专利摘要
本发明公开了黄腐酸盐在制备促血管新生药物中的应用，经临床研究表明，血管新生为缺血性血管疾病的血运重建开辟了新的治疗途径。实验结果显示，本发明所述的黄腐酸盐具有脐静脉内皮细胞增殖促进活性及鸡胚尿囊膜血管新生促进活性，可用于缺血性血管疾病（例如：外周动脉缺血性血管疾病、血管闭塞性脉管炎及糖尿病足病等）的促血管新生治疗。
权利要求
1.黄腐酸盐在制备促进血管新生药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的黄腐酸盐在制备促进血管新生药物中的应用，其特征在于：黄腐酸盐为黄腐酸钠或黄腐酸钾。
说明书
技术领域
本发明涉及黄腐酸盐的新用途，具体是涉及黄腐酸盐在制备促血管新生药物中的应用。
背景技术
缺血性血管疾病如外周动脉缺血性血管疾病、血管闭塞性脉管炎、糖尿病足病等已经成为威胁人类健康的重大疾病。目前对其主要的治疗措施包括常规的活血化瘀、血运重建等。然而有相当一部分患者药物治疗难以见效，也不适于常规血运重建术处理或手术预后较差，因此必须开辟新的治疗途径。
近年来，促血管新生已成为缺血性血管疾病的治疗新方向，是当前研究的热点之一。血管新生主要涉及基底膜的降解、内皮细胞迁移、增殖和血管形成等过程，其中内皮细胞的增殖是血管新生的最主要指标之一。因此临床上希望发现能够调节内皮细胞功能，促进血管新生的药物。
促血管新生研究中最常见的是外源性促血管生长因子，如内皮细胞生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）等，但将其作为药物治疗存在基因表达是否可靠，全身给药是否会发生其它部位的血管异常生长，甚至发生肿瘤的可能。而外源性促血管生长因子蛋白还存在半衰期短、生物利用率低，要反复给药，易出现副作用等问题。中医学讲究，谨察阴阳所在而调之，以平为期，中病即止，非常注重整体辨证论治，而不是仅仅依靠外源补充大量促血管生长因子来打破机体的平衡。
黄腐酸是由动植物的残骸，经过微生物的分解和转化，以及地球物理化学的一系列过程形成和积累起来的一类有机物质。含有多种活性基团，如羧基、酚羟基、醇羟基、醌基、羰基等，具有多种生物活性，在中医中药方面的应用历史悠久。国内外大量实验研究和临床疗效表明其有活血化瘀、消炎、抗菌等显著功效，但其促血管新生作用目前尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种黄腐酸盐的新医药用途，即黄腐酸盐在制备促血管新生药物中的应用，其促进血管新生是通过促进内皮细胞增殖实现的。
本发明中所述黄腐酸盐为黄腐酸钠或黄腐酸钾。
本发明所述的黄腐酸钠或黄腐酸钾是可通过公司或企业购得的质量标准符合要求的黄腐酸钠或黄腐酸钾，或着由黄腐酸，及H2O2催化氧化降解法制得的黄腐酸（例如：参照申请号200810233669.X“褐煤氧化降解生产腐植酸及其盐的方法）经碱调PH至7-8所得到的原料。
本发明所述促血管新生药物的成分或有效成分是黄腐酸钠/钾盐，还可加入一种或多种药物上可接受的辅料，以改善药物吸收效果或便于服用，制成粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂等医学上认可的任何一种剂型。
本发明所述的辅料包括药学领域常规的填充剂、稀释剂、粘合剂、赋形剂、吸收促进剂、表面活性剂和稳定剂等，必要时还可加入香味剂、色素和甜味剂等。
本发明利用人脐静脉内皮细胞株（HUVECs），通过MTT实验，检测黄腐酸钠/钾盐对脐静脉内皮细胞的影响。实验结果显示，黄腐酸钠/钾盐浓度在100mg/L、200mg/L时能够有效促进脐静脉内皮细胞的增殖。
本发明利用鸡胚尿囊膜实验模型，通过鸡胚尿囊膜上血管的生长情况，测试黄腐酸钠/钾盐对血管新生的影响。实验结果显示，黄腐酸钠/钾盐能够有效促进鸡胚尿囊膜血管的生长，在给药浓度为200 mg/L、400 mg/L时，可以显著促进血管新生，作用与阳性药物相似，显示出较强的促血管新生活性。
由于黄腐酸盐在制备促进血管新生药物中的应用属于首次发现，因此，无论是黄腐酸盐单独使用为活性成分制成的药剂，还是利用黄腐酸盐与其他活性成分配合使用制成的药剂，均在本申请的保护范围之内。本发明的药物具有以下优点：（1）疗效显著；（2）安全性高；（3）价格低廉，可以减轻病人的经济负担。
附图说明
图1是本发明中不同浓度的黄腐酸钠盐作用于鸡胚尿囊膜，促进血管新生的血管形态图；
图2是本发明中不同浓度的黄腐酸钠盐作用于鸡胚尿囊膜，对鸡胚尿囊膜血管新生促进作用的结果数据经IPP软件处理后血管面积比较柱状图，图中：n=6；与空白对照组相比，**P≤0.01，*P≤0.05（P≤0.05表示差异显著；P≤0.01表示差异非常显著）。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围并不局限于所述内容，本实施例中所用试剂如无特殊说明均为常规市售试剂或按常规方法制备的试剂，使用的方法如无特殊说明均为常规方法。
实施例1：黄腐酸钠/钾盐对人脐静脉内皮细胞株（HUVECs）增殖的影响实验（MTT法）
本实施例研究黄腐酸钠/钾盐对人脐静脉内皮细胞株（HUVECs）增殖的影响，实验方法如下：
将人脐静脉内皮细胞株（HUVECs，购自美国ATCC公司）在37℃，5%CO2条件下培养，待长至对数期后将其按照每孔3000个细胞的密度接种至96孔板中。在上述条件下再培养24h后，将黄腐酸钠/钾盐配制成浓度为50mg/L、100mg/L、200mg/L、300mg/L、400mg/L的溶液加至96孔板中，继续培养48h，48h后加入MTT（3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐）每孔20μL继续培养4 h，弃上清液，每孔加入150 μLDMSO，震荡10min，于酶标仪490 nm处测吸光度OD值。采用SPSS16.0统计软件，单因素方差分析或student-t检验统计分析实验结果，以 ±s表示。
实验结果如表1-2所示，当黄腐酸钠/钾盐浓度为100mg/L、200 mg/L时，细胞的增殖活性显著增加，促进率明显。
表1：黄腐酸钠对HUVECs细胞增殖的影响（MTT法）（n=8， ±s）
注： 与空白对照组比较，**P≤0.01，*P≤0.05（P≤0.05表示差异显著；P≤0.01表示差异非常显著）。
表2：黄腐酸钾对HUVECs细胞增殖的影响（MTT法）（n=8， ±s）
注： 与空白对照组比较，*P≤0.05（P≤0.05表示差异显著）。
实施例2：黄腐酸钠/钾盐对鸡胚尿囊膜血管新生促进作用实验
本实施例研究黄腐酸钠/钾盐对鸡胚尿囊膜血管新生促进作用，实验方法如下：
取新鲜种鸡蛋在温度为37.8 ℃，CO2浓度为5%，湿度适宜的条件下孵育7天。在气室端开窗（1×1 cm），用直径为6 mm的无菌滤纸片作为给药载体，放置于尿囊膜上，按照100、200、400、600mg/L的不同浓度给药组给药，设置空白组（生理盐水组）和阳性对照药组（贝复济），用透明胶带封窗，在上述条件下继续孵育；72h后，取下尿囊膜组织，将其放入脱水液（甲醇:丙酮=1:1）脱水固定处理15 min后，对尿囊膜组织表面血管用数码相机微距拍照，用IPP图像处理软件对图片中血管面积进行计算。采用SPSS16.0统计软件，单因素方差分析或student-t检验统计分析实验结果。
图1中可以明显看出，当黄腐酸钠的给药浓度为400、600 mg/L时，血管生长明显受到促进。图2显示了经面积计算后血管面积的柱状图，从图中可以看出当给药浓度为400、600 mg/L，血管面积较生理盐水组明显升高且存在显著性差异。黄腐酸钾对鸡胚尿囊膜血管新生促进作用实验结果见表3。
表3：黄腐酸钾促血管新生作用（n=6， ±s）
注： 与空白对照组比较，*P≤0.05（P≤0.05表示差异显著）。
结果表明，黄腐酸钠/钾盐可以促进血管新生，在一定浓度时其作用类似阳性对照药物贝复济。
实施例3：黄腐酸钠/钾盐片剂的制备
处方（1000片）：黄腐酸钠/钾盐50g，预胶化淀粉125g，羧甲基纤维素钠15g，微晶纤维素50g，立崩30g，白砂糖粉114g，硬脂酸镁6g，包衣粉10g。
按处方量将黄腐酸钠/钾盐加入预胶化淀粉、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、立崩、白砂糖粉混匀，制成颗粒，加入硬脂酸镁，混匀压片后包衣，1000片（每片含有黄腐酸钠/钾盐0.125g）。
实施例4：黄腐酸钠/钾盐胶囊剂的制备
处方（1000粒）：黄腐酸钠/钾盐100g，淀粉200g。
先将淀粉干燥，过七号筛，再将黄腐酸钠/钾盐加入干淀粉中混匀，过七号筛两次，充分混匀，检查合格后，分装入胶囊。
实施例5：黄腐酸钠/钾盐颗粒剂的制备
处方（1000袋）：黄腐酸钠/钾盐350g，糖粉6000g，可溶性糊精2650g，质量百分比浓度为50%乙醇适量。
将处方量的黄腐酸钠/钾盐加入糖粉和糊精混合粉碎3次，过80目筛，再加入乙醇润湿剂进行混合制成软材，通过机械挤压过筛网得到湿颗粒，干燥后分装。
黄腐酸盐在制备促血管新生药物中的应用专利购买费用说明
Q：办理专利转让的流程及所需资料
A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。
1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。
2：按规定缴纳著录项目变更手续费。
3：同时提交相关证明文件原件。
4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。
Q:专利著录项目变更费用如何缴交
A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式
Q：专利转让变更，多久能出结果
A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。
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