专利摘要
专利摘要
本发明公开了对乙型肝炎病毒(HBV)感染具有治疗效果的新的组装效应物化合物。本文所述的组装效应物分子可导致有缺陷的病毒组装，并且还可影响与慢性HBV感染相关的其它病毒活性。本发明还公开了合成本发明化合物的方法，通过给药本发明化合物治疗HBV的方法，以及这些化合物在制备用于抗HBV的药物中的用途。
权利要求
1.药物组合物，其包含：(i)具有下列结构的式1化合物：
或其药学上可接受的盐或立体异构体，其中：
X选自
q为0、1、2、3或4；
p为0、1、2、3或4；
r为0、1、2、3或4；
R1每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)；
w为0、1或2；
R′每次存在时独立地选自-H和-C1-C6烷基；
R″每次存在时独立地选自-H和-C1-C6烷基；或者R′和R″与同它们相连的氮原子一起形成4-7元杂环；
R2每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)；和
R3选自-H和-C1-C6烷基；
其中C1-C6烷基或C1-C6烷氧基每次存在时可独立地任选地被一个、两个或三个卤素所取代；和
(ii)药学上可接受的赋形剂。
2.根据权利要求1的药物组合物，其中p为1。
3.根据权利要求1的药物组合物，其中p为2。
4.根据权利要求1的药物组合物，其中式1化合物由式1-A所代表：
或其药学上可接受的盐或立体异构体，其中：
R21每次存在时独立地选自-H和卤素；
R22每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)；
R23每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)；和
R24每次存在时独立地选自-H和卤素；
R25每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)；
其中C1-C6烷基或C1-C6烷氧基每次存在时可独立地任选地被一个、两个或三个卤素所取代。
5.根据权利要求4的药物组合物，其中R21和/或R24为-H。
6.根据权利要求4或5的药物组合物，其中R22选自H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)。
7.根据权利要求4-6中任一项的药物组合物，其中R22每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基和卤素。
8.根据权利要求4-7中任一项的药物组合物，其中R23选自H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)。
9.根据权利要求4-8中任一项的药物组合物，其中R23每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基和卤素。
10.根据权利要求4-9中任一项的药物组合物，其中R25选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、卤素、氰基、-CO2R′、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基和-N(R′)(R″)。
11.根据权利要求1-10中任一项的药物组合物，其中R1每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、卤素、氰基和-OH。
12.根据权利要求1-11中任一项的药物组合物，其中q为1或2。
13.根据权利要求4-11中任一项的药物组合物，其中式1化合物由式1-B所代表：
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
14.根据权利要求1-13中任一项的药物组合物，其中R1选自-H、-CH3、-CH2CH3、-CF3、-F、-Cl、-Br、氰基、-OCH3和-OCF3。
15.根据权利要求4的药物组合物，其中R23选自-H、-CH3、-F和-OCH3。
16.根据权利要求4-13中任一项的药物组合物，其中R25选自-H、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH2CH3、-CF3、-F、-Cl、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OC(CH3)3、-OCH2CH2CH2CH3、-NH2、-NHCH3、-NHC(O)CH3、-NHC(O)CF3、-OCHF2和-OCF3。
17.根据权利要求1-16中任一项的药物组合物，其中R3选自-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH2CH3、-CF3和-C(CH3)3。
18.根据权利要求1-3中任一项的药物组合物，其中R2选自-H、-CH3、-CH2CH3、-CF3、-F、-Cl、-Br、氰基、-OCH3和-OCF3。
19.治疗、改善、预防或实质上延迟个体中的乙型肝炎病毒感染的方法，所述方法包括给药所述个体权利要求1-18中任一项的药物组合物。
20.根据权利要求1-18中任一项的式1、式1-A或式1-B化合物在制备用于治疗乙型肝炎病毒感染的药物中的用途。
说明书
相关申请
本申请要求2013年10月18日提交的美国临时专利申请号61/892,591的优先权，其公开内容以其整体通过引用并入本文。
政府支持的声明
本发明得到了由国立卫生研究院颁发的政府支持AI067417。政府对本发明有一定的权利。
背景技术
乙型肝炎(HBV)引起病毒性肝炎，其可进一步导致慢性肝病并增加肝硬化和肝癌(肝细胞癌)的风险。全世界超过20亿人已感染有HBV，大约3.6亿人具有慢性感染，并且每年HBV感染引起超过一百万人死亡。HBV可由体液传播：从母亲传播到孩子、通过性传播、通过血液制品传播。由HBV-阳性的母亲生的孩子也可能被感染，除非在出生时已接种过疫苗。
目前，慢性HBV主要用核苷/核苷酸(如恩替卡韦)治疗，当患者持续治疗时其可抑制病毒但不会消除感染，甚至在进行多年治疗之后也是如此。一旦患者开始服用核苷酸类似物，大多数人必须继续服用它们，或承担可能对病毒反弹产生危及生命的免疫应答的风险。而且，抗病毒的核苷治疗可导致抗病毒药物耐药性的出现。
唯一的FDA批准的抗病毒核苷/核苷酸类似物的替代物是使用干扰素α或聚乙二醇的干扰素α的治疗。不幸地是，干扰素α的不良事件发生率和性质可能会导致耐受性差，且许多患者无法完成治疗。而且，只有小部分的患者被认为适合干扰素治疗，因为只有一小部分患者(其出现低病毒载量、转氨酶大于2倍正常上限)有可能会有一个持续的临床反应长达一年的干扰素治疗过程。因此，以干扰素为基础的治疗被用于仅小部分的所有被诊断需要治疗的患者。
因此，目前的HBV治疗可以从姑息治疗到善意忽视。核苷类似物抑制病毒的产生，治疗症状，但使感染保持原状。干扰素α有严重的副作用，且患者的耐受性差，其仅对少数患者而言是成功的有限治疗策略。对于HBV感染更有效的治疗存在明确的持续需求。
发明概述
本发明公开的内容一部分涉及2,4-二氨基嘧啶化合物，其例如通过影响病毒壳体蛋白质组装而具有抗乙型肝炎病毒活性。例如，本发明化合物可被认为是CpAM(核心蛋白的变构调节剂)，其可导致有缺陷的病毒壳体组装。不受理论的限制，与病毒壳体或其它多聚形式相比，通过改变作为二聚体可获得的Cp(核心蛋白)的浓度使得CpAM可影响壳体组装的“上游”步骤。本发明化合物或CpAM可显著影响病毒组装的上游功能，例如干扰cccDNA转录、RNA稳定性和/或蛋白-蛋白相互作用。
一方面，本发明提供了药物组合物，其包含：(i)具有下列结构的式1化合物：
或其药学上可接受的盐或立体异构体，其中：
X选自 和
q为0、1、2、3或4；
p为0、1、2、3或4；
r为0、1、2、3或4；
R1每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)；
w为0、1或2；
R′每次存在时独立地选自-H和-C1-C6烷基；
R″每次存在时独立地选自-H和-C1-C6烷基；或者R′和R″与同它们相连的氮原子一起形成4-7元杂环；
R2每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)；和
R3选自-H和-C1-C6烷基；
其中C1-C6烷基或C1-C6烷氧基每次存在时可独立地任选地被一个、两个或三个卤素所取代；和
(ii)药学上可接受的赋形剂。
在另一方面，本发明的公开提供了治疗、改善、预防或实质上延迟个体中的乙型肝炎病毒感染的方法，所述方法包括给予该个体本文所公开的药物组合物。
在另一方面，本发明的公开涉及式1、式1-A或式1-B化合物在制备用于治疗乙型肝炎病毒感染的药物中的用途。
发明详述
定义
现将更具体地描述公开内容的特征和其它细节。在进一步描述本发明前，在此收集了说明书中所用的某些术语、实施例和所附的权利要求。这些定义应该根据本发明公开的其余部分来理解，并且可被本领域一般技术人员理解。除非另外定义，本文所用的所有技术和科学术语与本领域一般技术人员通常所理解的含义相同。
正如本文所预期的那样，术语“一个/一种”(“a”和“an”)包括单数和复数形式，除非上下文明确地给出不同的定义。例如术语“组装效应物”或“一个组装效应物”可包括一种或多种该效应物。
“治疗”包括任何效果，例如减轻、减少、调节或消除，从而导致病症、疾病、障碍等的改善。
如本文所用的术语“烯基”指的是具有至少一个碳-碳双键的不饱和的直链或支链烃基，如本文所述的2-6或3-4个碳原子的直链或支链基团分别指的是C2-C6烯基和C3-C4烯基。示例性的烯基包括但不限于乙烯基、烯丙基、丁烯基、戊烯基等。
如本文所用的术语“烷氧基”指的是与氧相连的直链或支链烷基(烷基-O-)。示例性的烷氧基包括但不限于具有1-6个或2-6个碳原子的烷基的烷氧基，其在文中分别指的是C1-C6烷氧基和C2-C6烷氧基。示例性的烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧基、异丙氧基等。
本文所用的术语“烷基”指的是饱和的直链或支链烃基，如本文所述的1-6、1-4或1-3个碳原子的直链或支链基团分别指的是C1-C6烷基、C1-C4烷基和C1-C3烷基。示例性的烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、2-甲基-1-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-1-丁基、3-甲基-2-丁基、2,2-二甲基-1-丙基、2-甲基-1-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-1-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2,2-二甲基-1-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、丁基、异丁基、叔-丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基等。
本文所用的术语“炔基”指的是具有至少一个碳-碳叁键的不饱和的直链或支链烃基，如本文所述的2-6或3-6个碳原子的直链或支链基团分别指的是C2-C6炔基和C3-C6炔基。示例性的炔基包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、甲基丙炔基等。
本文所用的术语“环烷氧基”指的是与氧相连的环烷基(环烷基-O-)。
本文所用的术语“环烷基”指的是如本文所述的3-6个或4-6个碳的单环饱和的或部分不饱和的烃基，例如C3-C6环烷基或C4-C6环烷基。示例性的环烷基包括但不限于环己烷、环己烯、环戊烯、环丁烷或环丙烷。
本文所用的术语“卤代”或“卤素”指的是F、Cl、Br或I。
本文所用的术语“羟基”指的是基团-OH。
若合适，“药学上可接受的或药理学上可接受的”包括当给药于动物或人时不会产生副作用、过敏或其它不良反应的分子实体和组合物。对于给药于人，制剂应该满足无菌、致热原性、一般安全性要求，以及生物制品的FDA部门所要求的纯度标准。
本文所用的术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”指的是任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、等渗和吸收延迟剂等，其与药品给药相容。用于药学上活性物质的该介质和试剂是本领域众所周知的。该组合物还可含有其它能提供补充的、另外的或增强的治疗功能的活性化合物。
如本文所用的术语“药物组合物”指的是包含至少一种本发明化合物与一起配制的一种或多种药学上可接受的载体的组合物。
“个体”、“患者”或“受试者”可替换使用，且包括任何动物，包括哺乳动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿类、兔子、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类，且最优选为人。可将本发明化合物给药于哺乳动物如人，但也可给药于其它哺乳动物如需要兽医治疗的动物例如家养动物(例如狗、猫等)、农场动物(例如奶牛、羊、猪、马等)和实验动物(例如大鼠、小鼠、豚鼠等)。需要地，本发明方法中治疗的哺乳动物为需要乙型肝炎治疗的哺乳动物。“调节”包括拮抗作用(例如抑制作用)、激动作用、部分拮抗作用和/或部分激动作用。
在本发明公开中，术语“治疗有效量”指的是研究人员、兽医、医生或其他临床人员所寻求的能引起组织、系统、动物或人的生物或医学反应的主体化合物的量。以治疗有效量给药本发明化合物以治疗该疾病。
本文所用的术语“药学上可接受的盐”指的是酸性或碱性基团的盐，所述酸性或碱性基团可存在于本发明组合物中所用的化合物中。包含在本发明组合物中性质为碱性的化合物能与各种无机和有机酸形成大量不同的盐。可用于制备该碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸是那些能形成非毒性酸加成盐的酸，所述盐即含有药学上可接受的阴离子的盐，包括但不限于苹果酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐(gentisinate)、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、蔗糖盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即1,1’-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))盐。包含在本发明组合物中性质为酸性的化合物能与各种药理学上可接受的阳离子形成碱盐。这种盐的实例包括碱金属盐或碱土金属盐，特别是钙、镁、钠、锂、锌、钾和铁盐。包含在本发明组合物中含有碱性或酸性基团的化合物也可与不同的氨基酸形成药学上可接受的盐。本发明化合物可同时含有酸性和碱性基团；例如一个氨基和一个羧酸基团。在该情况下，该化合物可以酸加成盐、两性离子或碱盐的形式存在。
本发明化合物可包含一个或多个手性中心和/或双键，因此，存在立体异构体，如几何异构体、对映异构体或非对映异构体。本文所使用的术语“立体异构体”包括所有的几何异构体、对映异构体或非对映异构体。根据手性碳原子周围的取代基的排列，这些化合物可以用符号“R”或“S”指定。本发明包括这些化合物不同的立体异构体及其混合物。立体异构体包括对映异构体和非对映异构体。对映异构体或非对映异构体的混合物可根据命名法指定为“(±)”，但本领域技术人员可认识到该结构可隐含表示具有手性中心。
本发明化合物可包含一个或多个手性中心和/或双键，因此，其可以几何异构体、对映异构体或非对映异构体的形式存在。对映体和非对映异构体可由符号“(+)”、“(-)”、“R”或“S”指定，其取决于手性碳原子周围的取代基的排列，但本领域技术人员可认识到该结构可隐含表示具有手性中心。由碳碳双键周围取代基的排列或由环烷基或杂环周围取代基的排列产生的几何异构体也可包括在本发明化合物中。符号 表示键，其可为本文所述的单键、双键或叁键。在碳-碳双键周围的取代基被指定为“Z”或“E”构型，其中术语“Z”和“E”的使用是根据IUPAC标准。除非另外说明，描述双键的结构包括“E”和“Z”异构体。在碳-碳双键周围的取代基也可被称为“顺式”或“反式”，其中“顺式”代表取代基在双键的同侧，“反式”代表取代基在双键的对侧。在碳环周围的取代基的排列也可被指定为“顺式”或“反式”。术语“顺式”代表取代基在环平面的同侧，术语“反式”代表取代基在环平面的对侧。其中取代基排列在环平面的同侧和对侧的化合物的混合物被指定为“顺式/反式”。
当文中使用术语“立体异构体”时，其包括所有几何异构体、对映异构体或非对映异构体。本发明包括这些化合物的各种立体异构体及其混合物。
本发明化合物的单一对映体和非对映异构体可以由含有不对称或手性中心的市售原料合成制备，或由外消旋混合物通过本领域一般技术人员公知的拆分方法制备。这些拆分方法例如(1)将对映体混合物与手性助剂连接，通过重结晶或色谱法将生成的非对映异构体的混合物分离，并从助剂中释放光学纯的产物，(2)用光学活性拆分剂形成盐，(3)在手性液相色谱柱上直接分离光学对映体的混合物，或(4)使用立体选择性化学或酶法试剂进行动力学拆分。也可通过众所周知的方法如手性气相色谱法或在手性溶剂中结晶化合物，将外消旋混合物拆分成组成它们的对映异构体。立体选择性合成是本领域众所周知的，其为在创建新立体中心的过程中或在转化已有立体中心的过程中，由单一反应物形成立体异构体的不等量混合物的化学或酶促反应。立体选择性合成包括对映选择性和非对映选择性转化。例如参见Carreira和Kvaerno,ClassicsinStereoselectiveSynthesis,Wiley-VCH：Weinheim,2009。
本发明化合物可与药学上可接受的溶剂如水、乙醇等以溶剂合物和非溶剂合物的形式存在，本发明包括溶剂合物和非溶剂合物的形式。在一个实施方案中，该化合物为无定形的。在一个实施方案中，该化合物为多晶型物。在另一个实施方案中，该化合物为结晶形式。
本发明还包括同位素标记的本发明化合物，其与本文所述的那些化合物相同，除了一个或多个原子被具有与自然界中通常发现的原子质量或质量数不同的原子质量或质量数的原子代替。可并入到本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的那些同位素，例如分别为2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。例如，本发明化合物的一个或多个氢原子可被氘替换。
某些同位素标记的公开化合物(例如3H和14C标记的那些化合物)可用于化合物和/或底物组织分布测定中。氚(即3H)和碳-14(即14C)同位素由于它们易于制备和检测而特别优选。此外，用较重的同位素(即2H)进行取代能够提供某些治疗优点，因为它们有更好的代谢稳定性(例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求)，因此在一些情况下较重的同位素可能是优选的。同位素标记的本发明化合物通常可根据例如与本文所公开的那些方法类似的方法，通过用同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂来制备。
术语“前药”指的是可在体内转化生成本发明化合物或该化合物的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物的化合物。该转化可通过不同的机制(例如通过酯酶、酰胺酶、磷酸酶、氧化和/或还原代谢)，在不同的位点(例如在肠内腔中或在肠、血液或肝脏的传输过程中)发生。前药是本领域众所周知的(例如，参见Rautio,Kumpulainen,等,NatureReviewsDrugDiscovery2008,7,255)。例如，如果本发明化合物或该化合物的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物含有羧酸官能团，则前药可包括例如用下列基团置换酸性基团的氢原子形成的酯，所述基团例如为(C1-C8)烷基、(C2-C12)烷酰氧基甲基、具有4至9个碳原子的1-(烷酰氧基)乙基、具有5至10个碳原子的1-甲基-1-(烷酰基氧基)-乙基、具有3至6个碳原子的烷氧基羰基氧基甲基、具有4至7个碳原子的1-(烷氧基羰基氧基)乙基、具有5至8个碳原子的1-甲基-1-(烷氧基羰基氧基)乙基、具有3至9个碳原子的N-(烷氧基羰基)氨基甲基、具有4至10个碳原子的1-(N-(烷氧基羰基)氨基)乙基、3-酞基、4-巴豆酰内酯基(crotonolactonyl)、γ-丁内酯-4-基、二-N,N-(C1-C2)烷基氨基(C2-C3)烷基(如β-二甲基氨基乙基)、氨基甲酰基-(C1-C2)烷基、N,N-二(C1-C2)烷基氨基甲酰基-(C1-C2)烷基和哌啶子基-、吡咯烷基-或吗啉代(C2-C3)烷基。
类似地，如果本发明化合物含有醇官能团，则前药可通过用下列基团置换醇基团的氢原子形成，所述基团例如为(C1-C6)烷酰氧基甲基、1-((C1-6)烷酰氧基)乙基、1-甲基-1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基、(C1-C6)烷氧基羰基氧基甲基、N-(C1-C6)烷氧基羰基氨基甲基、琥珀酰基、(C1-C6)烷酰基、α-氨基(C1-C4)烷酰基、芳酰基和α-氨基酰基或α-氨基酰基-α-氨基酰基，其中每个α-氨基酰基独立地选自天然存在的L-氨基酸；或P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1-C6)烷基)2或糖基(通过除去碳水化合物的半缩醛形式的羟基而生成的基团)。
如果本发明化合物包含胺官能团，则前药可例如通过生成酰胺或氨基甲酸酯、N-酰氧基烷基衍生物、(氧代二氧杂环戊烯基)甲基衍生物、N-曼尼希碱、亚胺或烯胺形成。而且，仲胺可代谢裂解以生成生物活性的伯胺，或叔胺可代谢裂解以生成生物活性的伯胺或仲胺。例如参见Simplício,等人,Molecules2008,13,519和其中的文献。
本发明部分地基于以下发现：某类化合物如本文所述那些化合物可激活不依赖正常成核信号(nucleatingsignal)的病毒壳体的组装(例如作为抗HBV效果的核心蛋白变构调节剂)。例如，本发明化合物可激活不依赖正常成核信号的病毒外壳的组装。
乙型肝炎病毒例如由包膜、核衣壳核芯、病毒DNA和逆转录酶(RT)组成。当病毒进入宿主的时候感染开始。然后将包围病毒DNA和逆转录酶的病毒核心转移到宿主的细胞质和宿主的细胞核，其为一种将环状和部分双链病毒DNA从病毒核心释放的过程。
在细胞核内，病毒DNA转化为共价闭合的环状DNA(cccDNA)，其编码前基因组RNA(pgRNA)和其它mRNA。输出到细胞质的前基因组RNA编码核心蛋白和逆转录酶。核心蛋白包封前基因组RNA和逆转录酶导致形成未成熟的HBV核心，其在前基因组RNA逆转录成环状和部分双链DNA时成熟，完成循环。
HBV感染的关键是病毒核心的组装。病毒壳体本身就是自发地自组装的120备份的核心蛋白同二聚体的复合体。在组装效应物(AE)存在下，病毒壳体组装始于CpAM·Cp(组装效应物·核心蛋白)复合体而不是等待生物RT·pgRNA成核复合体；由此产生的病毒壳体是有缺陷的。CpAM可能会促使消耗成核所需的一些分子，消耗例如高达117备份的Cp二聚体。在一些实施方案中，为了成核组装，CpAM可具有下列活性中的一个或两个，所述活性例如与Cp二聚体实质地相互作用或与Cp二聚体相结合，激活组装，和/或例如以与Cp二聚体的结合相比更高的亲和力与病毒壳体实质地结合或相互作用。
核心蛋白也在病毒壳体组装的上游起作用，且与核的cccDNA有关，并影响它们的稳定性和转录；它们参与了前基因组RNA从核中输出。
例如，本发明化合物可通过与核心蛋白二聚体以及病毒壳体的相互作用来影响病毒组装，和/或可影响病毒壳体组装的上游核心蛋白的活性。有缺陷的组装可立即抑制病毒的产生。在组装上游降低Cp活性也可干扰感染自身的稳定性所需的病毒活性。例如，本发明化合物可使用有限疗程(相对于当前的抗病毒核苷/核苷酸所必需的潜在的终身治疗)成功地治疗HBV，例如这种有限的治疗归因于新病毒蛋白和起因于病毒cccDNA的表观遗传修饰的mRNA的损失，以及新的感染病毒的减少。换言之，本发明化合物可激活不依赖正常成核信号的病毒壳体组装(导致有缺陷的组装)：病毒壳体组装始于AE·Cp复合体而不是等待生物RT·pgRNA成核复合体；由此产生的病毒壳体或异常复合体，例如无法支持新病毒的产生。在一些实施方案中，本发明化合物可能会促使消耗成核所需的一些分子，消耗例如高达120备份的Cp二聚体。不受理论的限制，本发明化合物可例如改变Cp(核心蛋白)的浓度，其可能是病毒壳体组装的上游活性所需的。在组装上游抑制Cp活性干扰Cp与病毒库(cccDNA)的相互作用。这可导致由病毒蛋白和cccDNA活性降低所引起的感染清除。
在一个实施方案中，公开了下面的式1化合物以及药物组合物，所述药物组合物包含：(i)具有下列结构的式1化合物：
或其药学上可接受的盐、立体异构体或前药，其中：
X选自 和
q为0、1、2、3或4；
p为0、1、2、3或4；
r为0、1、2、3或4；
R1每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)；
w为0、1或2；
R′每次存在时独立地选自-H和-C1-C6烷基；
R″每次存在时独立地选自-H和-C1-C6烷基；或者R′和R″与同它们相连的氮原子一起形成4-7元杂环；
R2每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)；和
R3选自-H和-C1-C6烷基；
其中C1-C6烷基或C1-C6烷氧基每次存在时可独立地任选地被一个、两个或三个卤素所取代；和
(ii)药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方案中，p为1或2。
在一些实施方案中，式1化合物由式1-A所代表：
或其药学上可接受的盐或立体异构体，其中：
R1每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)；
R21每次存在时独立地选自-H和卤素；
R22每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)；
R23每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)；和
R24每次存在时独立地选自-H和卤素；
R25每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)；
w为0、1或2；
q为0、1、2、3或4；
R′每次存在时独立地选自-H和-C1-C6烷基；
R″每次存在时独立地选自-H和-C1-C6烷基；或者R′和R″与同它们相连的氮原子一起形成4-7元杂环；
R3选自-H和-C1-C6烷基；
其中C1-C6烷基或C1-C6烷氧基每次存在时可独立地任选地被一个、两个或三个卤素所取代；
其中C1-C6烷基或C1-C6烷氧基每次存在时可独立地任选地被一个、两个或三个卤素所取代。
在一些实施方案中，R21和/或R24为-H。
在一些实施方案中，R22选自H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)。
在一些实施方案中，R22每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基和卤素。
在一些实施方案中，R23选自H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、卤素、氰基、-OH、-C(O)H、-CO2R′、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基、-N(R′)(R″)、-NO2、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-S(O)w-C1-C6烷基、-N(R′)S(O)w-C1-C6烷基和-S(O)w-N(R′)(R″)。
在一些实施方案中，R23每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基和卤素。
在一些实施方案中，R25选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、卤素、氰基、-CO2R′、-N(R′)C(O)C1-C6烷基、-C(O)N(R′)(R″)、-C(O)C1-C6烷基和-N(R′)(R″)。
在一些实施方案中，R1每次存在时独立地选自-H、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、卤素、氰基和-OH。
在一些实施方案中，q为1或2。
在一些实施方案中，式1化合物由式1-B所代表：
或其药学上可接受的盐或立体异构体；其中R1选自-H、-CH3、-CH2CH3、-CF3、-F、-Cl、-Br、氰基、-OCH3和-OCF3；
R23选自-H、-CH3、-F和-OCH3；和
R25选自-H、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH2CH3、-CF3、-F、-Cl、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OC(CH3)3、-OCH2CH2CH2CH3、-NH2、-NHCH3、-NHC(O)CH3、-NHC(O)CF3、-OCHF2和-OCF3，其它R取代基如上所定义。
在一些实施方案中，式1、1-A或1-B中的R3选自-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH2CH3、-CF3和-C(CH3)3。
在一些实施方案中，式1、1-A或1-B中的R2选自-H、-CH3、-CH2CH3、-CF3、-F、-Cl、-Br、-CN、-OCH3和-OCF3。
在另一方面，本发明公开的内容提供了治疗、改善、预防或实质上延迟个体中的乙型肝炎病毒感染的方法，所述方法包括给药所述个体本发明的化合物或药物组合物。
在另一方面，本发明公开的内容涉及式1、式1-A或式1-B化合物在制备用于治疗乙型肝炎病毒感染的药物中的用途。
本发明化合物可通过本领域已知的方法制备。本发明化合物可使用下列方法制备，所述方法包括在有机溶剂中同时提供2,4-二氯-6-取代的嘧啶和R-取代的苯胺(其中R可选自如上的R1)，然后将生成的化合物与Z(例如哌嗪或4-氨基苯胺)接触。
随后，加入任选取代的磺酰苯。在另一方面，提供了治疗需要的患者中HBV感染(如急性或慢性HBV感染)的方法。该方法包括将药物组合物给药于患者，所述药物组合物包括治疗有效量的本发明化合物。
对于该方面的用途，预期合适的剂量根据所用的具体化合物、给药方式、需治疗的感染的性质和严重程度以及需治疗的具体感染而变化，且在治疗医生的判断内。通常，所标示的给药剂量可在约0.1至约15mg/kg体重范围内。在一些情况下，化合物的给药剂量可少于10mg/kg体重。在其它情况下，给药剂量可少于5mg/kg体重。然而在其它情况下，给药剂量可在约0.1至约1mg/kg体重范围内。该剂量可方便地一天给药一次，或者以分剂量例如最多一天四次给药或以缓释形式给药。
化合物或组合物可通过任何常规途径，特别是肠内、局部、经口、经鼻例如片剂或胶囊的形式，通过栓剂或肠胃外例如可注射溶液或悬浮液的形式，静脉注射、肌肉内、皮下或腹膜内注射给药。合适的制剂和药物组合物包括使用一种或多种生理学上可接受的载体或赋形剂，通过任何常规方法配制的那些，所述载体或赋形剂是已知的市售可得的当前临床中使用的那些。因此，可将这些化合物配制以用于经口、含服、局部、肠胃外、直肠或经皮给药或适合于通过吸入或吹入(经口或经鼻)的形式给药。
对于口服给药，药物组合物可为例如片剂或胶囊的形式，其可与药学上可接受的赋形剂通过常规的方法制备，所述赋形剂例如为粘合剂(如预胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如土豆淀粉或羧甲淀粉钠)；或湿润剂(例如十二烷基硫酸钠)。片剂可通过本领域已知的方法进行包衣。用于口服给药的液体制剂可为例如溶液、糖浆剂或混悬液的形式，或者它们可在使用前将干产品与水或其它合适的载体进行配制。该液体制剂可与药学可接受的添加剂一起通过常规方法制备，所述添加剂为例如助悬剂(如山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂)；乳化剂(如卵磷脂或阿拉伯胶)；非水性载体(如杏仁油、油酯、乙醇油或分馏的植物油)；和防腐剂(如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)。若合适，制剂还可包含缓冲盐、调味剂、着色剂和甜味剂。
用于口服给药的制剂还可适合配制成在长时间内使一种或多种活性化合物控制释放或持续释放。对于含服给药，该组合物可为本领域一般技术人员已知的常规方法配制的片剂或锭剂的形式。
也可将化合物配制通过注射例如推注或连续输注来肠胃外给药。用于注射的制剂可例如在安瓿或多剂量容器中与加入的防腐剂一起以单位剂型存在。该组合物可为悬浮液、溶液、或在油性或水性介质中的乳剂形式，并且可含有添加剂如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。或者，该化合物可为粉末形式用于在使用前与合适的载体例如灭菌注射用水一起配制。该化合物还可配制成栓剂或保留灌肠(例如含有常规的栓剂基质如可可脂或其他甘油酯)用于直肠给药。
在一些情况下，本发明化合物可作为组合治疗的一部分与一种或多种抗病毒药物一起联合给药。抗病毒药物的实例包括核苷类似物、干扰素α和其它组装效应物，例如杂芳基二氢嘧啶(HAP)如4-(2-氯-4-氟苯基)-6-甲基-2-(吡啶2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸甲酯。其可包括将第一量的所公开化合物结合第二量的抗病毒药物给药于患者，其中所述第一量和第二量同时包括药物有效量。第一量、第二量或两者可多于或少于作为单一治疗剂给药的每个化合物的有效量，或与其相同。可将治疗有效量的本发明化合物和抗病毒药物共同给药于患者，即以任何给定的顺序，通过相同或不同的给药途径同时或分开给药于患者。在一些情况下，首先给药本发明化合物或组合物例如一天或多天，一周或多周后再给药抗病毒药物可能是有利的。而且，另外的药物可与上述组合治疗联合使用。
实施例
实施例1-一般中间体6和13的合成
6-甲基-2-(哌嗪-1-基)-N-(对甲苯基)嘧啶-4-胺(6)-一般中间体的合成：
2-氯-6-甲基-N-(对甲苯基)嘧啶-4-胺(3)的合成：
在氩气下，在室温向搅拌下的2,4-二氯-6-甲基嘧啶1(600mg,3.68mmol)的CH3CN(5mL)溶液中加入对甲苯胺2(473mg,4.41mmol)和三乙胺(0.77mL,5.52mmol)；将混合物温热至80℃，并搅拌24h。将该反应通过TLC监测；反应完成后，将挥发物真空除去，得到粗产物。将粗产物通过使用10％乙酸乙酯(EtOAc)/己烷的硅胶柱色谱纯化，得到化合物3(300mg,35％)，为灰白色固体。TLC：20％EtOAc/己烷(Rf：0.4)；1H-NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ9.76(s,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,2H),7.16(d,J＝8.4Hz,2H),6.52(s,1H),2.27(s,3H),2.25(s,3H)。
4-(4-甲基-6-(对甲苯基氨基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(5)的合成：
在氩气下，在室温向搅拌下的化合物3(200mg,0.85mmol)的正丁醇(3mL)溶液中加入哌嗪-1-甲酸叔丁基酯4(238mg,1.28mmol)和N,N-二异丙基乙胺(DIPEA；0.30mL,1.70mmol)；将混合物加热至100℃，并搅拌16h。将该反应通过TLC监测；反应完成后，将挥发物真空除去，得到粗产物。将粗产物通过使用20％EtOAc/己烷的硅胶柱色谱纯化，得到化合物5(220mg,67％)，为灰白色固体。TLC：20％EtOAc/己烷(Rf：0.5)；1H-NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ9.00(s,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(d,J＝8.0Hz,2H),5.89(s,1H),3.66(t,J＝5.6Hz,4H),3.31(t,J＝5.6Hz,4H),2.24(s,3H),2.12(s,3H),1.42(s,9H)。
6-甲基-2-(哌嗪-1-基)-N-(对甲苯基)嘧啶-4-胺(6)的合成：
在惰性气氛下，在0℃，向搅拌下的化合物5(220mg,0.57mmol)的CH2Cl2(3mL)溶液中加入三氟乙酸(0.25mL,2.86mmol)；将混合物温热至15℃，并搅拌30min。将该反应通过TLC监测；反应完成后，真空除去挥发物。将残余物用饱和的NaHCO3溶液(30mL)中和，并用EtOAc(2x30mL)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到化合物6(130mg,80％)，为灰白色固体。TLC：5％MeOH/CH2Cl2(Rf：0.2)；1H-NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ8.98(s,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,2H),7.09(d,J＝8.4Hz,2H),5.87(s,1H),3.67(t,J＝5.2Hz,4H),2.81(t,J＝4.8Hz,4H),2.24(s,3H),2.12(s,3H)。
N-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺(13)-一般中间体的合成：
2,4-二氯-6-异丙基嘧啶(9)的合成：
在-20℃在氩气下，向搅拌下的2,4,6-三氯嘧啶7(10g,54.49mmol)的无水四氢呋喃(THF；200mL)溶液中加入异丙基氯化镁8(2M的THF溶液,54.5mL,109.0mmol)和碘化亚铜(520mg,2.72mmol)；将混合物在0℃搅拌2h。将该反应通过TLC监测；反应完成后，将反应混合物用饱和的氯化铵水溶液(150mL)终止，并用EtOAc(2x150mL)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过使用2％EtOAc/己烷的硅胶柱色谱纯化，得到化合物9(6g,58％)，为无色液体。TLC：7％EtOAc/己烷(Rf：0.8)；1H-NMR(CDCl3,400MHz)：δ7.16(s,1H),3.04-2.97(m,1H),1.31(d,J＝6.8Hz,6H)。
2-氯-N-(4-氟苯基)-6-异丙基嘧啶-4-胺(11)的合成：
在室温，在氩气下，向搅拌下的化合物9(4.5g,23.56mmol)的乙醇(50mL)溶液中加入4-氟苯胺10(2.61g,23.56mmol)和三乙胺(5.1mL,35.34mmol)；加热至70℃，并搅拌24h。将该反应通过TLC监测；反应完成后，将挥发物真空除去，得到粗产物。将粗产物通过使用4％EtOAc/己烷的硅胶柱色谱纯化，得到化合物11(3.5g,56％)，为灰白色固体。TLC：10％EtOAc/己烷(Rf：0.2)；1H-NMR(CDCl3,400MHz)：δ7.30-7.28(m,2H),7.11(t,J＝8.0Hz,2H),6.96(brs,1H),6.30(s,1H),2.84-2.77(m,1H),1.21(d,J＝6.8Hz,6H)。
4-(4-((4-氟苯基)氨基)-6-异丙基嘧啶-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(12)的合成：
在室温，在氩气下，在密封管中向搅拌下的化合物11(3.5g,13.21mmol)的正丁醇(60mL)溶液中加入哌嗪-1-甲酸叔丁基酯4(3.66g,19.81mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.65mL,19.81mmol)；将该混合物加热至120℃，并搅拌36h。将该反应通过TLC监测；反应完成后，将挥发物真空除去，得到粗产物。将粗产物通过使用10％EtOAc/己烷的硅胶柱色谱纯化，得到化合物12(4g,73％)，为白色固体。TLC：10％EtOAc/己烷(Rf：0.8)；1H-NMR(CDCl3,400MHz)：δ7.30-7.28(m,2H),7.03(t,J＝8.4Hz,2H),6.32(brs,1H),5.79(s,1H),3.77(t,J＝5.2Hz,4H),3.49-3.46(m,4H),2.72-2.61(m,1H),1.48(s,9H),1.18(d,J＝6.8Hz,6H)。
N-(4-氟苯基)-6-异丙基-2-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺(13)的合成：
在0℃，在氩气下向搅拌下的化合物12(500mg,1.2mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中加入4NHCl的1,4-二噁烷溶液(4mL)；将混合物温热至室温，并搅拌2h。将该反应通过TLC监测；反应完成后，真空除去挥发物。将残余物用10％NaHCO3溶液(20mL)中和，并用EtOAc(2x30mL)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到化合物13(340mg,90％)，为灰白色固体。TLC：10％CH3OH/CH2Cl2(Rf：0.2)；1H-NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ9.09(s,1H),7.62-7.58(m,2H),7.11(t,J＝8.8Hz,2H),5.86(s,1H),3.60(t,J＝4.8Hz,4H),2.71(t,J＝4.8Hz,4H),2.67-2.58(m,1H),1.18(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例2-目标化合物1-22的合成
通过使用市售的磺酰氯或通过使用典型的步骤A制备的磺酰氯将中间体6和13转化成终产物，结果收集在下表1中。
典型的步骤A：在氩气下，在0℃向搅拌下的化合物6(40mg,0.14mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液中加入吡啶(0.06mL,0.70mmol)和磺酰氯(29.5mg,0.15mmol)；温热至室温，并搅拌4h。将该反应通过TLC监测；反应完成后，将反应混合物用CH2Cl2(30mL)稀释，用水(15mL)、1NHCl(10mL)、10％NaHCO3溶液(15mL)、盐水(15mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物。将沉淀的物质直接通过真空干燥或研磨或通过柱色谱纯化，得到所需的目标化合物。
表1
实施例3-目标化合物23和24的合成
6-甲基-2-(4-((4-硝基苯基)磺酰基哌嗪-1-基)-N-(对甲苯基)嘧啶-4-胺(64)的合成：在氩气下，在0℃向搅拌下的化合物6(100mg,0.35mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液中加入吡啶(0.15mL,1.76mmol)和4-硝基苯磺酰氯63(78mg,0.35mmol)；温热至室温，并搅拌4h。将该反应通过TLC监测；反应完成后，将反应混合物用CH2Cl2(30mL)稀释，用1NHCl(15mL)、10％NaHCO3溶液(20mL)、水(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物用乙醚(2x5mL)和正戊烷(2x5mL)洗涤，并真空干燥，得到化合物64(110mg,67％)，为白色固体。TLC：5％MeOH/CH2Cl2(Rf：0.8)；1H-NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ9.00(s,1H),8.41(d,J＝8.8Hz,2H),8.01(d,J＝8.8Hz,2H),7.38(d,J＝8.4Hz,2H),7.08(d,J＝8.4Hz,2H),5.86(s,1H),3.79(t,J＝5.2Hz,4H),3.02(t,J＝4.8Hz,4H),2.24(s,3H),2.08(s,3H)。
6-甲基-2-(4-((4-硝基苯基)磺酰基哌嗪-1-基)-N-(对甲苯基)嘧啶-4-胺(65)的合成：在氩气下，在室温向搅拌下的化合物64(100mg,0.21mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入10％Pd/C(30mg)；将混合物在氢气氛(气球压力)下搅拌4h。将该反应通过TLC监测；反应完成后，将反应混合物通过硅藻土(celite)过滤，用CH2Cl2(2x20mL)洗涤，并将滤液真空浓缩，得到粗化合物65(73mg,78％)，为灰白色固体。TLC：5％MeOH/CH2Cl2(Rf：0.5)；1H-NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ8.99(s,1H),7.40(t
乙型肝炎病毒组装效应物专利购买费用说明
Q：办理专利转让的流程及所需资料
A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。
1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。
2：按规定缴纳著录项目变更手续费。
3：同时提交相关证明文件原件。
4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。
Q:专利著录项目变更费用如何缴交
A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式
Q：专利转让变更，多久能出结果
A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。
动态评分
0.0