专利摘要

本发明公开了一种以2‑乙酰基‑3‑乙基吡嗪缩氨基硫脲为配体的铜化合物及其合成方法和应用。该铜化合物的合成方法为：取2‑乙酰基‑3‑乙基吡嗪和氨基硫脲，以甲醇为溶剂反应，反应后转入烧杯中挥发结晶，得到配体2‑乙酰基‑3‑乙基吡嗪缩氨基硫脲晶体，将晶体过滤后用甲醇洗涤；取配体2‑乙酰基‑3‑乙基吡嗪缩氨基硫脲和CuCl2或CuBr2，以及乙腈和甲醇的混合溶剂反应，反应后将反应物转移至烧杯静置、冷却，挥发结晶，结晶后收集晶体，即合成为目标化合物。并对合成的铜化合物的体外抗胶质瘤及其耐药株活性进行了研究，结果表明，与金属铜形成缩氨基硫脲铜配合物，活性大大提高，具有更加优良的抗胶质瘤活性，以及一定程度上克服了药物耐药性。

权利要求

1.一种以2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲为配体的铜化合物的合成方法，其特征在于：所述铜化合物的结构式如下式C1-C6所示，

所述铜化合物的合成路线如下：

所述C1-C6所示铜化合物的合成方法，包括以下步骤：

(1)取2-乙酰基-3-乙基吡嗪和氨基硫脲，以甲醇为溶剂反应，反应后转入烧杯中挥发结晶，得到配体2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲晶体，将晶体过滤后用甲醇洗涤；

(2)取步骤(1)的配体2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲和CuCl2或CuBr2，以及乙腈和甲醇的混合溶剂反应，反应后将反应物转移至烧杯静置、冷却，挥发结晶，结晶后收集晶体，即合成为目标化合物。

2.根据权利要求1所述的铜化合物的合成方法，其特征在于：所述的甲醇采用体积浓度为20～80％的甲醇，乙腈采用分析纯。

3.根据权利要求1所述的铜化合物的合成方法，其特征在于：所述反应是在溶剂的回流温度下采用回流反应，反应是否完全采用薄层层析跟踪检测。

4.根据权利要求1所述的铜化合物的合成方法，其特征在于：步骤(1)中，2-乙酰基-3-乙基吡嗪和氨基硫脲的物质的量之比为化学计量比，为1:1；所述溶剂的用量以能溶解参加反应的原料为宜。

5.根据权利要求1所述的铜化合物的合成方法，其特征在于：步骤(2)中，将反应所得的滤液静置、析晶，收集晶体；配体2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲和CuCl2或CuBr2的物质的量之比为化学计量比，为1：1；

所述溶剂的用量以能溶解参加反应的原料为宜；

所述乙腈:甲醇＝3:1。

6.根据权利要求1所述的铜化合物的合成方法制备的铜化合物在制备抗胶质瘤药物中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及铜化合物的合成，具体涉及以2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲为配体的铜化合物及其合成方法和应用。

背景技术

脑胶质瘤是发病率最高的原发性的颅内恶性肿瘤，约占颅内肿瘤的46％，现有的治疗手段如手术、放疗、化疗，其治愈率也不到30％。目前临床常用脑肿瘤治疗药物，通常是小分子药物，但是在使用过程中面临很多严峻的考验。1)药物自身性质的影响，很多抗感染或抗肿瘤的药物是难溶性小分子药物，这为临床给药，尤其是静脉给药带来困难；2)产生耐药性，无论是造成感染的病原体还是引发肿瘤的肿瘤细胞，在进行连续多次给药后，易产生耐药性而使治疗无效。

目前，合成铜配合物的缩氨基硫脲有很多，例如有人研究2-乙酰吡啶缩氨基硫脲铜配合物的合成，只研究了抑菌性，没有研究其它的机制，也有人研究2-苯并吡啶三类杂环类缩氨基硫脲席夫碱化合物，本申请以2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲为配体合成铜化合物，研究了它抗胶质瘤及其耐药株活性方面的研究实验，证明其具有很强抗胶质瘤作用，以及一定程度上克服了药物耐药性。

经检索，很少有此类结构的化合物报道，并且尚未见有关于其在胶质瘤活性方面的应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种以2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲为配体的铜化合物，并对这些铜化合物进行了的抗胶质瘤及其耐药株活性实验，证明其具有很强抗肿瘤作用，以及一定程度上克服了药物耐药性。

本发明还提供了上述铜化合物的合成方法，其操作简单，便于实施。

本发明还提供了上述铜化合物在制备抗胶质瘤药物中的应用。

实现本发明目的的技术方案是：

一种以2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲为配体的铜配合物，其结构式如下式C1-C6所示，

上述式C1-C6所示铜化合物的合成路线如下：

上述式C1-C6所示铜化合物的合成方法，包括以下步骤：

(1)取2-乙酰基-3-乙基吡嗪和氨基硫脲，以甲醇为溶剂反应，反应后转入烧杯中挥发结晶，得到配体2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲晶体，将晶体过滤后用甲醇洗涤2-3次；

(2)取步骤(1)的配体2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲和CuCl2或CuBr2，以及乙腈和甲醇的混合溶剂反应，反应后将反应物转移至烧杯静置、冷却，挥发结晶，结晶5-7天后收集晶体，即合成目标化合物。

上述合成方法中，所述的甲醇优选采用体积浓度为20～80％的甲醇，所述的乙腈采用分析纯。

上述合成方法中，所述的反应优选是在20℃-70℃至溶剂的回流温度范围内进行，反应采用的方式可以为常温条件下反应、常规的加热反应或回流反应，优选采用回流反应，反应是否完全可以可采用薄层层析(TLC)跟踪检测。

上述合成方法的步骤(1)中，2-乙酰基-3-乙基吡嗪和氨基硫脲的物质的量之比为化学计量比，通常为1:1；所述溶剂的用量以能溶解参加反应的原料为宜，通常情况下，1mmol氨基硫脲用4～10mL的溶剂来溶解，然后加入一定比例的2-乙酰基-3-乙基吡嗪。

上述合成方法的步骤(2)中，将反应所得的滤液静置、析晶，收集晶体。本步骤中，通常选择在室温条件下进行静置、析晶。进一步地，在静置析晶时，在盛装滤液的容器开口上罩上一层薄膜，然后在薄膜上开设若干个小孔使溶剂缓慢挥发，以获得更好的析晶效果。本步骤中，配体2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲和CuCl2/CuBr2的物质的量之比为化学计量比，为1：1。

上述合成方法的步骤(2)中，所述溶剂的用量以能溶解参加反应的原料为宜，通常情况下，1mmol的2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲用4～10mL的溶剂来溶解，CuCl2或CuBr2用1mL溶剂溶解。在具体的溶解步骤中，可将配体2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲和CuCl2或CuBr2分别用溶剂溶解，再混合在一起反应；也可将配体2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲和CuCl2或CuBr2混合后再加溶剂溶解。所述乙腈和甲醇之间的配比可以任意组合，最后选择最佳的，最佳配比为乙腈:甲醇＝3:1。

本发明进一步包括以铜配合物C1-C6为活性成分制备的抗胶质瘤药物。

与现有技术相比，本发明提供一类新配体2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲的铜(II)金属配合物并对六种铜配合物的体外抗胶质瘤及其耐药株活性研究表明，缩氨基硫脲也具有抗肿瘤活性，但活性不高，与金属铜形成缩氨基硫脲铜配合物，该铜配合物的活性大大提高，具有更加优良的抗胶质瘤活性，以及一定程度上克服了药物耐药性。

附图说明

图1为实施例1合成的C1铜化合物的单晶结构图。

图2为实施例2合成的C2铜化合物的单晶结构图。

图3为实施例3合成的C3铜化合物的单晶结构图。

图4为实施例4合成的C4铜化合物的单晶结构图。

图5为实施例5合成的C5铜化合物的单晶结构图。

图6为实施例6合成的C6铜化合物的单晶结构图。

图7为实施例1-6铜化合物配体的结构图。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步的详述,以更好地理解本发明的内容,但本发明并不限于以下实施例。

实施例1：C1铜化合物的合成

具体合成方法为：

(1)将10mmol的2-乙酰基-3-乙基吡嗪溶解于20mL的甲醇中，于60℃搅拌15min，随后将20mL,10mmol氨基硫脲的甲醇溶液逐滴加入到上述溶液中，于60℃回流搅拌反应12h后，冷却至室温后倒入烧杯中挥发，将上述所得淡黄色晶体过滤后用甲醇洗涤3次，得配体(L1)；

(2)将含有CuCl2·2H2O(170.48mg,1mmol)30mL的乙腈溶液，滴加到含有1mmol，上述L1配体的10mL甲醇溶液中，于65℃回流搅拌24h，将反应后溶液过滤到50mL烧杯中，并用保鲜膜封口，针扎15个孔于常温挥发数日，得到黄褐色晶体(C1)，其单晶结构如图1所示；

产率：66％，IR,cm-1:3381(s,amide),3177(s,NH),1631(s),1551(s),1475(s),1424(s,aromatic),1350(s,C＝N),1297(s,thioamide),1205(s),1155(s),1122(m),1032(m,C-H),867(m,C＝S),783(s).EIMS m/z:calcd for C9H11N5SClCu,318.97[M-H]+。

实施例2：C2铜化合物的合成

具体合成方法为：

(1)将10mmol的2-乙酰基-3-乙基吡嗪溶解于20mL的甲醇中，于60℃搅拌15min，随后将20mL,10mmol 4-甲基氨基硫脲甲醇溶液逐滴加入到上述溶液中，于60℃回流搅拌反应12h后，冷却至室温后倒入烧杯中挥发，将上述所得淡黄色晶体过滤后用甲醇洗涤3次，得配体(L2)；

(2)将含有CuBr2(223.35mg,1mmol)30mL的乙腈溶液，滴加到含有1mmol上述L2配体的10mL甲醇溶液中，于65℃回流搅拌24h，将反应后溶液过滤到50mL烧杯中，并用保鲜膜封口，针扎15个孔于常温挥发数日，得到黄褐色晶体(C2)，其单晶结构如图2所示；

产率：59％，IR,cm-1:IR,cm-1:3308(s,amide),2936(s,NH),1533(s),1505(s),1486(s),1390(s,aromatic),1281(s,C＝N),1236(s,thioamide),1162(s),1097(m),1061(m),985(m,C-H),853(m,C＝S),819(s).EIMS m/z:calcd for C10H14N5SBrCu,377.94[M-H]+。

实施例3：C3铜化合物的合成

具体合成方法为：

(1)将10mmol的2-乙酰基-3-乙基吡嗪溶解于20mL甲醇中，于60℃搅拌15min，随后将20mL,10mmol 4-苯基-3-硫代氨基脲甲醇溶液逐滴加入到上述溶液中，于60℃回流搅拌反应12h后，冷却至室温后倒入烧杯中挥发，将上述所得淡黄色晶体过滤后用甲醇洗涤3次，得配体(L3)，；

(2)将含有CuBr2(223.35mg,1mmol)30mL的乙腈溶液，滴加到含有1mmol上述L3配体的10mL甲醇溶液中，于65℃回流搅拌24h，将反应后溶液过滤到50mL烧杯中，并用保鲜膜封口，针扎15个孔于常温挥发数日，得到黄褐色晶体(C3)，其单晶结构如图3所示；

产率：53％，IR,cm-1:3301(s,amide),2930(s,NH),1597(s),1573(s),1536(s),1488(m,aromatic),1399(s,C＝N),1320(s,thioamide),1249(s),1148(s),983(m),857(m,C-H),760(m,C＝S),693(s).EIMS m/z:calcd for C15H16N5BrCu,440.94[M-Br]+。

实施例4：C4铜化合物的合成

具体合成方法为：

(1)将10mmol的2-乙酰基-3-乙基吡嗪溶解于20mL的甲醇中，于60℃搅拌15min，随后将20mL,10mmol 4,4-二甲基-3-氨基脲甲醇溶液逐滴加入到上述溶液中，于60℃回流搅拌反应12h后，冷却至室温后倒入烧杯中挥发，将上述所得淡黄色晶体过滤后用甲醇洗涤3次，得配体(L4)；

(2)将含有CuBr2(223.35mg,1mmol)30mL的乙腈溶液，滴加到含有1mmol上述L4配体的10mL甲醇溶液中，于65℃回流搅拌24h，将反应后溶液过滤到50mL烧杯中，并用保鲜膜封口，针扎15个孔于常温挥发数日，得到黄褐色晶体(C4)，其单晶结构如图4所示；

产率：72％，IR,cm-1:3433(s,amide),2974(s,),2925(m,aromatic hydrogen),1631(s),1532(s,aromatic),1389(s,C＝N),1285(s,thioamide),1235(s),1154(s),1088(m),1058(m,C-H),865(w,C＝S).EIMS m/z:calcd for C11H16N5BrCu,392.94[M-Br]+。

实施例5：C5铜化合物的合成

具体合成方法为：

(1)将10mmol的2-乙酰基-3-乙基吡嗪溶解于20mL的甲醇中，于60℃搅拌15min，随后将20mL,10mmol 4,4-二乙基-3-氨基脲甲醇溶液逐滴加入到上述溶液中，于60℃回流搅拌反应12h后，冷却至室温后倒入烧杯中挥发，将上述所得淡黄色晶体过滤后用甲醇洗涤3次，得配体(L5)

(2)将含有CuBr2(223.35mg,1mmol)30mL的乙腈溶液，滴加到含有1mmol上述L5配体的10mL甲醇溶液中，于65℃回流搅拌24h，将反应后溶液过滤到50mL烧杯中，并用保鲜膜封口，针扎15个孔于常温挥发数日，得到黄褐色晶体(C5)，其单晶结构如图5所示；

产率：60％，IR,cm-1:3433(s,amide),2973(s),2820(m,aromatic hydrogen),1503(s),1449(s),1389(s,aromatic),1359(s,C＝N),1320(s,thioamide),1256(s),1192(s),1144(m),850(m,C＝S),629(s).EIMS m/z:calcd for C13H21N5BrCu,420.97[M-Br]+。

实施例6：C6铜化合物的合成

具体合成方法为：

(1)将10mmol的2-乙酰基-3-乙基吡嗪溶解于20mL的甲醇中，于60℃搅拌15min，随后将20mL,10mmol 3-哌啶基氨基硫脲乙腈溶液逐滴加入到上述溶液中，于60℃回流搅拌反应12h后，冷却至室温后倒入烧杯中挥发，将上述所得淡黄色晶体过滤后用甲醇洗涤3次，得配体(L6)

(2)将含有CuBr2(223.35mg,1mmol)30mL的乙腈溶液，滴加到含有1mmol上述L5配体的10mL甲醇溶液中，于65℃回流搅拌24h，将反应后溶液过滤到50mL烧杯中，并用保鲜膜封口，针扎15个孔于常温挥发数日，得到黄褐色晶体(C6)，其单晶结构如图5所示；

产率：47％，IR,cm-1:3435(s,amide),2911(s),1632(s),1582(s),1495(s,aromatic),1385(s,C＝N),1328(s,thioamide),1156(s),1058(s),881(s),755(m,C＝S),509(s).EIMS m/z:calcd for C14H19ClN5BrCu,432.97[M-Br]+。

为说明本发明以氨基硫脲为配体的铜化合物对，申请人对上述化合物以及上述实施例1～6制得的化合物均进行了的抗肿瘤活性实验。

一、化合物的体外抗肿瘤活性测试

1、细胞的接种与培养

所选细胞株均置于37℃、5％CO2充分湿化条件下的培养箱中，接种于含10％，1％P/S(青链霉素)的DMEM培养液中培养。用倒置显微镜观察细胞生长情况，隔天换液，细胞密度达至90％传代一次，接种时以0.25％胰蛋白酶消化传代，通常取传代3～4次，取对数生长期细胞用于实验。

2、细胞生长抑制实验(MTT法)

MTT比色法，是一种检测细胞生长和存活的方法。检测原理：与死细胞不同，外源性MTT能被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中。二甲基亚砜(DMSO)能把细胞中的甲瓒溶解，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等，具有灵敏度高、经济等特点。

3、具体实施步骤

取处于对数生长期的细胞，每孔180μL(约4500-5000个细胞)培养基接种于96孔培养板，于37℃、5％CO2充分湿化条件下培养24h。待细胞贴壁后，按每孔20μL的量加入样品，每个样品设5个复孔，同时设定相应的空白对照。继续培养48h后，每孔加入10μL MTT试剂(浓度为5mg/mL)，继续孵育4h后，吸弃上清液，每孔再加入100μL DMSO，轻微震荡反应5～8min，使结晶颗粒充分溶解。空白对照组调零，用酶标仪以490nm波长测定去除本底光吸收值后的吸光度值( 值)，计算细胞增殖抑制率，对初筛抗肿瘤效果好的受试化合物，继续用5个浓度梯度继续做相应细胞株的IC50值，所有实验均重复3次后取平均值。实验结果详见下表1。

表1.化合物对不同肿瘤细胞株的半抑制率浓度(IC50，μM)

实验结果表明：2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲铜配合物相对于其配体，对于胶质瘤及其耐药株具有更加优秀的抗肿瘤活性，对于正常细胞的胶质细胞毒性相对较低，并且在一定程度上降低了药物的耐药性。

一种以2-乙酰基-3-乙基吡嗪缩氨基硫脲为配体的铜化合物及其合成方法和应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。