专利摘要

本发明涉及化学结构式I所示的N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺：其中，X1、X3选自：氯、溴、氟、碘；X4选自：氢、氘、甲基、乙基、氯、溴、氟、碘；X2、X5选自：氢、氘、甲基、乙基；R选自：氢、甲基；n选自：0、1、2、3；Y选自：氢、C1～C2烷基、C3～C11直链烷基或支链烷基、C1～C2卤代烷基或二卤代烷基、C3～C5卤代直链烷基或卤代支链烷基、苯基。N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺在制备Hela细胞的抗癌药物或神经氨酸酶抑制剂中应用。

权利要求

1.化学结构式I所示的N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺：

其中，X¹、X³选自：氯、溴、氟、碘；X⁴选自：氢、氘、甲基、乙基、氯、溴、氟、碘；X²、X⁵选自：氢、氘、甲基、乙基；R选自：氢、甲基；n选自：0、1、2、3；Y选自：氢、C₁～C₂烷基、C₃～C₁₁直链烷基或支链烷基、C₁～C₂氯代烷基或二氯代烷基、C₃～C₅氯代直链烷基或氯代支链烷基、C₁～C₂溴代烷基、C₃～C₅溴代直链烷基或溴代支链烷基、C₁～C₂氟代烷基、C₃～C₅氟代直链烷基或氟代支链烷基、C₁～C₂碘代烷基、C₃～C₅碘代直链烷基或碘代支链烷基、苯基。

2.权利要求1所述的N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺选自N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]乙酰胺、N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙酰胺、N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]氯乙酰胺、N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-氯丙酰胺、N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙烯酰胺、N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]异丁酰胺、N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-甲基丙烯酰胺、N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]氯乙酰胺、N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-氯丙酰胺、N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙烯酰胺、N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]异丁酰胺或N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-甲基丙烯酰胺、N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]肉桂酰胺或N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]肉桂酰胺。

3.权利要求1所述的N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺的制备方法：其特征在于它制备反应如下：

其中，X¹、X²、X³、X⁴、X⁵、R、n、Y的定义如权利要求1所述；MBr选自：溴化钠或溴化钾。

4.权利要求3所述的制备方法，其中化学结构式Ⅱ所示的2-溴-1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮的制备方法；其特征在于采用双氧水-MBr体系溴化1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮制备2-溴-1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮；MBr选自：溴化钠或溴化钾；1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮、MBr和双氧水的投料摩尔比为1.0∶1.0∶1.0～1.0∶1.5∶3.5。

5.权利要求1、2所述的N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺在制备抗Hela细胞的抗癌药物中应用。

6.权利要求1、2所述的N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺在制备神经氨酸酶抑制剂中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及新化合物的制备与应用，具体是N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺的制备与应用。

背景技术

2-溴-1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮是制备4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-1，3-噻唑-2-胺及其衍生物的关键中间体。2-溴-1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮的制备及其在噻唑衍生物的合成上的应用已有描述[J.Organomet.Chem.2006，691：2686；Synth.Commun.2007，37：199；HeteroatChem2007，18：55；高等学校化学学报，2007，28：270-273；有机化学，2012，32：1715-1718]。方建新等描述了在乙酸中用分子溴溴化1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮得到2-溴-1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮；制备反应如下：

在上述典型的分子溴溴化反应中，溴元素的利用率小于50％。生成的副产物溴化氢没有回收，易造成环境污染。

张沐等[有机化学，2013，33(09)：1955-1959]描述了N-芳基-4-(吡啶-2-基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺衍生物的合成与生物活性；其中关键中间体2溴-1-(吡啶-2-基)-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮的制备反应如下：

在该溴化反应中，三溴化吡啶具有一定的选择性且反应条件温和副反应少，但是，它在潮湿空气中很容易分解释放出溴素，有一定的腐蚀性，不方便保存运输。其溴代反应中的原子利用率较溴素更低。

代黎等[药物实践杂志，2013，31(03)：195-197]描述了N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)溴化了1-环丙基-2-(2-氟苯基)乙酮，制备反应如下：

在本溴化反应中，NBS具有较高的选择性，但它有强刺激性，价格也相对较贵。

5-(1,2,4-三唑)噻唑衍生物具有较好的生物活性，其中部分4-芳基-5-(1,2,4-三唑)噻唑衍生物及其生物活性如表1所示：

表14-芳基-5-(1,2,4-三唑)噻唑衍生物的生物活性

刘建兵等[Syn.Commun,2011，41：3197-3206]描述了4-(2，4-二氟苯基-5-(1，2，4-三唑基)苯氨基噻唑衍生物的合成及其杀菌活性。为了增加活性三唑基的柔性，在三唑基和噻唑基之间增加了1碳原子合成了5-(1，2，4-三唑基-甲基)苯氨基噻唑衍生物。其化学结构分别为：

发明内容

本发明的目的在于提供化学结构式Ⅰ所示N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺：

其中，X¹、X³选自：氯、溴、氟、碘；X⁴选自：氢、氘、甲基、乙基、氯、溴、氟、碘；X²、X⁵选自：氢、氘、甲基、乙基；R选自：氢、甲基；n选自：0、1、2、3；Y选自：氢、C₁～C₂烷基、C₃～C₁₁直链烷基或支链烷基、C₁～C₂氯代烷基或二氯代烷基、C₃～C₅氯代直链烷基或氯代支链烷基、C₁～C₂溴代烷基、C₃～C₅溴代直链烷基或溴代支链烷基、C₁～C₂氟代烷基、C₃～C₅氟代直链烷基或氟代支链烷基、C₁～C₂碘代烷基、C₃～C₅碘代直链烷基或碘代支链烷基、苯基。

本发明的目的在于提供的N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺选自N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]乙酰胺、N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙酰胺、N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]氯乙酰胺、N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-氯丙酰胺、N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙烯酰胺、N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]异丁酰胺、N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-甲基丙烯酰胺、N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]氯乙酰胺、N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-氯丙酰胺、N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙烯酰胺、N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]异丁酰胺、N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-甲基丙烯酰胺、N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]肉桂酰胺或N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]肉桂酰胺。

本发明的目的在于提供的N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺的制备方法：其特征在于制备反应如下：

其中，X¹、X³选自：氯、溴、氟、碘；X⁴选自：氢、氘、甲基、乙基、氯、溴、氟、碘；X²、X⁵选自：氢、氘、甲基、乙基；R选自：氢、甲基；n选自：0、1、2、3；Y选自：氢、C₁～C₂烷基、C₃～C₁₁直链烷基或支链烷基、C₁～C₂氯代烷基或二氯代烷基、C₃～C₅氯代直链烷基或氯代支链烷基、C₁～C₂溴代烷基、C₃～C₅溴代直链烷基或溴代支链烷基、C₁～C₂氟代烷基、C₃～C₅氟代直链烷基或氟代支链烷基、C₁～C₂碘代烷基、C₃～C₅碘代直链烷基或碘代支链烷基、苯基；MBr选自：溴化钠或溴化钾。

本发明的目的在于提供的N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺具有良好的抗癌活性，可在制备抗癌药物中应用。

本发明的目的在于提供了N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺在制备神经氨酸酶抑制剂中的应用。

本发明的目的在于提供化学结构式Ⅱ所示2-溴-1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮的制备方法；其特征在于采用双氧水-MBr体系溴化1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮生成2-溴-1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮；MBr选自：溴化钠或溴化钾。

本发明的目的在于提供2-溴-1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮的制备方法，其特征在于1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮、MBr和双氧水的投料比(摩尔比)为1.0∶1.0∶1.0～1.0∶1.5∶3.5；MBr选自：溴化钠或溴化钾。

本发明的目的在于提供2-溴-1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮的制备方法，其特征在于采用双氧水-MBr体系溴化1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮的工艺，溴的利用率高；合成工艺中溴充分利用；节约了或充分利用资源，从源头上和本质上防治环境污染。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

1.设计制备了N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺，其具有良好的抗癌活性，可在制备抗癌药物中应用。

2.本发明首次采用双氧水氧化MBr溴化1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮生成2-溴-1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮；其反应机理如下：

从反应机理可知：采用双氧水-MBr体系溴化1-苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮的工艺，溴的利用率高；合成工艺中溴充分利用；节约了或充分利用资源，从源头上和本质上防治环境污染。

本发明首次发现N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺具有抗流感药物神经氨酸酶活性。

具体实施方式

以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

实施例1

2-溴-1-(2，4-二氯苯基)-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮的制备

0.1mol1-(2，4-二氯苯基)-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮、3mL乙酸、0.14mol溴化钠加入反应瓶中，70℃下搅拌，滴加0.3mol30％双氧水，反应3.0h；得2-溴-1-(2，4-二氯苯基)-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮，收率85.0％。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ:8.80(s，1H，三唑5-H)，8.03(s，1H，三唑3-H)，7.71(s，1H，CH)，7.66(d，J＝8.0Hz，1H，C₆H₃6-H)，7.52(d，J＝8.0Hz，1H，C₆H₃3-H)，7.44～7.42(m，1H，C₆H₃5-H)。

实施例2

2-溴-1-(2，4-二氯-5-氟苯基-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮的制备

0.1mol1-(2，4-二氯-5氟苯基)-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮、3mL乙酸、0.14mol溴化钠加入反应瓶中，70℃下搅拌，滴加0.3mol30％双氧水，反应3.0h；得2-溴-1-(2，4-二氯-5-氟苯基)-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮，收率88.0％。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ:8.76(s，1H，三唑5-H)，8.03(s，1H，三唑3-H)，7.73(s，1H，CH)，7.59～7.54(m，2H，C6H23，6-H)。

实施例3

4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺的制备

1mmol2-溴-1-(2，4-二氯-5-氟苯基)-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮、20mL乙醇，回流，加入1mmol硫脲，TLC监测，反应10min，冷却至40℃，滴加稀氨水至pH＝7-8，抽滤得浅黄色固体4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺，收率80.3％，m.p.251～253℃。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ：8.02(s，1H，三唑5-H)，7.94(s，1H，三唑3-H)，7.49～7.47(m，1H，苯基3-H)，7.26～7.25(m，1H，苯基6-H)，5.78(s，2H，NH₂)。

实施例4

4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺的制备

1mmol2-溴-1-(2，4-二氯苯基)-2-(1，2，4-三唑-1-基)乙酮、20mL乙醇，回流，加入1mmol硫脲，TLC监测，反应10min，冷却至40℃，滴加稀氨水至pH＝7-8，抽滤得浅黄色固体4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺，收率75.2％，m.p.237～239℃。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ：8.01(s，1H，三唑5-H)，7.89(s，1H，三唑3-H)，7.45(d，J＝2.4Hz，1H，苯基6-H)，7.34(d，J＝8.0Hz，1H，苯基3-H)，7.29(dd，J＝1.8Hz，J＝8.4Hz，1H，苯基5-H)，5.77(s，2H，NH₂)。

实施例5

N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]乙酰胺的制备

1mmol4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺、20mL二氯甲烷和2mL三乙胺，常温下滴加乙酰氯，TLC监测，反应2.5h，用NaHCO₃溶液、水洗涤，无水硫酸钠干燥后抽滤，旋蒸回收溶剂，柱层析得到浅黄色固体N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]乙酰胺，收率86.0％，m.p.216～219℃。¹HNMR(DMSO，400MHz)δ：12.65(s，1H，NH)，8.65(s，1H，三唑5-H)，8.20(s，1H，三唑3-H)，7.90～7.89(m，1H，苯基3-H)，7.64～7.62(m，1H，苯基6-H)，2.22(s，3H，CH₃)。

实施例6

N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]氯乙酰胺的制备

1mmol4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺、20mL二氯甲烷和2mL三乙胺，常温下滴加氯乙酰氯，TLC监测，反应2h，用NaHCO₃溶液、水洗涤，用无水硫酸钠干燥，抽滤后旋蒸回收溶剂，柱层析得到浅黄色液体N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]氯乙酰胺，收率52.0％，m.p.146～149℃。¹HNMR(DMSO，400MHz)δ：9.92(s，1H，NH)，8.07(s，1H，三唑5-H)，8.01(s，1H，三唑3-H)，7.53～7.51(m，1H，苯基3-H)，7.27～7.25(m，1H，苯基6-H)，2.22(s，2H，CH₂)。

实施例7

N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙酰胺的制备

1mmol4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺、5mL丙酸酐，室温搅拌10min，升温至55℃继续反应，TLC监测反应，反应5h，逐滴将反应液加入500mL冰水中，搅拌析出淡黄色固体，收集析出的固体，二氯甲烷萃取，干燥，旋蒸，固体合并得N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙酰胺，收率93.2％，m.p.169～171℃。¹HNMR(DMSO，400MHz)δ：12.60(s，1H，NH)，8.64(s，1H，三唑5-H)，8.20(s，1H，三唑3-H)，7.90～7.88(m，1H，苯基3-H)，7.64～7.61(m，1H，苯基6-H)，2.51(q，J＝7.6Hz，2H，COCH₂)，1.12(t，J＝7.6，3H，CH₃)。

实施例8

N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-氯丙酰胺的制备

1mmol4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺、20mL二氯甲烷和2mL三乙胺，常温下滴加2-氯丙酰氯，TLC监测，反应0.5h，用NaHCO₃溶液、水洗涤，用无水硫酸钠干燥，抽滤后旋蒸回收溶剂，柱层析得到浅黄色固体N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-氯丙酰胺，收率61.9％，m.p.173～176℃。¹HNMR(DMSO，400MHz)δ：13.10(s，1H，NH)，8.62(s，1H，三唑5-H)，8.17(s，1H，三唑3-H)，7.88～7.86(m，1H，苯基3-H)，7.62～7.60(m，1H，苯基6-H)，4.78(q，J＝8.0Hz，1H，CHCl)，1.63(d，J＝8.0Hz，3H，CH₃)。

实施例9

N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙烯酰胺的制备

1mmol4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺、20mL二氯甲烷和2mL三乙胺，常温下滴加丙烯酰氯，TLC监测，反应1.5h，用NaHCO₃溶液、水洗涤，用无水硫酸钠干燥，抽滤后旋蒸回收溶剂，柱层析得到浅黄色液体N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙烯酰胺，收率32.1％，m.p.175～177℃。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ：9.62(s，1H，NH)，8.07(s，1H，三唑5-H)，8.01(s，1H，三唑3-H)，7.51～7.50(m，1H，苯基3-H)，7.26～7.24(m，1H，苯基6-H)，6.61，5.98(2×d，J＝12.0Hz，2H，＝CH₂)，6.28(m，1H，CH＝)。

实施例10

N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]异丁酰胺的制备

1mmol4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺、20mL二氯甲烷和2mL三乙胺，常温下滴加异丁酰氯，TLC监测，反应2h，用NaHCO₃溶液、水洗涤，用无水硫酸钠干燥，抽滤后旋蒸回收溶剂，柱层析得到浅黄色液体N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]异丁酰胺，收率60.0％，m.p.167～169℃。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ：9.29(s，1H，NH)，8.06(s，1H，三唑5-H)，8.00(s，1H，三唑3-H)，7.51～7.49(m，1H，苯基3-H)，7.25～7.23(m，1H，苯基6-H)，2.71(m，1H，CH)，1.33，1.26(2×d，J＝6.8Hz，6H，2×CH₃)。

实施例11

N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-甲基丙烯酰胺的制备

1mmol4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺、20mL二氯甲烷和2mL三乙胺，常温下滴加异丁酰氯，TLC监测，反应4h，用NaHCO₃溶液、水洗涤，用无水硫酸钠干燥，抽滤后旋蒸回收溶剂，柱层析得到浅黄色液体N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-甲基丙烯酰胺，收率60.3％，m.p.105～107℃。¹HNMR(DMSO，400MHz)δ：12.73(s，1H，NH)，8.65(s，1H，三唑5-H)，8.21(s，1H，三唑3-H)，7.91～7.89(m，1H，苯基3-H)，7.69～7.66(m，1H，苯基6-H)，6.16，5.77(2×s，2H，C＝CH₂)，2.00(s，3H，CH₃)。

实施例12

N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]乙酰胺的制备

1mmol4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺、20mL二氯甲烷和2mL三乙胺，常温下滴加乙酰氯，TLC监测，反应1.5h，用NaHCO₃溶液、水洗涤，无水硫酸钠干燥后抽滤，旋蒸回收溶剂，柱层析得到浅黄色液体N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]乙酰胺，收率53.7％，m.p.266～268℃。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ：10.14(s，1H，NH)，8.06～8.03(d，J＝12.0Hz，1H，三唑5-H)，7.94～7.92(d，J＝8.0Hz，1H，三唑3-H)，7.50～7.47(d，J＝12.0Hz，1H，苯基6-H)，7.35(m，2H，苯基3，5-H)，2.50(s，3H，CH₃)。

实施例13

2-氯-N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]氯乙酰胺的制备

1mmol4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺、20mL二氯甲烷和2mL三乙胺，冰浴下滴加氯乙酰氯，TLC监测，反应1.5h，用NaHCO₃溶液、水洗涤，用无水硫酸钠干燥，抽滤后旋蒸回收溶剂，柱层析得到浅黄色固体2-氯-N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]氯乙酰胺，收率38.5％，m.p.115～118℃。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ：9.78(s，1H，NH)，8.05(s，1H，三唑5-H)，7.95(s，1H，三唑3-H)，7.49(s，1H，苯基6-H)，7.34(s，2H，苯基3，5-H)，4.35(s，2H，CH₂)。

实施例14

N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙酰胺的制备

1mmol4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺、5mL丙酸酐，室温搅拌10min，升温至55℃继续反应，反应3h，逐滴将反应液加入500mL冰水中，搅拌析出淡黄色固体，收集析出的固体，二氯甲烷萃取，干燥，旋蒸，固体合并得N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙酰胺，收率97.8％，m.p.208～210℃。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ：9.51(s，1H，NH)，8.05(s，1H，三唑5-H)，7.94(s，1H，三唑3-H)，7.48(s，1H，苯基6-H)，7.32(s，2H，苯基3，5-H)，2.48(q，J＝7.4Hz，2H，COCH₂)，1.27(t，J＝8.0Hz，3H，CH₃)。

实施例15

N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-氯丙酰胺的制备

1mmol4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺、20mL二氯甲烷和2mL三乙胺，常温下滴加2-氯丙酰氯，TLC监测，反应1h，用NaHCO₃溶液、水洗涤，用无水硫酸钠干燥，抽滤后旋蒸回收溶剂，柱层析得到浅黄色固体N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-氯丙酰胺，收率80.0％，m.p.179～182℃。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ：9.84(s，1H，NH)，8.05(s，1H，三唑5-H)，7.95(s，1H，三唑3-H)，7.48(s，1H，苯基6-H)，7.33(s，2H，苯基3，5-H)，4.68(q，J＝7.2Hz，1H，CHCl)，1.88(d，J＝7.2Hz，3H，CH₃)。

实施例16

N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙烯酰胺的制备

1mmol4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺、20mL二氯甲烷和2mL三乙胺，常温下滴加丙烯酰氯，TLC监测，反应1.5h，用NaHCO₃溶液、水洗涤，用无水硫酸钠干燥，抽滤后旋蒸回收溶剂，柱层析得到浅黄色固体N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙烯酰胺，收率31.3％，m.p.225～227℃。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ：9.54(s，1H，NH)，8.06(s，1H，三唑5-H)，7.95(s，1H，三唑3-H)，7.48(s，1H，苯基6-H)，7.33(s，2H，苯基3，5-H)，6.60，5.98(2×d，J＝16.8Hz，J＝10.8Hz，2H，＝CH₂)，6.27(m，1H，CH＝)。

实施例17

N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]异丁酰胺的制备

1mmol4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺、20mL二氯甲烷和2mL三乙胺，常温下滴加异丁酰氯，TLC监测，反应0.5h，用NaHCO₃溶液、水洗涤，用无水硫酸钠干燥，抽滤后旋蒸回收溶剂，柱层析得到浅黄色固体N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]异丁酰胺，收率51.8％，m.p.81～83℃。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ：9.63(s，1H，NH)，8.05(s，1H，三唑5-H)，7.94(s，1H，三唑3-H)，7.48(s，1H，苯基6-H)，7.33(s，2H，苯基3，5-H)，2.71(m，1H，CH)，1.33，1.29(2×d，J＝6.8Hz，6H，2×CH₃)。

实施例18

N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-甲基丙烯酰胺的制备

1mmol4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺、20mL二氯甲烷和2mL三乙胺，常温下滴加异丁酰氯，TLC监测，反应1.5h，用NaHCO₃溶液、水洗涤，用无水硫酸钠干燥，抽滤后旋蒸回收溶剂，柱层析得到浅黄色液体N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-甲基丙烯酰胺，收率71.8％，m.p.91～94℃。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ：9.74(s，1H，NH)，8.04(s，1H，三唑5-H)，7.92(s，1H，三唑3-H)，7.64～7.60(m，1H，苯基6-H)，7.47～7.42(m，2H，苯基3，5-H)，5.68(d，J＝12.0Hz，2H，C＝CH₂)，2.02(s，3H，CH₃)。

实施例19

N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]肉桂酰胺的制备

0.50g4-(2,4-二氯-5-氟苯基)-5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-胺、20mL无水二氯甲烷和2mL三乙胺中，常温滴加肉桂酰氯，TLC监测反应2.0h，柱层析分离得灰色固体N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]肉桂酰胺0.45g，收率64.3％，m.p.136～138℃。¹HNMR(CDCl₃，500MHz)δ：6.52(s，1H，＝CH)，6.55(s，1H，＝CH)，7.41～7.59(m,7H,C₆H₅,C₆H₂)，7.85(s，1H，噻唑环3-H)，7.88(s，1H，噻唑环5-H)。

实施例20

N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]肉桂酰胺的制备

4-(2,4-二氯苯基)-5-(1H-1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-胺(0.47g，1.5mmol)、20mL无水二氯甲烷和2mL三乙胺中。常温滴加肉桂酰氯，TLC监测反应2.5h，柱层析分离得黄色固体N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]肉桂酰胺0.28g，收率42.4％，m.p.125～128℃。¹HNMR(CDCl₃，500MHz)δ：6.52(s，1H，＝CH)，6.55(s，1H，＝CH)，7.43～7.59(m,8H,C₆H₅,C₆H₃)，7.85(s，1H，噻唑环3-H)，7.88(s，1H，噻唑环5-H)。

实施例21

N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺的抗肿瘤活性

1.抗肿瘤活性原理

MTT法生物活性测试又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT分析法以活细胞代谢物还原剂噻唑蓝[3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基溴化四氮唑；3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazoliumbromide，MTT]为基础。MTT是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲瓒(formazon)，而死细胞则无此功能。用DMSO溶解formazon后，在一定波长下用酶标仪测定光密度值，既可定量测出细胞的存活率。根据光密度值的变化观察样品对肿瘤细胞的抑制作用。

2.抗肿瘤活性实验

试样：N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺(Ⅰ)。

其中，X¹、X³选自：氯、溴、氟、碘；X⁴选自：氢、氘、甲基、乙基、氯、溴、氟、碘；X²、X⁵选自：氢、氘、甲基、乙基；R选自：氢、甲基；n选自：0、1、2、3；Y选自：氢、C₁～C₂烷基、C₃～C₁₁直链烷基或支链烷基、C₁～C₂氯代烷基或二氯代烷基、C₃～C₅氯代直链烷基或氯代支链烷基、C₁～C₂溴代烷基、C₃～C₅溴代直链烷基或溴代支链烷基、C₁～C₂氟代烷基、C₃～C₅氟代直链烷基或氟代支链烷基、C₁～C₂碘代烷基、C₃～C₅碘代直链烷基或碘代支链烷基、苯基。

细胞系：宫颈癌细胞系Hela(中南大学湘雅医学院细胞库提供)。

试剂：噻唑蓝(MTT)、RPMI1640培养液、新生牛血清、抗生素(美国英杰生命技术公司)；胰酶(美国AMRESCO公司)；96孔培养板(美国英杰生命技术公司)；二甲基亚砜(美国Sigma公司)。

仪器：HFsafe-1500型超净工作台、HF151UV型CO₂培养箱(上海力申科学仪器有限公司)；XSP-15C型倒置显微镜(上海长方光学仪器有限公司)；MultiskanMK3型酶标仪(美国Thermo公司)；超纯水制备仪(美国Milli-Q公司)。

实验操作：试样对于Hela细胞的测试。每种细胞的实验操作过程相同，一次实验过程中，每种试样设置5个浓度梯度(0.010μmol/mL、0.030μmol/mL、0.100μmol/mL、0.300μmol/mL和1.000μmol/mL)，每个浓度四个平行试样，每组实验平行3次，并通过空白组对照得出结论。酶标仪检测各孔OD值，检测波长570nm。

3.抗肿瘤活性评价

1)细胞抑制率计算：

2)IC₅₀值计算

试样浓度对数值与细胞抑制率线性回归，利用软件计算试样对细胞的半数抑制浓度IC₅₀值。优选化合物对于Hela细胞的IC₅₀见表2。

表2N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺对于Hela细胞的抑制活性(μmol/mL)

抗肿瘤活性结果表明：N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺对于Hela细胞具有抑制活性，可以用于制备抗Hela细胞的抗癌药物。

实施例22

N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺的抗流感病毒神经氨酸酶活性

1.实验原理

化合物MUNANA是神经氨酸酶的特异性底物，在神经氨酸酶作用下产生的代谢产物在360nm照射激发下，可以产生450nm荧光，荧光强度的变化可以灵敏地反应神经氨酸酶活性。酶都来自A/PR/8/34(H₁N₁)病毒毒株。

2.实验方法

在酶反应体系中，一定浓度样品与流感病毒神NA悬浮于反应缓冲液中(pH6.5)，加入荧光底物MUNANA启动反应体系，37？C孵育40分钟后，加反应终止液终止反应。在激发波长360nm和发射波长为450nm的参数条件下，测定荧光强度值。反应体系的荧光强度可以反映酶的活性。根据荧光强度的减少量可以计算化合物对NA活性的抑制率。

3.检测样品：N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺(Ⅰ)。

其中，X¹、X³选自：氯、溴、氟、碘；X⁴选自：氢、氘、甲基、乙基、氯、溴、氟、碘；X²、X⁵选自：氢、氘、甲基、乙基；R选自：氢、甲基；n选自：0、1、2、3；Y选自：氢、C₁～C₂烷基、C₃～C₁₁直链烷基或支链烷基、C₁～C₂氯代烷基或二氯代烷基、C₃～C₅氯代直链烷基或氯代支链烷基、C₁～C₂溴代烷基、C₃～C₅溴代直链烷基或溴代支链烷基、C₁～C₂氟代烷基、C₃～C₅氟代直链烷基或氟代支链烷基、C₁～C₂碘代烷基、C₃～C₅碘代直链烷基或碘代支链烷基、苯基。

4.活性结果

优选化合物N-[4-(2，4-二氯-5-氟苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]氯乙酰胺和N-[4-(2，4-二氯苯基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙烯酰胺在反应系统中检测浓度40.0μg/mL时对神经氨酸酶的抑制率分别为22.4％和29.9％。

N-[4-苯基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]酰胺及其制备与应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。