专利摘要

本发明技术属于黄酒酿造的技术领域,具体涉及一种富含γ‑氨基丁酸的红曲酒酿造方法。本发明的目的而采用技术方案如下：按照原料配方的重量份配方比例，将糖化液50kg、酵母菌种子液3kg、红曲粉4kg混合进行前发酵获得前发酵醪；加入耐久肠球菌发酵醪液25kg进行后发酵获得成熟红曲酒醪；经过滤、勾兑、杀菌获得红曲清酒。经检测，红曲酒中γ‑氨基丁酸的含量为1.00～1.50g/L。本发明丰富了红曲酒的口感和营养，提高红曲酒的养生保健附加值。

权利要求

1.一种富含γ-氨基丁酸的红曲酒酿造方法，其特征在于：

(1)酿造红曲酒原料配方重量份比例为：

耐久肠球菌发酵醪液 25kg

糖化液 50kg

酵母菌种子液 3kg

红曲粉 4kg；

其中: 耐久肠球菌发酵醪液含有GABA 3.35～4.28 g/L；以葡萄糖计糖化液糖度达到220～280g/L；

(2)前发酵：

按照上述原料配方的重量份配方比例，将糖化液、酵母菌种子液、红曲粉混合经过不锈钢泵泵入发酵罐进行前发酵获得前发酵醪；

(3) 后发酵：在前发酵醪中，加入耐久肠球菌发酵醪液进行后发酵获得成熟红曲酒醪；

(4)过滤、杀菌、勾兑

成熟红曲酒醪过滤后获得红曲清酒；

将红曲清酒进入炖酒罐加热杀菌后，封坛贮存陈酿1年；

抽清过滤、按照企业内控质量标准进行勾兑成富含γ-氨基丁酸的红曲酒；

经检测，红曲酒中γ-氨基丁酸的含量为1.00～1.50g/L。

2.根据权利要求1所述的一种富含γ-氨基丁酸的红曲酒酿造方法，其特征是所述的前发酵，发酵温度控制28～30℃，发酵时间120小时。

3.根据权利要求1所述的一种富含γ-氨基丁酸的红曲酒酿造方法，其特征是所述的后发酵，发酵温度控制18～20℃，发酵时间30d。

4.根据权利要求1所述的一种富含γ-氨基丁酸的红曲酒酿造方法，其特征是所述的耐久肠球菌发酵醪液，其制备过程如下：

（1）耐久肠球菌种子液制备：刮下经MRS固体斜面培养基上培养的耐久肠球菌菌体细胞，用无菌水配成菌体细胞数为1～4×106mL-1的耐久肠球菌悬浮液；

取耐久肠球菌悬浮液接种于装有种子培养基液的三角瓶内，接种量为10% 种子培养基液体积量，培养温度28℃，在摇床上转速为200r／min，振荡培养2天，获得耐久肠球菌种子液；

（2）耐久肠球菌的载体吸附：将耐久肠球菌种子液注入平板式膜生物反应器，注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止；打开1/4进气阀门，通入无菌空气，气泡驱动耐久肠球菌种子液回流循环，回流循环过程耐久肠球菌的菌体细胞被聚丙烯中空纤维载体所吸附，而余下液体进入膜元件内部经过排液口抽出；

（3）耐久肠球菌的活化增殖：用不锈钢泵以2L／min的流量将增殖培养基液注入平板式膜生物反应器内，注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止，控制品温在28℃～30℃之间，聚丙烯中空纤维载体所吸附的耐久肠球菌的菌体细胞进行24小时增殖培养，期间每隔5h通入无菌空气曝气5 min，通气比为0.01～0.03m3/（m3·min）；

（4）耐久肠球菌的发酵：将配制好的发酵液体培养基从进料口进入平板式膜生物反应器，经过载体聚丙烯中空纤维膜吸附的耐久肠球菌菌体发酵后，产生的发酵醪液进入膜元件内部经过排液口抽出，获得耐久肠球菌发酵醪液。

5.根据权利要求4所述的一种富含γ-氨基丁酸的红曲酒酿造方法，其特征是所述的耐久肠球菌的发酵，在发酵期间每隔5 h通入无菌空气曝气5 min，发酵通气比为0.01～0.03m3/（m3·min），发酵温度控制在32～36℃，发酵时间为36～48h。

6.根据权利要求4所述的一种富含γ-氨基丁酸的红曲酒酿造方法，其特征是所述的种子培养基液配方：酵母膏 7.5g，葡萄糖 10.0g，番茄汁100 mL，蛋白胨 7.5g，KH2PO4 2.0g，吐温80 0.5 mL，蒸馏水 900 mL， pH7.0。

7.根据权利要求4所述的一种富含γ-氨基丁酸的红曲酒酿造方法，其特征是所述的增殖培养基液配方：牛肉膏10 g/L、酵母膏5 g/L、葡萄糖20 g/L、蛋白胨10 g/L、K2HPO4 2 g/L、无水乙酸钠 5 g/L、柠檬酸三铵2 g/L、MgSO4·7H2O 0.58 g/L、MnSO4·4H2O 0.25 g/L，吐温-80 1 mL/L，pH 6.8。

8.根据权利要求4所述的一种富含γ-氨基丁酸的红曲酒酿造方法，其特征是所述的发酵液体培养基配方：糖化液50mL、玉米浆粉 12～13g、谷氨酸钠 9～10g、K2HPO4 1g、MgSO4·7H2O 1g、水950 mL。

9.根据权利要求1所述的一种富含γ-氨基丁酸的红曲酒酿造方法，其特征是所述的糖化液的制备：

（1）调浆配料配比：

米粉：1000kg

氯化钙 1.5～3.0 kg

耐高温α-淀粉酶 0.5～0.6 L；

按调浆配料配比，将米粉加入45℃热水搅拌混合成16～20波美度的米粉浆，米粉浆中加入耐高温α-淀粉酶、氯化钙，调整pH6.4～6.5；

（2）喷射液化

用离心泵将上述的米粉浆泵入喷射液化器，高温液化成糊化醪，进入维持罐，维持90～100℃保温30～45分钟时间；然后l15～120℃灭酶10分钟，降温至60℃，进入糖化锅；

（3）糖化

糖化原料配方：

液化液1000kg

红曲粉80～100kg

根霉米粉100～120kg

在糖化锅内液化液继续冷却至45～55℃，加入红曲粉、根霉米粉，调节pH4.5～5.5，糖化时间45～60分钟为糖化液。

10.根据权利要求9所述的一种富含γ-氨基丁酸的红曲酒酿造方法，其特征是所述根霉米粉制作：将台湾根霉3044菌株接到试管PDA培养基活化培养72h待用；将过60目米粉80g装入500mL三角瓶中，塞上棉花塞包牛皮纸，高压锅杀菌备用；挑试管斜面的根霉菌丝接入三角瓶米粉培养基中放入33℃培养箱中，培养48h；用三角瓶培养48h的根霉进行扩大培养，在超净工作台将三角瓶中根霉用接种针挖约40g，接入经杀菌的装有1kg米粉面盆中，根霉菌丝与米粉拌匀，盖上盆盖，放到33℃培养室中培养，品温控制在36℃，超过36℃时，翻盖迅速用杀菌玻棒松动米粉降温，培养48h后获得根霉米粉备用。

11.根据权利要求1所述的一种富含γ-氨基丁酸的红曲酒酿造方法，其特征是所述的酵母菌种子液制备：从斜面试管中挑出酵母菌，接种在装有5波美度的麦芽汁50mL三角瓶中，培养温度30℃，培养时间3d为一级种子；将一级种子接种在装有8波美度的糖化液2000mL三角瓶中，接种量10%，培养温度30℃，培养时间2d成酵母菌种子液。

说明书

技术领域

本发明技术属于黄酒酿造的技术领域,具体涉及一种富含γ-氨基丁酸的红曲酒酿造方法。

背景技术

γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，简称GABA）是通过谷氨酸脱羧酶（GAD）生物合成的非蛋白质氨基酸。对人体具有具有降低血压、利尿、增强记忆等多种生理功能。2009年我国卫生部将GABA列为新资源食品。GABA又被视为具有保健功能的新型功能性因子，在食品、医药等领域具有广阔的应用前景。

在动植物体内GABA分布广泛，但其天然含量低，分离提取难度大，微生物发酵法产GABA条件温和、安全性好，成为了目前GABA 生产的主要方法。近年来，含有谷氨酸脱羧酶的霉菌、酵母和乳酸菌等作为发酵剂用于微生物发酵生产GABA，并已产业化应用。

近年来，有关食品中GABA的研究成为热点，而富含GABA食品大多是采用外添加法，传统发酵食品如作为制备富含GABA酒类，以发酵法制备的富含GABA酒类较少。为此，以发酵法工艺开发富含γ-氨基丁酸的红曲酒，为发酵生产出高品质、养生、保健功能的红曲酒，丰富红曲酒的口感和营养，提高红曲酒的附加值，开拓高档时尚化的红曲酒消费市场具有现实意义。

发明内容

本发明以含有谷氨酸钠发酵液体培养基, 利用产生γ-氨基丁酸的耐久肠球菌菌株,在平板式膜生物反应器中固定化发酵生成耐久肠球菌发酵醪液。进而以酵母菌为发酵剂,添加糖化液、耐久肠球菌发酵醪液进行补料发酵生产富含γ-氨基丁酸的红曲酒，丰富了红曲酒的口感和营养，提高红曲酒的养生保健附加值。

为实现本发明的目的而采用技术方案如下：

(1)酿造红曲酒原料配方重量份比例为：

耐久肠球菌发酵醪液 25kg

糖化液 50kg

酵母菌种子液 3kg

红曲粉 4kg

其中: 耐久肠球菌发酵醪液含有GABA 3.35～4.28 g/L。糖化液糖度（以葡萄糖计，以下同）达到220～280g/L。

(2)前发酵：

按照上述原料配方的重量份配方比例，将糖化液、酵母菌种子液、红曲粉混合经过不锈钢泵泵入发酵罐，发酵温度控制28～30℃，发酵时间120小时获得前发酵醪。

以上原料投料量控制在发酵罐总容积量的60%以内。

(3) 后发酵：按照上述原料配方的重量份配方比例，在前发酵醪中，加入耐久肠球菌发酵醪液进行后发酵，发酵温度控制18～20℃，发酵时间30d获得成熟红曲酒醪。

(4)过滤、勾兑、杀菌

成熟红曲酒醪经过硅藻土过滤机过滤获得红曲清酒；

将红曲清酒进入炖酒罐加热杀菌后，封坛贮存陈酿1年；

抽清过滤、按照企业内控质量标准进行勾兑成富含γ-氨基丁酸的红曲酒。

经检测，红曲酒中γ-氨基丁酸的含量为1.00～1.50g/L。

本发明所述的耐久肠球菌发酵醪液，其制备过程如下：

（1）耐久肠球菌种子液制备：刮下经MRS固体斜面培养基上培养的耐久肠球菌菌体细胞，用无菌水配成菌体细胞数为1～4×106mL-1的耐久肠球菌悬浮液。

取耐久肠球菌悬浮液接种于装有种子培养基液的三角瓶内，接种量为10% 种子培养基液体积量，培养温度28℃，在摇床上转速为200r／min，振荡培养2天，获得耐久肠球菌种子液。

（2）耐久肠球菌的载体吸附：将耐久肠球菌种子液注入平板式膜生物反应器，注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止；打开1/4进气阀门，通入无菌空气，气泡驱动耐久肠球菌种子液回流循环，回流循环过程耐久肠球菌的菌体细胞被聚丙烯中空纤维载体所吸附，而余下液体进入膜元件内部经过排液口抽出。

此时吸附在载体上的耐久肠球菌的菌体细胞数较低，必经过活化增殖，提高菌体代谢活力。

（3）耐久肠球菌的活化增殖：用不锈钢泵以2L／min的流量将增殖培养基液注入平板式膜生物反应器内，注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止，控制品温在28℃～30℃之间，聚丙烯中空纤维载体所吸附的耐久肠球菌的菌体细胞进行24小时增殖培养，期间每隔5 h通入无菌空气曝气5 min，通气比为0.01～0.03m3/（m3·min）即每1立方米培养基液每分钟通入无菌空气0.01～0.03立方米。

经上述增殖培养后吸附在载体上的耐久肠球菌的菌体细胞数将大于1～6×1010mg-1菌泥。而平板式膜生物反应器的余下液体进入膜元件内部经过排液口抽出。

（4）耐久肠球菌的发酵：将配制好的发酵液体培养基从进料口进入平板式膜生物反应器，经过载体聚丙烯中空纤维膜吸附的耐久肠球菌菌体发酵后，产生的发酵醪液进入膜元件内部经过排液口抽出，获得耐久肠球菌发酵醪液。

所述的耐久肠球菌的发酵，在发酵期间每隔5 h通入无菌空气曝气5 min，发酵通气比为0.01～0.03m3/（m3·min），即每1立方米培养基液每分钟通入无菌空气0.01～0.03立方米，发酵温度控制在32～36℃，发酵时间为36～48h。发酵结束后，测定每升（L）耐久肠球菌发酵醪液含有GABA 为3.35～4.28 g。

所述的耐久肠球菌Enterococcus durans（编号：CICC 20379）购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）。

上述技术方案中所述的平板式膜生物反应器，购自北京万邦达环保技术股份有限公司。平板式膜生物反应器的结构是内装聚丙烯中空纤维膜元件的不锈钢框架标准容器。基本构造中膜元件由膜片、导流布和导流板等组成，膜元件的底板下设有曝气管，通过空气压缩机将无菌空气进入曝气管，形成气泡。气泡可以提供发酵细菌氧气并且气泡驱动膜生物反应器内液体进行内部循环回流。在膜元件的导流板顶端有排液口。平板式膜生物反应器中运行泵的抽吸时，膜生物反应器内大部分发酵细菌菌体被膜片吸附阻隔在膜生物反应器中。进料醪液从进料口进入膜生物反应器，经过载体聚丙烯中空纤维膜吸附的菌体发酵后，发酵醪清液进入膜元件内部经过排液口抽出。

所述的种子培养基液配方：酵母膏 7.5g，葡萄糖 10.0g，番茄汁100 mL，蛋白胨7.5g，KH2PO4 2.0g，吐温80 0.5 mL，蒸馏水 900 mL，pH7.0。

所述的增殖培养基液配方：牛肉膏10 g/L、酵母膏5 g/L、葡萄糖20 g/L、蛋白胨10g/L、K2HPO4 2 g/L、无水乙酸钠 5 g/L、柠檬酸三铵2 g/L、MgSO4·7H2O 0.58 g/L、MnSO4·4H2O 0.25 g/L，吐温-80 1 mL/L，pH 6.8。

所述的发酵液体培养基配方：糖化液 （糖度以葡萄糖计为220 g/L）50mL、玉米浆粉 12～13g、谷氨酸钠 9～10g、K2HPO4 1g、MgSO4·7H2O 1g、水950 mL。

所述的糖化液的制备：

（1）调浆配料配比：

米粉：1000kg

氯化钙 1.5～3.0 kg

耐高温α-淀粉酶 0.5～0.6 L

按调浆配料配比，将米粉加入45℃热水搅拌混合成16～20波美度的米粉浆，米粉浆中加入耐高温α-淀粉酶、氯化钙，调整pH6.4～6.5。

（2）喷射液化

用离心泵将上述的米粉浆泵入喷射液化器，与高温蒸汽混合，淀粉受热糊化、液化成糊化醪，进入维持罐，维持90～100℃保温30～45分钟时间，以碘色反应呈红棕色为终点，称为液化液。然后将液化液经过高温处理l15～120℃灭酶10分钟，经螺旋板换热器降温至60℃，进入糖化锅。

（3）糖化

糖化原料配方：

液化液1000kg

红曲粉80～100 kg

根霉米粉100～120 kg

在糖化锅内液化液继续冷却至45～55℃，按上述配方比例在液化液中加入红曲粉、根霉米粉，调节pH4.5～5.5，糖化时间45～60分钟为糖化液，其糖度达到220～280g/L。

所述根霉米粉制作：将台湾根霉3044菌株接到试管PDA培养基活化培养72h待用。将过60目米粉80g装入500 mL三角瓶中，塞上棉花塞包牛皮纸，高压锅杀菌备用。挑试管斜面的根霉菌丝接入三角瓶米粉培养基中放入33℃培养箱中，培养48h。用三角瓶培养48h的根霉进行扩大培养，在超净工作台将三角瓶中根霉用接种针挖约40g，接入经杀菌的装有1kg米粉面盆中，根霉菌丝与米粉拌匀，盖上盆盖，放到33℃培养室中培养，品温控制在36℃，超过36℃时，翻盖迅速用杀菌玻棒松动米粉降温，培养48h后即根霉米粉备用。

所述的台湾根霉Rhizopus formosensis菌株（编号CICC 3044）购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）。

所述的米粉，是以大米粉碎成粉，过60目为米粉。所述的红曲粉，以红曲米粉碎成粉，过40目为红曲粉。

所述的酵母菌种子液制备：从斜面试管中挑出酵母菌，接种在装有5波美度的麦芽汁50mL三角瓶中，培养温度30℃，培养时间3d为一级种子。将一级种子接种在装有8波美度的糖化液2000mL三角瓶中，接种量10%，培养温度30℃，培养时间2d成酵母菌种子液。

所述的酵母菌Saccharomyces cerevisiae菌株（编号CICC 1220）购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）。

附图说明

图1是本发明工艺流程示意图。

具体实施方式

实施例1

(1)前发酵：

按照本发明技术方案所述的原料配方的重量份配方比例，将糖化液100 kg、酵母菌种子液6 kg、红曲粉8 kg混合，经过不锈钢泵泵入200L发酵罐，发酵温度控制28℃，发酵时间120小时获得前发酵醪。

本实施例中糖化液糖度达到220g/L。

(2) 后发酵：按照技术方案所述的原料配方的重量份配方比例，在前发酵醪中，加入50kg耐久肠球菌发酵醪液，进行后发酵，发酵温度控制20℃，发酵时间30d获得成熟红曲酒醪。

本实施例中耐久肠球菌发酵醪液的含有GABA 3.35g/L。

（3）过滤、勾兑、杀菌

成熟红曲酒醪经过硅藻土过滤机过滤获得红曲清酒；

将红曲清酒进入炖酒罐加热杀菌后，封坛贮存陈酿1年；

抽清过滤、按照企业内控质量标准进行勾兑成富含γ-氨基丁酸的红曲酒。

经检测，成品红曲酒中γ-氨基丁酸的含量为1.021g/L。

本实施例所用的耐久肠球菌发酵醪液，其制备过程如下：

（1）耐久肠球菌种子液制备：刮下经MRS固体斜面培养基上培养的耐久肠球菌菌体细胞，用无菌水配成菌体细胞数为1～4×106mL-1的耐久肠球菌悬浮液。

取耐久肠球菌悬浮液接种于装有种子培养基液的三角瓶内，接种量为10% 种子培养基液体积量，培养温度28℃，在摇床上转速为200r／min，振荡培养2天，获得耐久肠球菌种子液。

（2）耐久肠球菌的载体吸附：将耐久肠球菌种子液注入平板式膜生物反应器，注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止；打开1/4进气阀门，通入无菌空气，气泡驱动耐久肠球菌种子液回流循环，回流循环过程耐久肠球菌的菌体细胞被聚丙烯中空纤维载体所吸附，而余下液体进入膜元件内部经过排液口抽出。

（3）耐久肠球菌的活化增殖：用不锈钢泵以2L／min的流量将增殖培养基液注入平板式膜生物反应器内，注入量以液面超过载体高度4cm标识处为止，控制品温在28℃～30℃之间，聚丙烯中空纤维载体所吸附的耐久肠球菌的菌体细胞进行24小时增殖培养，期间每隔5 h通入无菌空气曝气5 min，通气比为0.03m3/（m3·min）即每1立方米培养基液每分钟通入无菌空气0.03立方米。

经上述增殖培养后吸附在载体上的耐久肠球菌的菌体细胞数达到5.60×1010mg-1菌泥。而平板式膜生物反应器的余下液体进入膜元件内部经过排液口抽出。

（4）耐久肠球菌的发酵：将配制好的发酵液体培养基从进料口进入平板式膜生物反应器，经过聚丙烯中空纤维膜载体吸附的耐久肠球菌菌体发酵，发酵期间每隔5 h通入无菌空气曝气5 min，通气比为0.01m3/（m3·min），即每1立方米培养基液每分钟通入无菌空气0.01立方米，发酵温度控制在32～36℃之间，发酵时间为36h。产生的发酵醪液进入膜元件内部经过排液口抽出，获得耐久肠球菌发酵醪液。

本实施例采用的耐久肠球菌Enterococcus durans（编号：CICC 20379）购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）。

本实施例中所述的平板式膜生物反应器，购自北京万邦达环保技术股份有限公司。

平板式膜生物反应器的结构是内装聚丙烯中空纤维膜元件的不锈钢框架标准容器。基本构造中膜元件由膜片、导流布和导流板等组成，膜元件的底板下设有曝气管，通过空气压缩机将无菌空气进入曝气管，形成气泡。气泡可以提供发酵细菌氧气并且气泡驱动平板式膜生物反应器内液体进行内部循环回流。在膜元件的导流板顶端有排液口。平板式膜生物反应器中运行泵的抽吸时，平板式膜生物反应器内大部分发酵细菌菌体被膜片吸附阻隔在膜生物反应器中。进料醪液从进料口进入平板式膜生物反应器，经过载体聚丙烯中空纤维膜吸附的菌体发酵后，发酵醪液进入膜元件内部经过排液口抽出。

本实施例中所述的种子培养基液，其配方比例为：酵母膏 7.5g，葡萄糖 10.0g，番茄汁100 mL，蛋白胨 7.5g，KH2PO4 2.0g，吐温80 0.5 mL，蒸馏水 900 mL，pH7.0。

本实施例中所述的增殖培养基液，每升中含有：牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖20g、蛋白胨10g、K2HPO4 2g、无水乙酸钠 5g、柠檬酸三铵2g、MgSO4·7H2O 0.58g、MnSO4·4H2O0.25g，吐温-80 1mL，pH6.8。

本实施例中所述的发酵液体培养基，每升中含有：糖化液（糖度以葡萄糖计为220g/L）50mL、玉米浆粉 12g、谷氨酸钠 9g、K2HPO4 1g、MgSO4·7H2O 1g、水950 mL。

本实施例中所述的糖化液的制备，其过程如下：

（1）调浆配料配比：

米粉 1000kg

氯化钙 3.0 kg

耐高温α-淀粉酶 0.6 L

按调浆配料配比，将米粉加入45℃热水搅拌混合成16波美度的米粉浆，米浆中加入耐高温α-淀粉酶、氯化钙，调整pH6.4～6.5。

（2）喷射液化

用离心泵将上述的米粉浆泵入喷射液化器，与高温蒸汽混合，淀粉受热糊化、液化成糊化醪，进入维持罐，维持90～100℃保温30～45分钟时间，以碘色反应呈红棕色为终点，称为液化液。然后将液化液经过高温处理l15～120℃灭酶10分钟，经螺旋板换热器降温至60℃，进入糖化锅。

（3）糖化

糖化原料配方：

液化液1000kg

红曲粉80～100 kg

根霉米粉100～120 kg

在糖化锅内液化液继续冷却至45～55℃，按上述配方比例在液化液中加入红曲粉、根霉米粉，调节pH4.5～5.5，糖化时间45～60分钟为糖化液，其糖度达到220～280g/L。

本实施例中所述根霉米粉制作：将台湾根霉3044菌株接到试管PDA培养基活化培养72h待用。将过60目米粉80g装入500mL三角瓶中，塞上棉花塞包牛皮纸，高压锅杀菌备用。挑试管斜面的根霉菌丝接入三角瓶米粉培养基中放入33℃培养箱中，培养48h。用三角瓶培养48h的根霉进行扩大培养，在超净工作台将三角瓶中根霉用接种针挖约40g，接入经杀菌的装有1kg米粉面盆中，根霉菌丝与米粉拌匀，盖上盆盖，放到33℃培养室中培养，品温控制在36℃，超过36℃时，翻盖迅速用杀菌玻棒松动米粉降温，培养48h后即根霉米粉备用。

所述的台湾根霉Rhizopus formosensis菌株（编号CICC 3044）购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）。

本实施例中所述的米粉，是以大米粉碎成粉，过60目为米粉。所述的红曲粉，以红曲米粉碎成粉，过40目为红曲粉。

本实施例中所述的酵母菌种子液制备：从斜面试管中挑出酵母，接种在装有5波美度的麦芽汁50mL三角瓶中，培养温度30℃，培养时间3d为一级种子。将一级种子接种在装有8波美度的糖化液2000mL三角瓶中，接种量10%，培养温度30℃，培养时间2d成酵母菌种子液。

本实施例中所述的酵母菌Saccharomyces cerevisiae菌株（编号CICC 1220）购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）。

实施例2

(1)前发酵：

按照本发明技术方案所述的原料配方的重量份配方比例，将糖化液250 kg、酵母菌种子液15 kg、红曲粉20 kg混合经过不锈钢泵泵入500L发酵罐，发酵温度控制30℃，发酵时间120小时获得前发酵醪。

本实施例中糖化液糖度达到260g/L。

(2) 后发酵：按照上述原料配方的重量份配方比例，在前发酵醪中，加入125 kg耐久肠球菌发酵醪液进行后发酵，发酵温度控制18℃，发酵时间30d获得成熟红曲酒醪。

本实施例中耐久肠球菌发酵醪液的含有GABA 4.28g/L。

（3）过滤、勾兑、杀菌

成熟红曲酒醪经过硅藻土过滤机过滤获得红曲清酒；

将红曲清酒进入炖酒罐加热杀菌后，封坛贮存陈酿1年；

抽清过滤、按照企业内控质量标准进行勾兑成富含γ-氨基丁酸的红曲酒。

经检测，成品红曲酒中γ-氨基丁酸的含量为1.30g/L。

本实施例所用的耐久肠球菌发酵醪液的制备、采用的耐久肠球菌Enterococcus durans（编号：CICC 20379）、平板式膜生物反应器、种子培养基液配方比例、增殖培养基液配方比例、发酵液体培养基配方比例以及糖化液的制备、根霉米粉制作、酵母菌种子液制备、酵母菌Saccharomyces cerevisiae菌株（编号CICC 1220）等，均与实施例1相同。

一种富含γ-氨基丁酸的红曲酒酿造方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。