专利摘要

本发明公开了一种基于纳米钙钛矿材料的酶‑分子印迹双识别型毒死蜱传感器的制备方法，即MIP/ITO/CH3NH3PbI3/CS/AChE双识别型传感器的制备。本发明还公开了检测蔬菜中毒死蜱残留的方法，具体为：a、制作毒死蜱浓度与电流的线性关系图：b、测试样品中毒死蜱浓度：测量得到待测的毒死蜱溶液的抑制光电流信号值；利用制作的毒死蜱浓度与抑制光电流的线性关系图，以测量得到待测的毒死蜱溶液的抑制光电流信号值，得到待测毒死蜱溶液中毒死蜱浓度。本发明又公开了一种检测蔬菜中毒死蜱残留的装置，包括电化学工作站、光源、电解池、工作电极、参比电极和辅助电极。本发明可检测蔬菜中毒死蜱残留，检测成本低、选择性好、样品前处理简单、操作简便和取样量小。

权利要求

1.基于纳米钙钛矿材料的酶-分子印迹双识别型毒死蜱传感器的制备方法，其特征是，所述制备方法包括以下步骤：

(1)钙钛矿前驱液的制备

将CH3NH3I晶体和PbCl2按照摩尔比4:1在DMF中混合搅拌半小时，即得到棕色的钙钛矿前驱液；

(2)ITO/CH3NH3PbI3/CS/AChE双识别型传感器的制备

(2-1)将片状氧化烟锡ITO导电玻璃，放入含有2mol·L-1KOH的异丙醇溶液中，煮沸30min，用超声波在超纯水于中超声，清洗干净，烘干备用；

(2-2)ITO/CH3NH3PbI3/CS/AChE传感器的制备：

(2-2-1)ITO/CH3NH3PbI3电极的制备：将钙钛矿前驱液均匀地旋涂在ITO导电玻璃上，得到ITO/CH3NH3PbI3电极；

(2-2-2)分子印迹传感器MIP/ITO/CH3NH3PbI3/CS的制备：将ITO/CH3NH3PbI3电极放入壳聚糖储备液中，壳聚糖储备液含1.0mmol·L-1毒死蜱，在-1.5V的条件下用恒电位沉积法聚合5min，使电极表面同时聚合了毒死蜱和壳聚糖；沉积完成后取出ITO/CH3NH3PbI3/CS电极，将体积浓度0.1％的戊二醛滴于ITO/CH3NH3PbI3/CS电极表面，晾干后用蒸馏水冲洗掉过量的戊二醛，再晾干，继续将此电极浸泡在0.1mol·L-1氯化钾溶液中，利用循环伏安扫描的方式，将模板分子洗脱掉，循环伏安扫描过程中的电位区间为-1.2～0.5V，完成后将电极取出并洗净，晾干得到的电极就是分子印迹传感器MIP/ITO/CH3NH3PbI3/CS，其表面留有许多毒死蜱分子的识别位点；

(2-2-3)将CS/AChE悬浮液滴涂到干净分子印迹传感器MIP/ITO/CH3NH3PbI3/CS电极上并在干燥，得到MIP/ITO/CH3NH3PbI3/CS/AChE传感器。

2.根据权利要求1所述的基于纳米钙钛矿材料的酶-分子印迹双识别型毒死蜱传感器的制备方法，其特征是，所述步骤(1)中CH3NH3I晶体的制备方法是：将甲胺CH3NH2、氢碘酸HI和乙醇溶液室温下混合，氮气环境中搅拌1h，蒸发得到晶体，用二甲醚洗涤3次，然后将晶体在真空环境下干燥，得到白色CH3NH3I晶体；CH3NH2：HI：乙醇(v/v/v)＝12.54：22.80：95。

3.根据权利要求1所述的基于纳米钙钛矿材料的酶-分子印迹双识别型毒死蜱传感器的制备方法，其特征是，所述步骤(2-2-2)中壳聚糖储备液的制备方法：将壳聚糖与冰醋酸混合，放置过夜变得均匀后再加入毒死蜱以配置成均匀溶液。

4.根据权利要求1所述的基于纳米钙钛矿材料的酶-分子印迹双识别型毒死蜱传感器的制备方法，其特征是，所述步骤(2-2-2)中循环伏安扫描的圈数为50圈。

5.根据权利要求1所述的基于纳米钙钛矿材料的酶-分子印迹双识别型毒死蜱传感器的制备方法，其特征是，所述步骤(2-2-3)中CS/AChE悬浮液的制备方法：将壳聚糖粉末溶解于乙酸溶液中，得到5g/L壳聚糖溶液；5g/L壳聚糖CS溶液，再加入10.0mg乙酰胆碱酯酶AChE，在室温下轻轻混合15min。

6.利用权利要求1所述的制备方法所制的传感器检测蔬菜中毒死蜱残留的方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

a、制作毒死蜱浓度与电流的线性关系图：

(a-1)以MIP/ITO/CH3NH3PbI3/CS/AChE传感器为工作电极，以饱和氯化钾电极为参比电极，以铂电极为辅助电极，在电解池中加入10mL含有0.6mmol·L-1氯化乙酰硫代胆碱的磷酸盐缓冲溶液；将参比电极和辅助电极分别放入电解池中；将MIP/ITO/CH3NH3PbI3/CS/AChE工作电极分别浸入不同标准浓度毒死蜱中10min后取出，再分别插入电解池中，在偏置电位为0V的条件下，卤素灯光光源自电解池左向右对氯化乙酰硫代胆碱电解液进行照射，分别测量得到不同已知浓度的毒死蜱溶液的光电流抑制信号值；

(a-2)以毒死蜱溶液的浓度为横坐标，以毒死蜱溶液的光电流抑制信号值为纵坐标，制作毒死蜱浓度与抑制光电流的线性关系图；

b、测试样品中毒死蜱浓度：

(b-1)以MIP/ITO/CH3NH3PbI3/CS/AChE传感器为工作电极，以饱和氯化钾电极为参比电极，以铂电极为辅助电极，在电解池中加入10mL含有0.6mmol·L-1氯化乙酰硫代胆碱的磷酸盐缓冲溶液；将参比电极和辅助电极分别放入电解池中；从蔬菜中提取得到待测毒死蜱溶液，将MIP/ITO/CH3NH3PbI3/CS/AChE工作电极浸入待测毒死蜱溶液中10min后取出，插入电解池中，在偏置电位为0V的条件下，卤素灯光光源自电解池左侧向右对电解液进行照射，测量得到待测的毒死蜱溶液的抑制光电流信号值；

(b-2)利用制作的毒死蜱浓度与抑制光电流的线性关系图，以测量得到待测的毒死蜱溶液的抑制光电流信号值，得到待测毒死蜱溶液中毒死蜱浓度。

7.根据权利要求6所述的检测蔬菜中毒死蜱残留的方法，其特征在于，所述蔬菜样品用乙醇溶解过滤。

8.根据权利要求6所述的检测蔬菜中毒死蜱残留的方法，其特征在于，所述步骤(b-1)中所述不同标准浓度的毒死蜱溶液的浓度至少为三个。

9.一种检测蔬菜中毒死蜱残留的装置，其特征是，所述装置包括电化学工作站、光源、电解池、工作电极、参比电极和辅助电极；

工作电极、参比电极和辅助电极组成三电极体系，工作电极为根据权利要求1所述制备方法制得的传感器，工作电极为CH3NH3PbI3/CS/AChE修饰的导电玻璃，即MIP/ITO/CH3NH3PbI3/CS/AChE传感器，参比电极为饱和氯化钾电极，辅助电极为铂电极；电解池中设置工作电极、参比电极和辅助电极；

电解池左侧设置光源；

电化学工作站包括三电极接口，三电极接口分别连接工作电极、参比电极和辅助电极。

10.根据权利要求9所述的一种检测蔬菜中毒死蜱残留的装置，其特征是，所述光源为卤素灯光光源，卤素灯光光源为250瓦；所述电解池材质为石英。

双识别型毒死蜱传感器的制备、检测蔬菜中毒死蜱残留的方法及检测装置专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。