、3,4-(NO2)2、3,5-(NO2)2、2,3,4-(NO2)3或2,3,5-(NO2)3。
7.权利要求1～4中任意一项所述的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮或其混合物在制备神经氨酸酶抑制剂中的应用。
说明书
技术领域
本发明涉及一类新化合物的制备与应用，具体是2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮的制备及其在作为流感病毒神经氨酸酶抑制剂的应用。
背景技术
禽流感病毒可引起禽类的呼吸器官或全身性感染，高致病性禽流感病毒可直接感染禽类，也能直接或间接感染人类。高致病性禽流感病毒是在人群中引发流感的一个潜在危险因素，并会严重地威胁人类健康。20世纪人类曾发生过4次流感大流行：1918年到1919年的“西班牙流感”(H1N1亚型)、1957年到1958年的“亚洲流感”(H2N2亚型)、1968年到1969年的“香港流感”(H3N2亚型)和1977年的“俄罗斯流感”(H1N1亚型)。禽流感病毒含有两个表面蛋白：血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)，根据这两个蛋白抗原性的不同，可将禽流感病毒分为16个HA亚型(H1～H16)和9个NA亚型(N1～N9)。至今发现能直接感染人的禽流感病毒亚型有：H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H9N2、H7N9和H10N8亚型。其中，高致病性H5N1亚型于1997年在香港首次发现能直接感染人类，2003年7月之后，H5N1禽流感疫情呈现前所未有的暴发，波及亚洲、北美洲、欧洲和非洲17个国家和地区，造成数百人感染及死亡，直接经济损失高达100亿美元。2003年3月，荷兰发生H7N7型禽流感并波及整个欧洲，人类感染者达83例，不仅造成了人类的伤亡，同时重创了家禽养殖业。2009年3月底，墨西哥暴发人感染H1N1型猪流感疫情并扩散到世界各地，据世界卫生组织于2010年2月26日发布的甲型H1N1流感全球情况报告，至少有213个国家和地区的16226例病人死于这场大流感[曾祥兴，李康生。医学与社会，2010，11，4-6。]。经过基因序列分析，H1N1型病毒包含人流感病毒、北美禽流感病毒和北美、欧、亚猪流感病毒基因片段，为几种不同物种流感病毒的混合毒株，而非单独一种猪流感或禽流感病毒。2013年3月，我国首次发现人感染H7N9禽流感病例，截止2015年1月25日，世界卫生组织公布的H7N9禽流感确诊494人，死亡221人。因此对抗禽流感病毒药物的研发，已成为世界各国政府及卫生防疫部门日益关注和积极着手解决的重大问题之一。
禽流感病毒是一种含有包膜蛋白的病毒，其基因组是包含有8节段的单股负链RNA，可编码多种病毒蛋白：病毒表面蛋白(血凝素HA，神经氨酸酶NA)、基质蛋白(M1，M2)核蛋白(NP)、非结构蛋白(NS1，NS2)、RNA聚合酶P蛋白复合体PA，PB1，PB2)[CN101990534A]。HA是一种介导病毒对靶细胞的结合和病毒基因组进入靶细胞的凝集素。NA可催化裂解宿主细胞表面糖蛋白末端的N-乙酰氨基，从感染细胞释放子代病毒。NA还可通过改变表面糖蛋白HA的碳水化合物部分，增强毒性，促进病毒从受感染的宿主细胞中释放，引起或加重流感症状[CN103755697A]。此外，NA在流感病毒的变异过程中具有相对保守性，使其成为设计、合成抗流感药物非常好的靶标。因此，以NA为作用靶标，通过抑制NA活性来抑制流感病毒复制和毒性的NA抑制剂是抗禽流感病毒的第一线药物，代表药物有Zanamivir、Oseltamivir和Peramivir及其衍生物，其中Oseltamivir应用广泛。但已有研究发现一些病毒株对Oseltamivir产生了耐药性。
噻唑类和噻唑啉酮类化合物具有抗流感病毒活性：中国发明专利[ZL 200810152537.4，2010.12.22授权，ZL 201010223400.0，2012.07.25授权]报道了系列具有抗流感病毒活性的噻唑衍生物和取代噻唑巯乙酰胺类衍生物；中国发明专利[CN 103830233A，2014.06.04公开，CN 103705511A，2014.04.09公开]描述了5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苯乙酰氨基噻唑和N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺的抗流感活性；中国发明专利[CN 103755697A，2014.04.30公开，CN 103739599A，2014.04.23公开]报道了3-[[2-(2-苄亚氨基)噻唑-5-基]甲基]喹啉-2(1H)-酮和3-[[2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-基]甲基]喹啉-2(1H)-酮的制备与抗流感活性；此外，中国专利[CN 103648282A，2014.03.19公开，CN101990534A，2008.10.3公开]还报道了噻唑类化合物在预防和治疗病毒感染方面的用途。
发明内容
本发明的目的在于提供化学结构式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ所示的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮或其混合物：
其中，R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基、氟代C1～C2烷基、氯代C1～C2烷基、溴代C1～C2烷基或碘代C1～C2烷基；X选自：氟、氯、溴或碘；X1、X5选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基、二甲氨基、硝基、氨基或NHCOR，其中R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；X2、X4选自：二甲氨基、硝基、氨基或NHCOR，其中R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；X3选自：二甲氨基、硝基、氨基或NHCOR，其中R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基。
Ⅰ式所示的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮为(2E,5Z)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮；Ⅱ式所示的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮为(2Z,5Z)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮；Ⅲ式所示的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮为(2E,5E)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮；Ⅳ式所示的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮为(2Z,5E)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮。
本发明的目的在于提供的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮选自下列化合物：
其中，R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基、氟代C1～C2烷基、氯代C1～C2烷基、溴代C1～C2烷基或碘代C1～C2烷基；X选自：氟、氯、溴或碘；n选自：1、2或3；(NH2)n选自：2-NH2、3-NH2、4-NH2、2,4-(NH2)2、2,5-(NH2)2、2,6-(NH2)2、3,4-(NH2)2、3,5-(NH2)2、2,3,4-(NH2)3或2,3,5-(NH2)3。
本发明的目的在于提供的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮选自下列化合物：
其中，R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基、氟代C1～C2烷基、氯代C1～C2烷基、溴代C1～C2烷基或碘代C1～C2烷基；X选自：氟、氯、溴或碘；n选自：1、2或3；(NHCOR)n选自：2-NHCOR、3-NHCOR、4-NHCOR、2,4-(NHCOR)2、2,5-(NHCOR)2、2,6-(NHCOR)2、3,4-(NHCOR)2、3,5-(NHCOR)2、2,3,4-(NHCOR)3或2,3,5-(NHCOR)3。
本发明的目的在于提供的结构式Ⅰ所示的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮选自：2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]-5-(3-硝基亚苄基)噻唑啉-4-酮、2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]-5-(4-硝基亚苄基)噻唑啉-4-酮、5-(3-氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮、5-(4-氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮、5-(3-乙酰氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮、5-(4-乙酰氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮。
本发明的目的在于提供的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：
式中，R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基、氟代C1～C2烷基、氯代C1～C2烷基、溴代C1～C2烷基或碘代C1～C2烷基；X选自：氟、氯、溴或碘；X1、X5选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链烷基、C3～C4支链烷基或硝基；X2、X4选自：二甲氨基或硝基；X3选自：二甲氨基或硝基。
本发明的目的在于提供5-(氨基亚苄基)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮和5-(乙酰氨基亚苄基)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮的制备方法，其特征在于它们的制备反应如下：
式中，R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基、氟代C1～C2烷基、氯代C1～C2烷基、溴代C1～C2烷基或碘代C1～C2烷基；X选自：氟、氯、溴或碘；n选自1、2或3；(NO2)n选自：2-NO2、3-NO2、4-NO2、2,4-(NO2)2、2,5-(NO2)2、2,6-(NO2)2、3,4-(NO2)2、3,5-(NO2)2、2,3,4-(NO2)3或2,3,5-(NO2)3；(NH2)n选自：2-NH2、3-NH2、4-NH2、2,4-(NH2)2、2,5-(NH2)2、2,6-(NH2)2、3,4-(NH2)2、3,5-(NH2)2、2,3,4-(NH2)3或2,3,5-(NH2)3；(NHCOR)n选自：2-NHCOR、3-NHCOR、4-NHCOR、2,4-(NHCOR)2、2,5-(NHCOR)2、2,6-(NHCOR)2、3,4-(NHCOR)2、3,5-(NHCOR)2、2,3,4-(NHCOR)3或2,3,5-(NHCOR)3。
本发明的目的在于提供2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮具有流感病毒神经氨酸酶抑制活性，在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂中的应用。
本发明与现有技术相比具有如下优点：
本发明的2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮具有流感病毒神经氨酸酶抑制活性。
具体实施方式
以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。
(2E,5E)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮(Ⅲ)的制备方法如实施例1～7所述。
实施例1
2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮(2)的制备
7.05g(30mmol)5-溴-4-叔丁基噻唑-2-胺，100mL二氯甲烷，搅拌溶解，加入4.14g(30mmol)无水碳酸钾，常温搅拌30min，滴加2.5ml(30mmol)氯乙酰氯，常温反应2.0h。反应液倒入冰水，二氯甲烷萃取，饱和碳酸钠水溶液洗涤，合并有机相，无水硫酸钠干燥，脱溶，乙醇重结晶得7.55g白色固体1，收率81％，m.p.118～120℃。
4.5g(14.4mmol)化合物3，2.1g(21.7mmol)硫氰酸钾，50ml乙醇溶解，加热回流反应7.0h。反应液脱溶，乙酸乙酯重结晶得4.00g红色固体2，收率83％，m.p.202～203℃。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ:1.47(s，9H，3×CH3)，3.88(s，2H，CH2)，11.92(s，1H，NH)。
实施例2
(2E,5E)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]-5-(3-硝基亚苄基)噻唑啉-4-酮的制备
35ml乙酸溶解0.65g乙酸钠配制pH＝4～5的缓冲溶液，加入2.0mmol中间体2和4.0mmol 3-硝基苯甲醛，加热回流反应10h。冷却，水洗，过滤，乙醇重结晶得黄色固体(2E,5E)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]-5-(3-硝基亚苄基)噻唑啉-4-酮，收率85％，m.p.244～246℃。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ:1.55(s，9H，3×CH3)，7.68(t，J＝7.8Hz，1H，C6H4)，7.81～7.92(m，2H，C6H4，＝CH)，8.29(d，J＝7.8Hz，1H，C6H4)，8.41～8.51(m，1H，C6H4)。
实施例3
(2E,5E)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]-5-(4-硝基亚苄基)噻唑啉-4-酮的制备
操作方法同实施例2，化合物2与4-硝基苯甲醛，反应10h，得到黄色固体(2E,5E)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]-5-(4-硝基亚苄基)噻唑啉-4-酮，收率78％，m.p.263～265℃。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ:1.53(s，9H，3×CH3)，7.71(s，2H，C6H4)，7.86(s，1H，＝CH)，8.34(d，J＝8.6Hz，2H，C6H4)。
实施例4
(2E,5E)-5-(3-氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮的制备
1.0mmol(2E,5E)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]-5-(3-硝基亚苄基)噻唑啉-4-酮溶于10ml二氯甲烷和10ml乙酸，加入适量铁粉和1ml水，常温搅拌反应5h。过滤，水洗，二氯甲烷萃取，饱和碳酸钠水溶液洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，脱溶得黄色固体(2E,5E)-5-(3-氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮，收率85％，m.p.215～216℃。1H NMR(DMSO，400MHz)δ:1.48(s，9H，3×CH3)，5.35(s，2H，NH2)，6.68(d，J＝7.6Hz，1H，C6H4)，6.79(d，J＝6.8Hz，2H，C6H4)，7.16(t，J＝7.9Hz，1H，C6H4)，7.52(s，1H，＝CH)，12.60(s，1H，NH)。
实施例5
(2E,5E)-5-(4-氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮的制备
操作方法同实施例4，(2E,5E)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]-5-(4-硝基亚苄基)噻唑啉-4-酮为原料，反应5h，得到黄色固体(2E,5E)-5-(4-氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮，收率89％，m.p.214～216℃。1H NMR(DMSO，400MHz)δ:1.50(s，9H，3×CH3)，6.14(s，2H，NH2)，6.65(d，J＝7.9Hz，2H，C6H4)，7.37(d，J＝7.2Hz，2H，C6H4)，7.53(s，1H，＝CH)，12.46(s，1H，NH)。
实施例6
(2E,5E)-5-(3-乙酰氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮的制备
0.5mmol(2E,5E)-5-(3-氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮溶于10ml乙酸，滴加0.5mmol乙酰氯，常温搅拌反应1h。水洗，乙酸乙酯萃取，饱和碳酸钠水溶液洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，脱溶得黄色固体(2E,5E)-5-(3-乙酰氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮，收率64％，m.p.241～243℃。1H NMR(DMSO，400MHz)δ:1.47(s，9H，3×CH3)，2.06(s，3H，COCH3)，7.31(d，J＝7.5Hz，1H，C6H4)，7.42～7.48(m，2H，C6H4)，7.65(s，1H，＝CH)，8.11(s，1H，C6H4)，10.11(s，1H，NHAc)，12.72(s，1H，NH)。
实施例7
(2E,5E)-5-(4-乙酰氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮的制备
操作方法同实施例6，(2E,5E)-5-(4-氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮为原料，反应1h，得到黄色固体(2E,5E)-5-(4-乙酰氨基亚苄基)-2-[(5-溴-4-叔丁基噻唑-2-基)亚氨基]噻唑啉-4-酮，收率82％，m.p.243～245℃。1H NMR(DMSO，400MHz)δ:1.50(s，9H，3×CH3)，2.08(s，3H，COCH3)，7.60(d，J＝8.8Hz，2H，C6H4)，7.64(s，1H，＝CH)，7.73(d，J＝8.8Hz，2H，C6H4)，10.26(s，1H，NHAc)，12.68(s，1H，NH)。
按照实施例1～7所述的方法制备(2E,5Z)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮(Ⅰ)、(2Z,5Z)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮(Ⅱ)和(2Z,5E)-2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮(Ⅳ)。
其中，R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基、氟代C1～C2烷基、氯代C1～C2烷基、溴代C1～C2烷基或碘代C1～C2烷基；X选自：氟、氯、溴或碘；X1、X5选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基、二甲氨基、硝基、氨基或NHCOR，其中R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；X2、X4选自：二甲氨基、硝基、氨基或NHCOR，其中R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；X3选自：二甲氨基、硝基、氨基或NHCOR，其中R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基。
实施例8
2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮抗流感病毒神经氨酸酶活性
1.实验原理
化合物MUNANA是神经氨酸酶的特异性底物，在神经氨酸酶作用下产生的代谢产物在360nm照射激发下，可产生450nm荧光，荧光强度的变化可以灵敏地反映神经氨酸酶活性。酶均来自A/PR/8/34(H1N1)病毒毒株。
2.实验方法
在酶反应体系中，一定浓度样品与流感病毒神经氨酸酶NA悬浮于反应缓冲液中(pH6.5)，加入荧光底物MUNANA启动反应体系，37℃孵育40分钟后，加反应终止液终止反应。在激发波长360nm和发射波长为450nm的参数条件下，测定荧光强度值。根据荧光强度的减少量可以计算化合物对NA活性的抑制率。
3.检测样品：2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ)
其中，R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基、氟代C1～C2烷基、氯代C1～C2烷基、溴代C1～C2烷基或碘代C1～C2烷基；X选自：氟、氯、溴或碘；X1、X5选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基、二甲氨基、硝基、氨基或NHCOR，其中R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；X2、X4选自：二甲氨基、硝基、氨基或NHCOR，其中R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；X3选自：二甲氨基、硝基、氨基或NHCOR，其中R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基。
4.活性结果
优选化合物在反应系统中检测浓度40.0μg/mL时对神经氨酸酶的抑制率及其IC50值列入下表1：
表12-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮对神经氨酸酶的抑制活性
2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉-4-酮具有良好的抗流感病毒神经氨酸酶活性，可用于制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂。
2-[(5-卤噻唑-2-基)亚氨基]-5-亚苄基噻唑啉酮及其制备方法与应用专利购买费用说明
Q：办理专利转让的流程及所需资料
A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。
1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。
2：按规定缴纳著录项目变更手续费。
3：同时提交相关证明文件原件。
4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。
Q:专利著录项目变更费用如何缴交
A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式
Q：专利转让变更，多久能出结果
A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。
![N-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]吗啉基酰胺及其医药用途](https://www.zhichawang.com/images/CN107286147A/CN107286147A.jpg)
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