专利摘要

专利摘要

本发明公开了一种迷迭香提取物的制备方法，包括步骤：S1、以迷迭香枝叶为原料，同时提取鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸，得到提取液Ⅰ；S2、对所述提取液Ⅰ进行浓缩，得到浓缩液；S3、向所述浓缩液中加水进行稀释，得到悬浊液；S4、采用碱溶工艺处理所述悬浊液，得到提取液Ⅱ和含有熊果酸的提取物Ⅰ；S5、采用酸沉工艺处理所述提取液Ⅱ，得到含有鼠尾草酚和鼠尾草酸的提取物Ⅱ，实现了同时提取和分离含有尾草酚、鼠尾草酸的提取物和含有熊果酸的提取物。

权利要求

1.一种迷迭香提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、以迷迭香枝叶为原料，同时提取鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸，得到提取液Ⅰ；

S2、对所述提取液Ⅰ进行浓缩，得到浓缩液；

S3、向所述浓缩液中加水进行稀释，得到悬浊液；

S4、采用碱溶工艺处理所述悬浊液，得到提取液Ⅱ和含有熊果酸的提取物Ⅰ；

S5、采用酸沉工艺处理所述提取液Ⅱ，得到含有鼠尾草酚和鼠尾草酸的提取物Ⅱ。

2.如权利要求1所述的迷迭香提取物的制备方法，其特征在于，在所述步骤S1之前还包括：

S0、对迷迭香枝叶进行预处理，所述预处理包括提取迷迭香精油和水溶性成分。

3.如权利要求1所述的迷迭香提取物的制备方法，其特征在于，在步骤S1中所述提取方法包括有机溶剂提取法，工艺条件包括：料液比为1﹕6～1﹕12g/mL；提取时间为15-150min；提取溶剂为乙醇-水溶液，其中所述乙醇-水溶液中的乙醇的体积分数为60-100％；提取温度为60-90℃。

4.如权利要求1所述的迷迭香提取物的制备方法，其特征在于，在步骤S2中所述浓缩液的体积浓缩为所述提取液Ⅰ体积的1/4-3/4。

5.如权利要求1所述的迷迭香提取物的制备方法，其特征在于，在步骤S3中所述水的体积为所述浓缩液体积的1-5倍。

6.如权利要求1所述的迷迭香提取物的制备方法，其特征在于，在步骤S4中所述碱溶工艺包括：向所述悬浊液中按体积比20：1-10：1加入质量分数为5％-10％的碱-水溶液，在温度为60-90℃下反应5-10min，得到提取物Ⅰ和提取液Ⅱ。

7.如权利要求1所述的迷迭香提取物的制备方法，其特征在于，在步骤S5中所述酸沉工艺包括：向所述提取液Ⅱ中加入质量分数为2％-10％的酸-水溶液，调节所述提取液Ⅱ的pH为2-3，在温度为60-90℃下反应5-10min，得到提取物Ⅱ。

8.如权利要求1所述的迷迭香提取物的制备方法，其特征在于，还包括对所述提取物Ⅱ的进行乙醇-水结晶工艺处理，所述乙醇-水结晶工艺包括：将所述提取物Ⅱ用无水乙醇配置成浓度为5-20mg/mL的溶液，加热至沸腾；之后向所述溶液中缓慢加水至沉淀开始析出，将所述溶液转移至0-5℃的环境中结晶1-3h，得到提取物Ⅲ。

9.如权利要求8所述的迷迭香提取物的制备方法，其特征在于，得到所述提取物Ⅲ之后还包括对所述提取物Ⅲ进行大孔吸附树脂法分离工艺处理，所述大孔吸附树脂法分离工艺包括：用体积分数为70-100％的乙醇-水溶液将所述提取物Ⅲ配制成浓度为2.5-20mg/mL的吸附原液，以流速为0.5-5mL/min的速度上样，以流速为0.5-2mL/min的速度洗脱，其中，吸附温度为20-40℃，脱附温度为10-50℃，采用的脱附剂为体积分数为60-100％的乙醇-水溶液，得到提取物Ⅳ。

10.如权利要求1-9任一所述的迷迭香提取物的制备方法，其特征在于，还包括对所述提取物Ⅰ进行乙醇-水结晶工艺处理和重结晶工艺处理；所述乙醇-水结晶工艺包括将所述提取物Ⅰ用无水乙醇配置成浓度为5-20mg/mL的溶液，加热至沸腾；之后向所述溶液中缓慢加水至沉淀开始析出，将所述溶液转移至0-5℃的环境中结晶1-3h，得到提取物Ⅴ；所述重结晶工艺包括：将所述提取物Ⅴ用沸腾有机溶剂溶解至饱和状态，趁热过滤，将滤液置于0-5℃环境中，结晶1-3h，得到提取物Ⅵ，重复所述重结晶工艺，得到提取物Ⅶ。

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物提取物的制备方法，特别是涉及一种迷迭香提取物的制备方法。

背景技术

迷迭香(Rosemary)，拉丁学名Rosmarinus officinalis L.，唇形科迷迭香属植物。迷迭香在湖南、云南、海南、河南、广西、贵州、新疆、浙江等省都有大面积种植。国内最大的迷迭香种植基地位于河南省禹州市，2012年其标准化种植基地、育苗基地面积即已分别达到2万亩、200亩，该基地规划种植面积为10万亩。就湖南省而言，岳阳、长沙、常德、衡阳、怀化、湘西自治州等地相继建立了迷迭香种植基地，总种植面积5000余亩，年产迷迭香鲜枝叶4000余吨。按此趋势发展下去，我国的迷迭香资源将会越来越丰富。

迷迭香中的二萜类的鼠尾草酚和鼠尾草酸与三萜类的熊果酸以其优越的生物活性，广泛地应用于医药、日化、食品等领域，是本领域技术人员研究的重点。

目前，关于迷迭香枝叶中鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的提取、分离研究，主要是单独提取、分离二萜类的鼠尾草酚和/或鼠尾草酸，或单独提取三萜类的熊果酸，没有一种能够同时制备鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的方法，且制备工艺复杂，不易实现工业化，这都造成了迷迭香资源的浪费。

发明内容

为了解决如何同时提取和分离含有尾草酚、鼠尾草酸的提取物和含有熊果酸的提取物的技术问题，本发明提出一种迷迭香提取物的制备方法。

本发明的技术问题通过以下的技术方案予以解决：

一种迷迭香提取物的制备方法，包括如下步骤：

S1、以迷迭香枝叶为原料，同时提取鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸，得到提取液Ⅰ；

S2、对所述提取液Ⅰ进行浓缩，得到浓缩液；

S3、向所述浓缩液中加水进行稀释，得到悬浊液；

S4、采用碱溶工艺处理所述悬浊液，得到提取液Ⅱ和含有熊果酸的提取物Ⅰ；

S5、采用酸沉工艺处理所述提取液Ⅱ，得到含有鼠尾草酚和鼠尾草酸的提取物Ⅱ。

进一步地，在所述步骤S1之前还可以包括：S0、对迷迭香枝叶进行预处理，所述预处理包括提取出迷迭香精油和水溶性成分。

优选地，在步骤S1中所述提取方法包括有机溶剂提取法，工艺条件包括：料液比为1﹕6-1﹕12g/mL；提取时间为15-150min；提取溶剂为乙醇-水溶液，其中所述乙醇-水溶液中的乙醇的体积分数为60-100％；提取温度为60-90℃

优选地，在步骤S2中所述浓缩液的体积浓缩至所述提取液Ⅰ体积的1/4-3/4。

优选地，在步骤S3中所述水的体积为所述浓缩液体积的1-5倍。

优选地，在步骤S4中所述碱溶工艺包括：向所述悬浊液中按体积比20：1-10：1加入质量分数为5％-10％的碱-水溶液，在温度为60-90℃下反应5-10min，之后过滤，得到提取物Ⅰ和提取液Ⅱ。

优选地，在步骤S5中所述酸沉工艺包括：向所述提取液Ⅱ中加入质量分数为2％-10％的酸-水溶液，调节所述提取液Ⅱ的pH为2-3，在温度为60-90℃下反应5-10min，得到提取物Ⅱ。

优选地，还包括对所述提取物Ⅱ的进行乙醇-水结晶工艺处理，所述乙醇-水结晶工艺包括：将所述提取物Ⅱ用无水乙醇配置成浓度为5-20mg/mL的溶液，加热至沸腾；之后向所述溶液中缓慢加水至沉淀开始析出，将所述溶液转移至0-5℃的环境中结晶1-3h，得到提取物Ⅲ。

进一步地，得到所述提取物Ⅲ之后还包括对所述提取物Ⅲ进行大孔吸附树脂法分离工艺处理，所述大孔吸附树脂法分离工艺包括：用体积分数为70-100％的乙醇-水溶液将所述提取物Ⅲ配制成浓度为2.5-20mg/mL的吸附原液，以流速为0.5-5mL/min的速度上样，以流速为0.5-2mL/min的速度洗脱，其中，吸附温度为20-40℃，脱附温度为10-50℃，采用的脱附剂为体积分数为60-100％的乙醇-水溶液，得到提取物Ⅳ。

优选地，还包括对所述提取物Ⅰ进行乙醇-水结晶工艺处理和重结晶工艺处理；所述乙醇-水结晶工艺包括将所述提取物Ⅰ用无水乙醇配置成浓度为5-20mg/mL的溶液，加热至沸腾；之后向所述溶液中缓慢加水至沉淀开始析出，将所述溶液转移至0-5℃的环境中结晶1-3h，得到提取物Ⅴ；所述重结晶工艺包括：将所述提取物Ⅴ用沸腾有机溶剂溶解至饱和状态，趁热过滤，将滤液置于0-5℃环境中，结晶1-3h，得到提取物Ⅵ，重复所述重结晶工艺，得到提取物Ⅶ。

本发明与现有技术对比的有益效果包括：

本发明通过将迷迭香枝叶中的鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸同时提取出来，得到含有上述三种成分的提取液Ⅰ；对所述提取液Ⅰ进行浓缩，得到含有鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的浓缩液；向所述浓缩液中加水进行稀释，使溶剂环境接近于水环境，同时利用鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸不溶于水的性质，使得稀释后的浓缩液中的鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸从溶液中析出，以固体微粒的形式均匀分散在溶液中，形成悬浊液，前述的浓缩工艺对此步骤中形成均匀的悬浊液有较大的影响，如果没有浓缩工艺，而直接加水稀释提取液Ⅰ至接近水环境则会出现乳化现象，导致后续工艺不能正常进行；另外，由于鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的分子结构中均含有羧基和酚羟基，均能和碱反应生成相应的盐，在近水环境中的固液分散非均相体系中进行的碱溶反应，变得相对温和，反应完成需要的时间延长，使得酸性较强的鼠尾草酚和鼠尾草酸优先完成碱溶反应而溶解在水溶液中，而熊果酸还未及反应或者只进行了少量的反应，主要以固体微粒的形式存在，通过固液分离，就得到了含有熊果酸的提取物Ⅰ及含有鼠尾草酚和鼠尾草酸相应盐的提取液Ⅱ，再向提取液Ⅱ中加入酸，调节提取液Ⅱ呈酸性，使得鼠尾草酚和鼠尾草酸以游离分子的形式从溶液中析出形成固体微粒，通过固液分离，得到含有鼠尾草酚和鼠尾草酸的提取物Ⅱ，从而实现鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的同时提取和分离，提高了迷迭香资源的利用率。

进一步的有益效果：在某些优选的实施例中，先将迷迭香枝叶中的精油和水溶性成分提取出来，再以剩余的固体残渣为原料同时提取固体残渣中的鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸。缺少了水溶性杂质的干扰，加之原料的细胞壁被预先破坏，细胞内容物—鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的溶出效率更高，较高的目标成分含量也有效地减轻了提取物的后续分离、纯化负担。精油，水溶性成分，鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸三种脂溶性成分的一体化提制，显著地提高了迷迭香原料的利用率。

更进一步的，在某些优选的实施例中，同时提取、分离鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸工艺中采用的提取、分离手段涉及水蒸气蒸馏、有机溶剂提取、浓缩、水沉、碱溶反应、酸沉反应、固液分离、乙醇-水结晶、大孔树脂吸附和重结晶，均属化学工业中的常用技术，操作简单，对设备要求较低，为迷迭香资源在工业上的高效利用提供了技术支持。

附图说明

图1是本发明中制备含鼠尾草酚、鼠尾草酸提取物和含熊果酸提取物的流程图。

图2是本发明实施例1中提取物Ⅰ的高效液相色谱图。

图3是本发明实施例1中提取物Ⅱ的高效液相色谱图。

图4是本发明实施例1中提取物Ⅲ的高效液相色谱图。

图5是本发明实施例1中提取物Ⅳ的高效液相色谱图。

图6是本发明实施例1中提取物Ⅴ的高效液相色谱图。

图7是本发明实施例1中提取物Ⅵ的高效液相色谱图。

图8是本发明实施例1中提取物Ⅶ的高效液相色谱图。

具体实施方式

下面结合优选的实施方式对本发明作进一步说明。

一种迷迭香提取物的制备方法，可以包括如下步骤：

100、对迷迭香枝叶进行预处理，所述预处理包括提取出迷迭香精油和水溶性成分。

101、以迷迭香枝叶为原料，同时提取鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸，得到提取液Ⅰ；

102、对所述提取液Ⅰ进行浓缩，得到浓缩液；其中，所述浓缩液的体积浓缩至所述提取液Ⅰ的1/4-3/4。

103、向所述浓缩液中加水进行稀释，得到悬浊液；其中，所述水的体积为所述浓缩液体积的1-5倍。

104、采用碱溶工艺处理所述悬浊液，得到提取液Ⅱ和含有熊果酸的提取物Ⅰ；其中所述碱溶工艺包括：向所述悬浊液中按体积比20：1-10：1加入质量分数为5％-10％的碱-水溶液，在温度为60-90℃下反应5-10min，之后过滤，得到提取物Ⅰ和提取液Ⅱ。其中，所述碱-水溶液中碱的种类可以包括氢氧化钠、碳酸钠或者碳酸氢钠等。

根据工业生产的需求，还可以对所述提取物Ⅰ进行乙醇-水结晶工艺处理；所述乙醇-水结晶工艺包括将所述提取物Ⅰ用无水乙醇配置成浓度为5-20mg/mL的溶液，加热至沸腾；之后向所述溶液中缓慢加水至开始沉淀开始析出时，将所述溶液转移至0-5℃的环境中结晶1-3h，得到提取物Ⅴ。根据工业生产的需求，还可以对所述提取物Ⅴ进行重结晶工艺处理，所述重结晶工艺处理包括：将所述提取物Ⅴ用沸腾有机溶剂溶解至饱和状态，趁热过滤，将滤液置于0-5℃环境中，结晶1-3h，得到提取物Ⅵ，重复所述重结晶工艺，得到提取物Ⅶ，提取物Ⅵ中熊果酸的含量要高于提取物Ⅴ中熊果酸的含量，提取物Ⅶ中熊果酸的含量要高于提取物Ⅵ中熊果酸的含量。其中，所述有机溶剂可以包括甲醇、乙醇或者乙酸乙酯等。

105、采用酸沉工艺处理所述提取液Ⅱ，得到含有鼠尾草酚和鼠尾草酸的提取物Ⅱ；所述酸沉工艺包括：向所述提取液Ⅱ中加入质量分数为2％-10％的酸-水溶液，调节所述提取液Ⅱ的pH为2-3，在温度为60-90℃下反应5-10min，之后过滤，得到含有鼠尾草酚和鼠尾草酸的提取物Ⅱ。其中，所述酸的种类可以包括磷酸、硫酸、盐酸、醋酸或者硝酸等。

此外，根据工业生产需求，还可以纯化提取物Ⅱ，可以对所述提取物Ⅱ的进行乙醇-水结晶工艺处理，所述乙醇-水结晶工艺处理包括：将所述提取物Ⅱ用无水乙醇配置成浓度为5-20mg/mL的溶液，加热至沸腾；之后向所述溶液中缓慢加水至开始沉淀开始析出时，将所述溶液转移至0-5℃的环境中结晶1-3h，得到提取物Ⅲ，纯化后的提取物Ⅲ中鼠尾草酚和鼠尾草酸的含量要高于提取物Ⅱ中鼠尾草酚和鼠尾草酸的含量。

为了进一步纯化含有鼠尾草酚和鼠尾草酸的提取物Ⅲ，还包括对所述提取物Ⅲ进行大孔吸附树脂法分离工艺处理，所述大孔吸附树脂法分离工艺包括：用体积分数为70-100％的乙醇-水溶液将所述提取物Ⅲ配制成浓度为2.5-20mg/mL的吸附原液，以流速为0.5-5mL/min的速度上样，以流速为0.5-2mL/min的速度洗脱，其中，吸附温度为20-40℃，脱附温度为10-50℃，采用的脱附剂为体积分数为60-100％的乙醇-水溶液，得到提取物Ⅳ。

其中，所述大孔树脂吸附法进一步纯化含有鼠尾草酚和鼠尾草酸的提取物Ⅲ工艺中的大孔树脂还可以包括X-5大孔树脂、AB-8大孔树脂、NKA大孔树脂、NKA-Ⅱ大孔树脂或者NKA-9大孔树脂中的任一大孔树脂。

需要说明的是，本发明通过高效液相色谱法检测实施例中各步骤中得到的提取物Ⅰ、提取物Ⅱ、提取物Ⅲ、提取物Ⅳ、提取物Ⅴ、提取物Ⅵ和提取物Ⅶ中目标成分的纯度，并计算各提取物中目标成分在各步骤中的收率。

高效液相色谱条件：色谱柱为Agilent TC-C₁₈柱(4.6×250mm，5μm)。流动相为甲醇(A)和0.1％磷酸水溶液(B)，流速0.8mL/min，梯度洗脱程序：0～40min，A体积分数从70％增加至86％；40.01～70min，A体积分数为86％。检测波长：0～45min为285nm，45.01～70min为210nm。柱温30℃，进样量0～25μL。

实施例1

原料的预处理：(步骤200)

称取2.5kg迷迭香枝叶，置于精油提取器中，加入50L水，加热至沸腾状态，通过水蒸气蒸馏法提取迷迭香枝叶中的精油和水溶性成分，直到蒸馏出来的精油的量不再变化时，停止加热，分别收集迷迭香精油和含有迷迭香水溶性成分的提取液，将剩余固体残渣烘干、粉碎，得到预处理后的原料。

鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的同时提取：(步骤201)

称取上述预处理后的原料1kg，置于50L的提取罐中，按照料液比1﹕6(kg/L)加入乙醇的体积分数为80％的乙醇-水溶液6L，搅拌，于80℃下恒温提取90min，停止加热、搅拌，趁热过滤，得到含有鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的提取液Ⅰ。

浓缩：(步骤202)

将上述提取液Ⅰ置于减压浓缩装置中，于50℃下减压浓缩至原体积的3/4，得到含有鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的浓缩液。

稀释：(步骤203)

将上述浓缩液转移至上述提取罐中，加入体积为浓缩液5倍的水，搅拌，得到均匀分散的悬浊液。

碱溶工艺处理上述悬浊液：(步骤204)

向上述悬浊液中一次性加入体积为上述浓缩液体积1/10的碳酸钠-水溶液，其中碳酸钠水溶液中碳酸钠的质量分数为5％，搅拌，于70℃下反应5min，真空抽滤，得到含有熊果酸的提取物Ⅰ和含有鼠尾草酚、鼠尾草酸相应盐的提取液Ⅱ，将提取物Ⅰ于50℃下烘干备用，检测并计算提取物Ⅰ中熊果酸的纯度和收率，结果如表1。

酸沉工艺处理上述提取液Ⅱ：(步骤205)

将上述提取液Ⅱ转移至上述提取罐中，搅拌，用体积分数为10％的磷酸-水溶液调节提取液Ⅱ的pH至2.5，在75℃下反应5min，真空抽滤，得到含有鼠尾草酚和鼠尾草酸的提取物Ⅱ，于50℃下烘干备用，检测并计算提取物Ⅱ中鼠尾草酚和鼠尾草酸的纯度和收率，结果如表1。

乙醇-水结晶法分离鼠尾草酚和鼠尾草酸：

将上述提取物Ⅱ置于上述提取罐中，以料液比1﹕20(g/L)加入无水乙醇，搅拌、加热至沸腾，使得提取物Ⅱ充分溶解，向提取罐中缓慢加水至局部产生沉淀，在0℃下冷却结晶1h，部分杂质以晶体的形式析出，真空抽滤，将滤液浓缩、干燥，得到鼠尾草酚和鼠尾草酸纯度分别高于提取物Ⅱ中鼠尾草酚和鼠尾草酸纯度的提取物Ⅲ，检测并计算提取物Ⅲ中鼠尾草酚和鼠尾草酸的纯度和收率，结果如表1。

大孔树脂吸附法进一步分离鼠尾草酚和鼠尾草酸：

大孔吸附树脂需进行预处理：(1)用95％乙醇在室温条件下浸泡24h。(2)浸泡完毕，湿法装柱，用无水乙醇洗至流出液在200～400nm无紫外吸收，再用去离子水洗至无醇味。(3)用5％ 的盐酸水溶液在室温下浸泡4h，浸泡完毕用去离子水洗至流出液呈中性。(4)用2％(w)的氢氧化钠水溶液在室温下浸泡4h，浸泡完毕用去离子水洗至流出液呈中性。(5)用去离子水室温浸泡贮存，备用。

取预处理好的H-103大孔吸附树脂100mL装于规格为Φ26×700mm玻璃层析柱中，将提取物Ⅲ配制成浓度为10mg/mL的吸附原液，以5mL/min的流速在20℃下进行动态吸附，上样量为130mL；吸附结束后，在室温下用12BV(12倍的柱体积，1200mL)无水乙醇(乙醇体积分数为100％)进行洗脱，洗脱流速为1mL/min，收集洗脱液，浓缩、干燥，得到鼠尾草酚和鼠尾草酸纯度分别高于提取物Ⅲ中鼠尾草酚和鼠尾草酸纯度的提取物Ⅳ，检测并计算提取物Ⅳ中鼠尾草酚和鼠尾草酸的纯度和收率，结果如表1。

乙醇-水结晶法分离熊果酸：

将上述提取物Ⅰ置于上述提取罐中，以料液比1﹕10(g/L)加入无水乙醇，搅拌、加热至沸腾，使得提取物Ⅰ充分溶解，向提取罐中缓慢加水至局部产生沉淀，在5℃下冷却结晶2h，真空抽滤，将滤液浓缩、干燥，得到熊果酸纯度高于提取物Ⅰ中熊果酸纯度的提取物Ⅴ，检测并计算提取物Ⅴ中熊果酸的纯度和收率，结果如表1。

重结晶法进一步分离熊果酸：

称取100g上述提取物Ⅴ置于上述提取罐中，向提取罐中加入甲醇，搅拌、加热溶解至沸腾，使得提取罐中的提取物Ⅴ完全溶解，向提取罐中加入2g粉状活性炭，脱色30min，真空抽滤，将滤液浓缩至局部产生沉淀，并转移至所述提取罐中，加热至沸腾，使得局部产生的沉淀重新溶解，在0℃下结晶1h，真空抽滤、烘干，得到一次结晶产物，记为提取物Ⅵ，检测并计算提取物Ⅵ中熊果酸的纯度和收率，结果如表1。

取上述一次结晶产物，重复上述操作，得到二次结晶产物，记为提取物Ⅶ，检测并计算提取物Ⅶ中熊果酸的纯度和收率，结果如表1。

在本实施例中的提取物Ⅰ、提取物Ⅱ、提取物Ⅲ、提取物Ⅳ、提取物Ⅴ、提取物Ⅵ和提取物Ⅶ经过高效色谱仪(LA-20AT高效液相色谱仪，岛津国际贸易有限公司)获取如图2-8所示的高效液相色谱图，之后通过高效液相色谱法检测实施例中各步骤中得到的提取物Ⅰ、提取物Ⅱ、提取物Ⅲ、提取物Ⅳ、提取物Ⅴ、提取物Ⅵ和提取物Ⅶ中目标成分的纯度，计算各提取物中目标成分在各步骤中的收率。

高效液相色谱条件：色谱柱为Agilent TC-C₁₈柱(4.6×250mm，5μm)。流动相为甲醇(A)和0.1％磷酸水溶液(B)，流速0.8mL/min，梯度洗脱程序：0～40min，A体积分数从70％增加至86％；40.01～70min，A体积分数为86％。检测波长：0～45min为285nm，45.01～70min为210nm。柱温30℃，进样量0～25μL。

作为本实施例的其它变形方式，所述碱溶反应中的碱还可以为氢氧化钠或者碳酸氢钠。

作为本实施例的其它变形方式，所述酸沉反应中的酸还可以为硫酸、盐酸、醋酸或者硝酸。

作为本实施例的其它变形方式，所述大孔树脂吸附法进一步分离鼠尾草酚和鼠尾草酸工艺中的大孔树脂还可以为X-5大孔树脂、AB-8大孔树脂、NKA大孔树脂、NKA-Ⅱ大孔树脂或者NKA-9大孔树脂。

作为本实施例的其它变形方式，所述重结晶法进一步分离熊果酸工艺中的结晶溶剂还可以为乙醇或者乙酸乙酯。

表1.实施例1中各提取物中目标成分的纯度和收率

实施例2

原料的预处理：(步骤300)

称取2.5kg迷迭香枝叶，置于精油提取器中，加入50L水，加热至沸腾状态，通过水蒸气蒸馏法提取迷迭香枝叶中的精油和水溶性成分，直到蒸馏出来的精油的量不再变化时，停止加热，分别收集迷迭香精油和含有迷迭香水溶性成分的提取液，将剩余固体残渣烘干、粉碎，得到预处理后的原料。

鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的同时提取：(步骤301)

称取上述预处理后的原料1kg，置于50L的提取罐中，按照料液比1﹕12(kg/L)加入乙醇的体积分数为60％的乙醇-水溶液12L，搅拌，于90℃下恒温提取150min，停止加热、搅拌，趁热过滤，得到含有鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的提取液Ⅰ。

浓缩：(步骤302)

将上述提取液Ⅰ置于减压浓缩装置中，于50℃下减压浓缩至原体积的1/2，得到含有鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的浓缩液。

稀释：(步骤303)

将上述浓缩液转移至上述提取罐中，加入体积为浓缩液1倍的水，搅拌，得到均匀分散的悬浊液。

碱溶工艺处理上述悬浊液：(步骤304)

向上述悬浊液中一次性加入体积为上述浓缩液体积1/20的碳酸钠-水溶液，其中碳酸钠水溶液中碳酸钠的质量分数为10％，搅拌，于60℃下反应10min，真空抽滤，得到含有熊果酸的提取物Ⅰ和含有鼠尾草酚、鼠尾草酸相应盐的提取液Ⅱ，将提取物Ⅰ于50℃下烘干备用，检测并计算提取物Ⅰ中熊果酸的纯度和收率，结果如表2。

酸沉工艺处理上述提取液Ⅱ：(步骤305)

将上述提取液Ⅱ转移至上述提取罐中，搅拌，用质量分数为6％的磷酸-水溶液调节提取液Ⅱ的pH至2.5，在60℃下反应8min，真空抽滤，得到含有鼠尾草酚和鼠尾草酸的提取物Ⅱ，于50℃下烘干备用，检测并计算提取物Ⅱ中鼠尾草酚和鼠尾草酸的纯度和收率，结果如表2。

乙醇-水结晶法分离鼠尾草酚和鼠尾草酸：

将上述提取物Ⅱ置于上述提取罐中，以料液比1﹕10(g/L)加入无水乙醇，搅拌、加热至沸腾，使得提取物Ⅱ充分溶解，向提取罐中缓慢加水至局部产生沉淀，在5℃下冷却结晶2h，部分杂质以晶体的形式析出，真空抽滤，将滤液浓缩、干燥，得到鼠尾草酚和鼠尾草酸纯度分别高于提取物Ⅱ中鼠尾草酚和鼠尾草酸纯度的提取物Ⅲ，检测并计算提取物Ⅲ中鼠尾草酚和鼠尾草酸的纯度和收率，结果如表2。

大孔树脂吸附法进一步分离鼠尾草酚和鼠尾草酸：

大孔吸附树脂的预处理：(1)用95％乙醇在室温条件下浸泡24h。(2)浸泡完毕，湿法装柱，用无水乙醇洗至流出液在200～400nm无紫外吸收，再用去离子水洗至无醇味。(3)用5％ 的盐酸水溶液在室温下浸泡4h，浸泡完毕用去离子水洗至流出液呈中性。(4)用2％(w)的氢氧化钠水溶液在室温下浸泡4h，浸泡完毕用去离子水洗至流出液呈中性。(5)用去离子水室温浸泡贮存，备用。

取预处理好的H-103大孔吸附树脂100mL装于规格为Φ26×700mm玻璃层析柱中，将提取物Ⅲ配制成浓度为2.5mg/mL的吸附原液，以0.5mL/min的流速在30℃下进行动态吸附，上样量为130mL；吸附结束后，在室温下用12BV(床层体积，约为1200mL)体积分数为80％的乙醇-水溶液进行洗脱，洗脱流速为0.5mL/min，收集洗脱液，浓缩、干燥，得到鼠尾草酚和鼠尾草酸纯度分别高于提取物Ⅲ中鼠尾草酚和鼠尾草酸纯度的提取物Ⅳ，检测并计算提取物Ⅳ中鼠尾草酚和鼠尾草酸的纯度和收率，结果如表2。

乙醇-水结晶法分离熊果酸：

将上述提取物Ⅰ置于上述提取罐中，以料液比1﹕20(g/L)加入无水乙醇，搅拌、加热至沸腾，使得提取物Ⅰ充分溶解，向提取罐中缓慢加水至局部产生沉淀，在0℃下冷却结晶1h，真空抽滤，将滤液浓缩、干燥，得到熊果酸纯度高于提取物Ⅰ中熊果酸纯度的提取物Ⅴ，检测并计算提取物Ⅴ中熊果酸的纯度和收率，结果如表2。

重结晶法进一步分离熊果酸：

称取100g上述提取物Ⅴ置于上述提取罐中，向提取罐中加入甲醇，搅拌、加热溶解至沸腾，使得提取罐中的提取物Ⅴ完全溶解，向提取罐中加入2g粉状活性炭，脱色30min，真空抽滤，将滤液浓缩至局部产生沉淀，并转移至所述提取罐中，加热至沸腾，使得所述沉淀重新溶解在甲醇中，在5℃下结晶3h，真空抽滤、烘干，得到一次结晶产物，记为提取物Ⅵ，检测并计算提取物Ⅵ中熊果酸的纯度和收率，结果如表2。

取上述一次结晶产物，重复上述操作，得到二次结晶产物，记为提取物Ⅶ，检测并计算提取物Ⅶ中熊果酸的纯度和收率，结果如表2。

表2.实施例2中各提取物中目标成分的纯度和收率

实施例3

原料的预处理：(步骤400)

称取2.5kg迷迭香枝叶，置于精油提取器中，加入50L水，加热至沸腾状态，通过水蒸气蒸馏法提取迷迭香枝叶中的精油和水溶性成分，直到蒸馏出来的精油的量不再变化时，停止加热，分别收集迷迭香精油和含有迷迭香水溶性成分的提取液，将剩余固体残渣烘干、粉碎，得到预处理后的原料。

鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的同时提取：(步骤401)

称取上述预处理后的原料1kg，置于50L的提取罐中，按照料液比1﹕10(kg/L)加入乙醇的体积分数为100％的乙醇-水溶液10L，搅拌，于60℃下恒温提取15min，停止加热、搅拌，趁热过滤，得到含有鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的提取液Ⅰ。

浓缩：(步骤402)

将上述提取液Ⅰ置于减压浓缩装置中，于50℃下减压浓缩至原体积的1/4，得到含有鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的浓缩液。

稀释：(步骤403)

将上述浓缩液转移至上述提取罐中，加入体积为浓缩液3倍的水，搅拌，得到均匀分散的悬浊液。

碱溶工艺处理上述悬浊液：(步骤404)

向上述悬浊液中一次性加入体积为上述浓缩液体积1/15的碳酸钠-水溶液，其中碳酸钠水溶液中碳酸钠的质量分数为8％，搅拌，于90℃下反应8min，真空抽滤，得到含有熊果酸的提取物Ⅰ和含有鼠尾草酚、鼠尾草酸相应盐的提取液Ⅱ，将提取物Ⅰ于50℃下烘干备用，检测并计算提取物Ⅰ中熊果酸的纯度和收率，结果如表3。

酸沉工艺处理上述提取液Ⅱ：(步骤405)

将上述提取液Ⅱ转移至上述提取罐中，搅拌，用质量分数为2％的磷酸-水溶液调节提取液Ⅱ的pH至2.5，在90℃下反应10min，真空抽滤，得到含有鼠尾草酚和鼠尾草酸的提取物Ⅱ，于50℃下烘干备用，检测并计算提取物Ⅱ中鼠尾草酚和鼠尾草酸的纯度和收率，结果如表3。

乙醇-水结晶法分离鼠尾草酚和鼠尾草酸：

将上述提取物Ⅱ置于上述提取罐中，以料液比1﹕5(g/L)加入无水乙醇，搅拌、加热至沸腾，使得提取物Ⅱ充分溶解，向提取罐中缓慢加水至局部产生沉淀，在2℃下冷却结晶3h，杂质以晶体的形式析出，真空抽滤，将滤液浓缩、干燥，得到鼠尾草酚和鼠尾草酸纯度分别高于提取物Ⅱ中鼠尾草酚和鼠尾草酸纯度的提取物Ⅲ，检测并计算提取物Ⅲ中鼠尾草酚和鼠尾草酸的纯度和收率，结果如表3。

大孔树脂吸附法进一步分离鼠尾草酚和鼠尾草酸：

大孔吸附树脂的预处理：(1)用95％乙醇在室温条件下浸泡24h。(2)浸泡完毕，湿法装柱，用无水乙醇洗至流出液在200～400nm无紫外吸收，再用去离子水洗至无醇味。(3)用5％ 的盐酸水溶液在室温下浸泡4h，浸泡完毕用去离子水洗至流出液呈中性。(4)用2％(w)的氢氧化钠水溶液在室温下浸泡4h，浸泡完毕用去离子水洗至流出液呈中性。(5)用去离子水室温浸泡贮存，备用。

取预处理好的H-103大孔吸附树脂100mL装于规格为Φ26×700mm玻璃层析柱中，将提取物Ⅲ配制成浓度为20mg/mL的吸附原液，以2mL/min的流速在40℃下进行动态吸附，上样量为130mL；吸附结束后，在室温下用12BV(床层体积，约为1200mL)体积分数为60％的乙醇-水溶液进行洗脱，洗脱流速为2mL/min，收集洗脱液，浓缩、干燥，得到鼠尾草酚和鼠尾草酸纯度分别高于提取物Ⅲ中鼠尾草酚和鼠尾草酸纯度的提取物Ⅳ，检测并计算提取物Ⅳ中鼠尾草酚和鼠尾草酸的纯度和收率，结果如表3。

乙醇-水结晶法分离熊果酸：

将上述提取物Ⅰ置于上述提取罐中，以料液比1﹕5(g/L)加入无水乙醇，搅拌、加热至沸腾，使得提取物Ⅰ充分溶解，向提取罐中缓慢加水至局部产生沉淀，在2℃下冷却结晶3h，真空抽滤，将滤液浓缩、干燥，得到熊果酸纯度高于提取物Ⅰ中熊果酸纯度的提取物Ⅴ，检测并计算提取物Ⅴ中熊果酸的纯度和收率，结果如表3。

重结晶法进一步分离熊果酸：

称取100g上述提取物Ⅴ置于上述提取罐中，向提取罐中加入甲醇，搅拌、加热溶解至沸腾，使得提取罐中的提取物Ⅴ完全溶解，向提取罐中加入2g粉状活性炭，脱色30min，真空抽滤，将滤液浓缩至局部产生沉淀，并转移至所述提取罐中，加热至沸腾，使得所述沉淀重新溶解在甲醇中，在2℃下结晶2h，真空抽滤、烘干，得到一次结晶产物，记为提取物Ⅵ，检测并计算提取物Ⅵ中熊果酸的纯度和收率，结果如表3。

取上述一次结晶产物，重复上述操作，得到二次结晶产物，记为提取物Ⅶ，检测并计算提取物Ⅶ中熊果酸的纯度和收率，结果如表3。

表3.实施例3中各提取物中目标成分的纯度和收率

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干等同替代或明显变型，而且性能或用途相同，都应当视为属于本发明的保护范围。

一种迷迭香提取物的制备方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。