专利摘要

专利摘要

本发明公开了一种含有可水培陆生植物的抑藻剂，所述的抑藻剂为葱白的水提液。本发明与现有技术相比，大葱作为陆生植物的代表，是一种重要的药材原料，其总提取物、蛋白成分、脂溶性成分及多糖成分均有抑菌能力。大葱的葱白的水提液和葱叶的水提物具有非常好的抑藻性能，并且可以利用大葱水培的特性在景观池塘或在人工浮床进行栽植，既可以防止水华的发生，还可以美化环境甚至采集食用。

权利要求

1.一种含有可水培陆生植物的抑藻剂，其特征在于：所述的抑藻剂为葱白的水提液。

2.根据权利要求1所述的一种含有可水培陆生植物的抑藻剂，其特征在于：所述的葱白的水提液通过以下方法制备：将葱白和蒸馏水室温浸提4-6天，在无菌条件下通过0.22μm的微孔滤膜过滤所得的滤液; 葱白和蒸馏水质量比为1:10。

3.一种含有可水培陆生植物的抑藻剂，其特征在于：所述的抑藻剂为葱叶水取物。

4.根据权利要求3所述的一种含有可水培陆生植物的抑藻剂，其特征在于：所述的葱叶的水提液通过以下方法制备：将葱叶和蒸馏水室温浸提4-6天，在无菌条件下通过0.22μm的微孔滤膜过滤所得的滤液，葱叶和蒸馏水质量比为1:10。

说明书

技术领域

本发明属于抑藻剂这一技术领域。

背景技术

近年来，随着人类活动的增加，湖泊、水库富营养化日益严重，导致水华频繁爆发，水资源的利用效能降低，水产业经济因此遭受了巨大的损失，水环境安全也因此面临着严重的威胁。因此，有效抑制富营养化水体中浮游藻类的过量生长及防止水华发生成为目前环境领域的研究热点和前沿。在众多控制藻类生长的方法中，传统的物理、化学抑制藻类生长的方法会不可避免地破坏生态平衡并造成环境污染。而生物方法尤其是利用植物化感作用抑藻被认为是一种新型的生物抑藻技术，具有高效、生态安全性好等特点，因而颇受关注。目前对利用植物化感作用抑藻主要是集中于沉水、挺水和浮游植物 的研究，但是水体中营养盐的直接胁迫和毒害作用会造成沉水植物的消亡；维持浅水湖泊清水状态的磷浓度通常为0.05-0.15 mg/L，当水体中的总磷浓度超过0.15 mg/L时，湖泊会开始从草型生态系统转化为藻型生态系统。再者，由于浮游藻类大量生长，水生植物不但会受到各种环境因子的影响，而且会受到营养、光照等方面的冲击而导致消亡，故要达到发挥抑藻效果的盖度是较难实现的，从而无法有效控制有害藻类的过量增殖。同时，蓝藻也会通过藻毒素等化感物质的分泌影响水生植物的化感潜能。此外，水生植物又受季节和气候的限制, 因此水生植物化感抑藻在实际应用中有一定的局限性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种含有可水培陆生植物的抑藻剂。

本发明解决技术问题的技术方案为: 一种含有可水培陆生植物的抑藻剂，所述的抑藻剂为葱白的水提液。

所述的葱白的水提液通过以下方法制备：将葱白和蒸馏水室温浸提4-6天，在无菌条件下通过0.22μm的微孔滤膜过滤，所得的滤液; 葱白和蒸馏水质量比为1:10。

所述的抑藻剂为葱叶水取物。

所述的葱叶的水提液通过以下方法制备：将葱叶和蒸馏水室温浸提4-6天，在无菌条件下通过0.22μm的微孔滤膜过滤，所得的滤液，葱叶和蒸馏水质量比为1:10。

大葱(Allium fistulosum L.var. giganteam Makino)是常见的陆生植物，属百合科葱属，是以叶鞘组成的肥大假茎和嫩叶为产品的2-3年生草本植物；大葱在我国的栽培历史长达3000余年，是世界上主要栽培大葱的国家之一，它由葱白和葱叶组成。

本发明与现有技术相比，大葱作为陆生植物的代表，是一种重要的药材原料，其总提取物、蛋白成分、脂溶性成分及多糖成分均有抑菌能力。大葱的葱白的水提液和葱叶的水提物具有非常好的抑藻性能，并且可以利用大葱水培的特性在景观池塘或在人工浮床进行栽植，既可以防止水华的发生，还可以美化环境甚至采集食用。 

附图说明

图1为不同浓度的葱白的水提液对铜绿微囊藻生长的影响。

图2为不同浓度的葱叶的水提液对铜绿微囊藻生长的影响。

图3为不同浓度的葱白、葱叶水的水提液对铜绿微囊藻生长的抑制率(%)。

在图3中，a：10 mL/L葱白水浸提液， b：30 mL/L葱白水浸提液， c：50 mL/L葱白水浸提液，d：10 mL/L葱叶水浸提液，e：30 mL/L葱叶水浸提液，f：50 mL/L葱叶水浸提液。

图4为铜绿微囊藻细胞计数与荧光值的关系曲线。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作详细的说明。

实验材料：

1.1

铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)和斜生栅藻(Scenedesmus obliquus)由中国科学院水生生物研究所藻种库提供；采用BG-11培养基培养。

新鲜大葱，购于芜湖市菜市场。

BG-11培养基主要成分

NaNO₃，1.5 g/L；K₂HPO₄?3H₂O，0.04 g/L；MgSO₄?7H₂O，0.075 g/L；CaCl₂?2H₂O，0.036 g/L；柠檬酸，0.006 g/L；柠檬酸铁铵，0.006 g/L；EDTA，0.001 g/L；Na₂CO₃，0.02 g/L；A₅ solution，0.1 mL； 

A₅ solution配方：H₃BO₃，2.86 g/L；MnCl₂?4H₂O，1.86 g/L；ZnSO₄?7H₂O，0.22 g/L；Na₂MoO₄?2H₂O，0.39 g/L；CuSO₄.?5H₂O，0.08 g/L；Co(NO₃)₂?6H₂O，0.05 g/L。

1.2

实验前用对铜绿微囊藻进行扩大培养。培养条件为：光照强度4000 lx，光暗比为12h:12h，温度(25±1)℃。每天摇动3~5次，使铜绿微囊藻细胞进入对数生长期。

1.3 测定方法

铜绿微囊藻细胞计数采用血细胞计数板，荧光值测定采用荧光分光光度计。

1.4 数据处理

化感物质对藻类的抑制率(inhibition rate)公式为：

IR = (1-N/N₀)×100%

式中，IR—抑制率；N—加入浸提液组的荧光值；N₀—对照组的荧光值。将大葱浸提液最终浓度与生长抑制率作一元线性回归，求出半效应浓度EC₅₀(mL/L)。

藻类的比增长率(specific growth rate)公式为： 

μ = ln (x_n-x_n-1) / (t_n-t_n-1) 

式中，μ为比增长率；x_n、x_n-1分别为当天和1天前的荧光值；t_n和t_n-1分别对应x_n和x_n-1的培养时间（天数）。

数据采用Excel 2003软件处理，各组间差异采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，P<0.05表示有显著性差异，P<0.01表示有极显著差异。

实施例1：

葱白的水提液通过以下方法制备：将葱白与蒸馏水室温浸提4天，在无菌条件下通过0.22μm的微孔滤膜过滤，所得的滤液; 葱白和蒸馏水质量比为1:10。

所述的葱叶的水提液通过以下方法制备：将葱叶与蒸馏水室温浸提4天，在无菌条件下通过0.22μm的微孔滤膜过滤，所得的滤液，葱叶和蒸馏水质量比为1:10。

实施例2：

藻密度与荧光值的关系曲线。

取对数生长期的铜绿微囊藻，用BG-11培养基稀释成5个藻细胞密度梯度，用血球计数板计数，同时分别测荧光值。

其结果如图4所示：细胞密度与其荧光值存在着正相关关系(R2=0.9960)，故可以用荧光值来反映铜绿微囊藻的生长状况。

实施例3：

不同浓度的大葱葱白、葱叶水浸提液对铜绿微囊藻生长的影响。

取对数生长期的铜绿微囊藻分别放入100 mL锥形瓶中，再加入不同稀释倍数的BG-11培养基使各组培养基最终浓度相等，藻细胞最终浓度均为5.0×10⁵ cells/mL，藻液最终体积为50 mL。锥形瓶中葱白或葱叶的水提液的最终浓度分别为0、10 mL/L、30 mL/L、50 mL/L，同时设不加葱白或葱叶水提液的对照组（空白），每组设3个平行，各组置于1.2相同条件下培养。每隔24h进行荧光值的测定，连续测定5d。

由图1可知，葱白的水提液各处理组从第1d开始，与对照组相比就具有显著性差异，p<0.05，且随着葱白的水提液浓度的增加以及处理时间的延长，实验组荧光值和同期对照组相比差距愈显著；

而由图2可知，葱叶的水提液各处理组荧光值曲线与同期对照组相比至处理第3d后才表现为显著性差异，但是其荧光值与相同浓度的葱白的水提液各处理组相比也具有显著性差异，p<0.05，即葱白的水提液对铜绿微囊藻的抑制作用明显强于葱叶的水提液。

由图3可知，葱白的水提液各处理组随着处理时间的延长，抑制率升高明显，比较同期各处理组的抑制率，还可发现浓度越高，抑制率越高，浓度为50 mL/L处理组在第5d抑制率达到97.10%；

而对于葱叶的水提液，浓度为50 mL/L处理组在第5d的抑制率是33.27%，葱叶的水提液处理组抑制率明显低于葱白水浸提液。进一步说明葱白的水提液对铜绿微囊藻的抑制作用明显强于葱叶水浸提液。 

EC₅₀按照第5d计算，葱白的水提液的抑制率达到了50%以上，葱叶的水提液的抑制率没有达到50%，故只计算葱白的水提液的半抑制浓度，结果为12.7 mL/L。从EC₅₀值可以看出，葱白的水提液具有非常强的抑藻能力。

实施例4：

不同浓度的大葱葱白、葱叶水浸提液对铜绿微囊藻的比增长率的影响。

表1  大葱葱白水浸提液对铜绿微囊藻的比增长率的影响(%)

表中数据为平均值±S (n=3)，Data are mean values ±S (n=3)

*与同期对照组比较，P＜0.05；**与同期对照组比较，P＜0.01

表 2  大葱葱叶水浸提液对铜绿微囊藻的比增长率的影响(%)

表中数据为平均值±S(n=3)，Data are mean values ±S(n=3)

*与同期对照组比较，P＜0.05；**与同期对照组比较，P＜0.01

由表1和表2知，与同期对照组比较，葱白的水提液各处理组对铜绿微囊藻的比增长率均低于同期对照组，随着处理时间的延长，比增长率较对照组愈低，从第2d开始，浓度为50 mL/L处理组均出现了负增长；葱叶的水提液实验期间没有出现负增长。说明葱白的水提液不仅能明显抑制铜绿微囊藻藻细胞生长，还可能抑制了细胞的分裂增殖，浓度越高抑制效果越明显，而葱叶的水提液则是抑制了细胞的生长过程。 

含有可水培陆生植物的抑藻剂专利购买费用说明

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Q:专利著录项目变更费用如何缴交

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