专利摘要

专利摘要

本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法；包括以下步骤：牛肝预处理、精制、除杂、提取；采用本发明的提取方法，有效的提高牛肝脏中牛磺酸的提取率，牛磺酸的提取率达到93.6％，纯度达98.5％以上，显著的提高了牛磺酸品质，有效的满足目前市场对天然牛磺酸的需求，有效提升牛磺酸的药用价值。

权利要求

1.一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)牛肝预处理：去除牛肝上的结缔组织，洗净后剁碎，加入牛肝质量的3～6％的复合酶1，拌匀放置120～180min后，加入牛肝质量的8～10倍的蒸馏水，在温度1下水浴加热10～15h，得料1；

(2)精制：将料1和蛋白沉降剂按1:0.08～0.12的质量比混合，调节混合料的PH值为4～4.5，在温度2下水浴加热2～4h，得料2；

(3)除杂：将料2取出，过滤，将滤液与复合酶2按1:1.2～1.5的质量比混合，拌匀静置6～8h，离心取上清液，将上清液通过阳离子交换树脂，得料3；

(4)提取：将料3用超声处理8～12min后，加入料3质量的3～4倍的乙醇，待结晶析出后，再用无水乙醇重结晶，烘干即可；

所述的复合酶1，是胰蛋白酶、组织蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶按0.5～1.2:1～1.8:0.2～0.6的质量比混合；

所述的复合酶2，是将木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.2～0.4:0.8～1.2的质量比混合；

所述的超声，其频率为45～55kHz；

所述的温度1为85～88℃；

所述的蛋白沉降剂，是将含量为20～30％的磺基水杨酸溶液和浓度为0.18～0.22％的盐水溶液按0.8～1.2:1.2～1.8的质量比混合制得；

所述的温度2为65～75℃；

2.如权利要求1所述的从牛肝脏中提取牛磺酸的方法，其特征在于，所述的离心，其转速为3300～3800r/min。

3.如权利要求1所述的从牛肝脏中提取牛磺酸的方法，其特征在于，所述的烘干，其烘干温度为120～140℃。

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法。

背景技术

我国是一个畜牧业生产大国，生牛饲养量及生产总量一直位居世界前列，据相关资料显示，2008年我国年末存栏牛头数为10626.4万头，牛肉产量约为613.2万吨，可食脏器产量约占牛肉产量的10％，其中肝脏产量约为49.1万吨。2009年，我国牛肉产量约为890万吨，其中肝脏产量约为71.2万吨，同比增长了45％。

随着肉牛养殖业的迅猛发展及人们饮食结构的改变，牛肉需求量明显增加，副产物产量也随之大量增加，因受传统饮食习惯的影响，“副产物不当肉”，是人们传统的消费以及饮食观念，至今也无多大改变，作为生牛屠宰的副产品-牛的肝脏被视为下品，上不了筵席，很少有人问津，附加值非常低，而牛肝脏中富含大量的牛磺酸，如不合理利用，既浪费了宝贵的资源，又污染了环境，牛磺酸是一种含硫的β-氨基酸，分子量为125.15，熔点328℃(317℃分解)，单斜棱形棒状白色晶体，牛磺酸广泛分布于水藻及动物体内，牛磺酸在动物体内主要分布于一些易兴奋组织内，如肝脏、中枢神经系统、视网膜、骨骼肌和心脏等组织，牛磺酸能影响机体脂类的消化吸收、影响蛋白质和氨基酸代谢、影响糖代谢、影响矿物元素代谢、牛磺酸还可以促进巨噬细胞产生白细胞介素-iv，加强中性粒细胞的吞噬杀菌功能，提高人和动物的非特异性和特异性免疫功能，是机体肠道内双歧菌的促生因子，优化肠道内细菌群结构维持机体正常的生殖功能，还具有抗氧化、延缓衰老作用，能够促进急性肝炎恢复正常，还可镇静、镇痛和消炎，对冻伤、KCN中毒及偏头疼也有防治作用，能运用于食品添加剂、医药、化妆品、护肤品等行业，具有较高的的开发价值。

目前从我国肝脏加工现状来看，肉牛屠宰后产生的肝脏大部分作为原料直接上市，少部分初级加工成食品添加辅料、饲料等，以原料或初级加工品销售，价格均不高，使得企业获利极少，在我国大量畜禽副产物未被充分利用且畜禽副产物提取纯化技术水平落后的前提下，开发脏器生化制品已经成为动物源性产品的新兴产业和主流趋势，且生化制品价格相对较高，为企业开辟了一条新的增效途径。

发明内容

本发明为解决上述技术问题，提供了一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法。

具体是通过以下技术方案来实现的：

一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法，包括以下步骤：

(1)牛肝预处理：去除牛肝上的结缔组织，洗净后剁碎，加入牛肝质量的3～6％的复合酶1，拌匀放置120～180min后，加入牛肝质量的8～10倍的蒸馏水，在温度1下水浴加热10～15h，得料1；

(2)精制：将料1和蛋白沉降剂按1∶0.08～0.12的质量比混合，调节混合料的PH值为4～4.5，在温度2下水浴加热2～4h，得料2；

(3)除杂：将料2取出，过滤，将滤液与复合酶2按1∶1.2～1.5的质量比混合，拌匀静置6～8h，离心取上清液，将上清液通过阳离子交换树脂，得料3；

(4)提取：将料3用超声处理8～12min后，加入料3质量的3～4倍的乙醇，待结晶析出后，再用无水乙醇重结晶，烘干即可。

所述的复合酶1，是胰蛋白酶、组织蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶按0.5～1.2∶1～1.8∶0.2～0.6的质量比混合。

所述的温度1为85～88℃。

所述的蛋白沉降剂，是将含量为20～30％的磺基水杨酸溶液和浓度为0.18～0.22％的盐水溶液按0.8～1.2∶1.2～1.8的质量比混合制得。

所述的温度2温度为65～75℃。

所述的复合酶2，是将木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.2～0.4∶0.8～1.2的质量比混合。

所述的离心，其转速为3300～3800r/min。

所述的超声，其频率为45～55kHz。

所述的烘干，其烘干温度为120～140℃。

所述的乙醇，其浓度≥75％。

综上所述，本发明的有益效果在于：采用本发明的提取方法，有效的提高牛肝脏中牛磺酸的提取率，牛磺酸的提取率达到93.6％，纯度达98.5％以上，显著的提高了牛磺酸品质，有效的满足目前市场对天然牛磺酸的需求，有效提升牛磺酸的药用价值。

其中，通过对牛肝脏的预处理步骤，添加了复合酶，有效的水解肝脏中的蛋白质，有效的为后期的牛磺酸和蛋白质的分离提供保证；利用蛋白质为两性物质的特性，在酸性环境中带正电荷，而磺基水杨酸根带负电，正负结合，有效的使得蛋白质得到聚沉，另外蛋白质表面有一层水膜将蛋白质分子彼此隔开，通过合适浓度的盐离子破坏了这层水膜，使得蛋白质分子发生凝聚沉淀，从而达到降低蛋白质含量的目的；通过复合酶2的作用，进一步将蛋白质进行水解，降低其含量，进一步提高牛磺酸的纯度。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。

实施例1

一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法，包括以下步骤：

(1)牛肝预处理：去除牛肝上的结缔组织，洗净后剁碎，加入牛肝质量的3％的复合酶1，拌匀放置120min后，加入牛肝质量的8倍的蒸馏水，在85℃下水浴加热10h，得料1；

所述的复合酶1，是胰蛋白酶、组织蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶按0.5∶1∶0.2的质量比混合；

(2)精制：将料1和蛋白沉降剂按1∶0.08～的质量比混合，调节混合料的PH值为4～4.5，在65℃下水浴加热2～4h，得料2；

所述的蛋白沉降剂，是将含量为20％的磺基水杨酸溶液和浓度为0.18％的盐水溶液按0.8∶1.2的质量比混合制得；

(3)除杂：将料2取出，过滤，将滤液与复合酶2按1∶1.2的质量比混合，拌匀静置6～8h，在3300r/min的转速下离心，取上清液，将上清液通过阳离子交换树脂，得料3；

所述的复合酶2，是将木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.2∶0.8的质量比混合；

(4)提取：将料3用超声处理8min后，加入料3质量的3倍的乙醇，待结晶析出后，再用无水乙醇重结晶，烘干即可。

实施例2

一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法，包括以下步骤：

(1)牛肝预处理：去除牛肝上的结缔组织，洗净后剁碎，加入牛肝质量的6％的复合酶1，拌匀放置180min后，加入牛肝质量的10倍的蒸馏水，在88℃下水浴加热15h，得料1；

所述的复合酶1，是胰蛋白酶、组织蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶按1.2∶1.8∶0.6的质量比混合；

(2)精制：将料1和蛋白沉降剂按1∶0.12的质量比混合，调节混合料的PH值为4～4.5，在75℃下水浴加热2～4h，得料2；

所述的蛋白沉降剂，是将含量为30％的磺基水杨酸溶液和浓度为0.22％的盐水溶液按1.2∶1.8的质量比混合制得；

(3)除杂：将料2取出，过滤，将滤液与复合酶2按1∶1.5的质量比混合，拌匀静置6～8h，在3800r/min的转速下离心，取上清液，将上清液通过阳离子交换树脂，得料3；

所述的复合酶2，是将木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.4∶1.2的质量比混合；

(4)提取：将料3用超声处理12min后，加入料3质量的4倍的乙醇，待结晶析出后，再用无水乙醇重结晶，烘干即可。

实施例3

一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法，包括以下步骤：

(1)牛肝预处理：去除牛肝上的结缔组织，洗净后剁碎，加入牛肝质量的5％的复合酶1，拌匀放置150min后，加入牛肝质量的9倍的蒸馏水，在87℃下水浴加热13h，得料1；

所述的复合酶1，是胰蛋白酶、组织蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶按0.8∶1.5∶0.4的质量比混合；

(2)精制：将料1和蛋白沉降剂按1∶0.1的质量比混合，调节混合料的PH值为4～4.5，在70℃下水浴加热2～4h，得料2；

所述的蛋白沉降剂，是将含量为25％的磺基水杨酸溶液和浓度为0.2％的盐水溶液按1∶1.5的质量比混合制得；

(3)除杂：将料2取出，过滤，将滤液与复合酶2按1∶1.3的质量比混合，拌匀静置6～8h，在3500r/min的转速下离心，取上清液，将上清液通过阳离子交换树脂，得料3；

所述的复合酶2，是将木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.3∶1的质量比混合；

(4)提取：将料3用超声处理10min后，加入料3质量的3.5倍的乙醇，待结晶析出后，再用无水乙醇重结晶，烘干即可。

实施例4

一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法，包括以下步骤：

(1)牛肝预处理：去除牛肝上的结缔组织，洗净后剁碎，加入牛肝质量的3％的复合酶1，拌匀放置180min后，加入牛肝质量的8倍的蒸馏水，在88℃下水浴加热10h，得料1；

所述的复合酶1，是胰蛋白酶、组织蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶按1.2∶1∶0.6的质量比混合；

(2)精制：将料1和蛋白沉降剂按1∶0.08的质量比混合，调节混合料的PH值为4.5，在75℃下水浴加热2h，得料2；

所述的蛋白沉降剂，是将含量为20％的磺基水杨酸溶液和浓度为0.22％的盐水溶液按1.2∶1.8的质量比混合制得；

(3)除杂：将料2取出，过滤，将滤液与复合酶2按1∶1.5的质量比混合，拌匀静置6h，在3300r/min的转速下离心，取上清液，将上清液通过阳离子交换树脂，得料3；

所述的复合酶2，是将木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.2∶1.2的质量比混合；

(4)提取：将料3用超声处理8min后，加入料3质量的4倍的乙醇，待结晶析出后，再用无水乙醇重结晶，烘干即可。

实施例5

一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法，包括以下步骤：

(1)牛肝预处理：去除牛肝上的结缔组织，洗净后剁碎，加入牛肝质量的5％的复合酶1，拌匀放置120min后，加入牛肝质量的10倍的蒸馏水，在85℃下水浴加热15h，得料1；

所述的复合酶1，是胰蛋白酶、组织蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶按0.8∶1∶0.6的质量比混合；

(2)精制：将料1和蛋白沉降剂按1∶0.08的质量比混合，调节混合料的PH值为4.5，在75℃下水浴加热2～4h，得料2；

所述的蛋白沉降剂，是将含量为20％的磺基水杨酸溶液和浓度为0.18％的盐水溶液按1.2∶1.5的质量比混合制得；

(3)除杂：将料2取出，过滤，将滤液与复合酶2按1∶1.5的质量比混合，拌匀静置8h，在3800r/min的转速下离心，取上清液，将上清液通过阳离子交换树脂，得料3；

所述的复合酶2，是将木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.4∶0.8的质量比混合；

(4)提取：将料3用超声处理12min后，加入料3质量的3倍的乙醇，待结晶析出后，再用无水乙醇重结晶，烘干即可。

实验例

分别对本发明对牛磺酸的提取率以及纯度进行统计，以传统对牛磺酸的提取方法作为对照，结果如表1所示：

表1

一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。