专利摘要

专利摘要

本发明提供了一种藜芦胺降解产物藜芦芴醛1及其衍生物。以甾体生物碱藜芦胺(A)为原料，经过间氯过氧苯甲酸氧化降解制备藜芦芴醛，进一步经过氧化、还原、缩合反应，得到藜芦芴醛1衍生物20个化合物。本发明所述的20个化合物对癌细胞系具有良好的抑制活性，其中，化合物1，2，5，8，13，17对人胰腺癌细胞BxPC－3和SW1990，小细胞肺癌细胞NCI－H446人肠癌LOVO等细胞系具有良好的抑制活性，化合物藜芦芴醛(1)的抑制活性最为显著。

权利要求

1、一种藜芦胺降解产物藜芦芴醛1，其特征在于它具有下列结构式：

2、一种藜芦胺降解产物藜芦芴醛1的衍生物，其特征在于所述衍生物包括

藜芦芴酸2、藜芦芴醇3、藜芦芴缩醛4、3-羰基-Δ⁴-藜芦芴醛5、3-羰基-Δ⁴-藜芦芴酸6、3-羰基-Δ⁴-藜芦芴醇7、3-羰基-Δ⁴-藜芦芴缩醛8、3-去氧-Δ⁴-藜芦芴醛9、3-去氧-Δ⁴-藜芦芴酸10、3-去氧-Δ⁴-藜芦芴醇11、3-去氧-Δ⁴-藜芦芴缩醛12、3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴醛13、3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴酸14、3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴醇15、3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴缩醛16、3-氯藜芦芴醛17、3-氯藜芦芴酸18、3-氯藜芦芴醇19、3-氯藜芦芴缩醛20；它们分别具有下列结构式：

3、一种如权利要求1所述的藜芦胺降解产物藜芦芴醛1的制备方法，其特征在于该方法以甾体生物碱藜芦胺A为原料，经过间氯过氧苯甲酸氧化降解制备藜芦芴醛1。

4、一种如权利要求2所述的藜芦胺降解产物藜芦芴醛1的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

(1)以步骤(1)藜芦芴醛1为底物经氧化、还原、缩合反应得到3个衍生物：藜芦芴酸2、藜芦芴醇3、藜芦芴缩醛4。

(2)以藜芦胺A为原料制备4个中间体：3-羰基-Δ⁴-藜芦胺B，3-去氧-Δ⁴-藜芦胺C，3-去氧-5，6-二氢-藜芦胺D，3-氯藜芦胺E；

(3)4个中间体B，C，D，E分别经间氯过氧苯甲酸氧化降解制备得到3-羰基-Δ⁴-藜芦芴醛5，3-去氧-Δ⁴-藜芦芴醛9，3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴醛13，3-氯藜芦芴醛17；

(4)化合物5，9，13，17分别经氧化、还原、缩合反应，各得3个衍生物，共12个化合物：3-羰基-Δ⁴-藜芦芴酸6，3-羰基-Δ⁴-藜芦芴醇7，3-羰基-Δ⁴-藜芦芴缩醛8，3-去氧-Δ⁴-藜芦芴酸10，3-去氧-Δ⁴-藜芦芴醇11，3-去氧-Δ⁴-藜芦芴缩醛12，3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴酸14，3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴醇15，3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴缩醛16，3-氯藜芦芴酸18，3-氯藜芦芴醇19，3-氯藜芦芴缩醛20。

5、根据权利要求3的方法，其特征在于步骤(1)藜芦芴醛1的制备中以二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、THF、二氧六环或丙酮为溶剂，优选二氯甲烷、氯仿；原料与溶剂的比例为1g/200mL～1g/20mL，优选1g/100mL～1g/50mL；以间氯过氧苯甲酸为氧化剂，间氯过氧苯甲酸与藜芦芴醛1的摩尔比为1∶1～5∶1，优选2.5∶1；反应温度为0-60℃，优选15-18℃；反应中采用盐酸、硫酸或冰醋酸进行酸催化，酸加入量为藜芦胺的1-5％W/W；

反应过程如下：

6、根据权利要求4的方法，其特征在于所述步骤(1)和(4)醛类化合物为底物经氧化反应制备酸类化合物过程中，采用Ag₂O/NaOH氧化体系，其Ag₂O与原料的摩尔比为1∶1～5∶1，优选2.0∶1；反应温度为-10-40℃，优选0-20℃；THF、二氧六环或丙酮为溶剂，优选THF；原料与溶剂的比例为1g/300mL～1g/50mL，优选1g/160mL～1g/80mL。

7、根据权利要求4的方法，其特征在于所述步骤(1)和(4)醛类化合物为底物经还原反应制备醇类化合物过程中，采用NaBH₄还原，其NaBH₄与原料的摩尔比为0.25∶1～5∶1，优选1∶1～3∶1；反应温度为0-40℃，优选0-20℃；乙醇、甲醇为溶剂，原料与溶剂的比例为1g/200mL～1g/20mL，优选1g/80mL～1g/20mL。

8、根据权利要求2的方法，其特征在于所述步骤(1)和(4)醛类化合物为底物经缩合反应制备缩醛的过程中，在甲苯磺酸催化下与甲醇成缩醛；甲苯磺酸与藜芦芴醛1的摩尔比为1∶20～1∶5；原料与溶剂的比例为1g/2000mL～1g/100mL，优选1g/200mL～1g/50mL。

9、一种如权利要求1所述的藜芦胺降解产物藜芦芴醛1在制备抗肿瘤药物中的应用。

10、根据权利要求6的应用，其特征在于所述藜芦胺降解产物藜芦芴醛1的衍生物2-20化合物中任一化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及药物化学，具体涉及藜芦胺降解产物藜芦芴醛及其衍生物与它们的制备和在制备抗肿瘤药的应用。

背景技术

藜芦属(Veratrum)为百合科(Liliaceae)植物，世界上约有40种。中医用藜芦(V.nigrum L.)、兴安藜芦(V.dahuricum(Turcz.)Loes.f.)、天目藜芦(V.SchindleriLoes.f.)、毛穗藜芦(V.maackii Regel)、大理藜芦(V..taliense Loes.f.)、毛叶藜芦(V.grandiflorum(Maxim.)Loes.f.)等的根和根茎入药，用于中风痰壅，癫痫、喉痹不通，及疥癣和恶疮(中华本草(八).上海科学技术出版社，1999，183-188)。现代药理学研究表明，藜芦生物碱具有降血压和抗肿瘤作用(中药辞海(第四卷).中国医药科技出版社，1998，8-13；徐国钧，徐珞珊，王峥涛，等.常用中药材品种整理和质量研究(第四册).福建科学技术出版社，2001，121-178)。从藜芦中分离得到的甾体生物碱-藜芦胺(结构如下式A)具有显著的抗肿瘤活性，但是该化合物的毒性较大，小鼠静脉和皮下给药，其LD₅₀分别为3.1mg/kg和4.5mg/kg(Kiyoshi Tanaka，J.Pharma.Exp.Therapeutics.1955，113(1)：89-99)。

藜芦胺A

。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于研究设计以藜芦胺为原料制备藜芦芴醛及其衍生物的方法和这些化合物的医药应用。

本发明提供了一种藜芦胺降解产物藜芦芴醛1，具有下列结构式：

本发明另一目的提供了一种藜芦胺降解产物藜芦芴醛1的衍生物：藜芦芴酸2、藜芦芴醇3、藜芦芴缩醛4、3-羰基-Δ⁴-藜芦芴醛5、3-羰基-Δ⁴-藜芦芴酸6、3-羰基-Δ⁴-藜芦芴醇7、3-羰基-Δ⁴-藜芦芴缩醛8、3-去氧-Δ⁴-藜芦芴醛9、3-去氧-Δ⁴-藜芦芴酸10、3-去氧-Δ⁴-藜芦芴醇11、3-去氧-Δ⁴-藜芦芴缩醛12、3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴醛13、3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴酸14、3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴醇15、3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴缩醛16、3-氯藜芦芴醛17、3-氯藜芦芴酸醛18、3-氯藜芦芴醇19、3-氯藜芦芴缩醛20，具有下列结构式：

本发明的又一目的是提供了上述藜芦胺降解产物藜芦芴醛1及其衍生物的制备方法，以甾体生物碱藜芦胺(A)为原料，经过间氯过氧苯甲酸(mCPBA)氧化降解制备藜芦芴醛1。

生物碱藜芦胺(A)可以市售得到。

本发明的再一目的是提供了上述藜芦胺降解产物藜芦芴醛1及其衍生物的制备方法。包括下列步骤：

(1)以步骤(1)藜芦芴醛1为底物经氧化、还原、缩合反应得到3个衍生物：藜芦芴酸2、藜芦芴醇3、藜芦芴缩醛4。

(2)以藜芦胺A为原料制备4个中间体：3-羰基-Δ⁴-藜芦胺(B)，3-去氧-Δ⁴-藜芦胺(C)，3-去氧-5，6-二氢-藜芦胺(D)，3-氯藜芦胺(E)；

(3)4个中间体B，C，D，E分别经间氯过氧苯甲酸(mCPBA)氧化降解制备得到3-羰基-Δ⁴-藜芦芴醛5，3-去氧-Δ⁴-藜芦芴醛9，3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴醛13，3-氯藜芦芴醛17；所述B，C，D，E为公开的化合物。

(4)化合物5，9，13，17分别经氧化、还原、缩合反应，各得3个衍生物，共12个化合物：3-羰基-Δ⁴-藜芦芴酸6，3-羰基-Δ⁴-藜芦芴醇7，3-羰基-Δ⁴-藜芦芴缩醛8，3-去氧-Δ⁴-藜芦芴酸10，3-去氧-Δ⁴-藜芦芴醇11，3-去氧-Δ⁴-藜芦芴缩醛12，3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴酸14，3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴醇15，3-去氧-5，6-二氢-藜芦芴缩醛16，3-氯藜芦芴酸18，3-氯藜芦芴醇19，3-氯藜芦芴缩醛20。

步骤(1)藜芦芴醛1的制备中以二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、THF、二氧六环或丙酮为溶剂，优选二氯甲烷、氯仿；原料与溶剂的比例为1g/200mL～1g/20mL，优选1g/100mL～1g/50mL。以间氯过氧苯甲酸为氧化剂，间氯过氧苯甲酸与藜芦芴醛1的摩尔比为1∶1～5∶1，优选2.5∶1。反应温度为0-60℃，优选15-18℃。反应中采用酸催化，如盐酸、硫酸或冰醋酸等，其加入量为藜芦胺A原料的1-5％W/W。

反应过程如下：

本发明还有一个目的是提供了上述藜芦胺降解产物藜芦芴醛1及其衍生物2-20化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明选用人胰腺癌细胞BxPC-3和SW1990，小细胞肺癌细胞NCI-H446人肠癌(LOVO)等细胞系，采用MTT法测试藜芦芴醛1及其衍生物的抗肿瘤活性。结果表明化合物藜芦芴醛1对胰腺癌细胞BxPC-3和SW1990，小细胞肺癌(NCI-H446)，人肠癌(LOVO)均具有显著的抑制作用，其中对小细胞肺癌(NCI-H446)的IC₅₀为0.566μg/mL。化合物2，5，8，13，17对所选四种瘤株也具有良好的抑制活性。

附图说明

图1化合物藜芦芴醛1的¹H NMR谱

图2化合物藜芦芴醛1的¹³C NMR谱

具体实施方式

通过以下实施例对本发明进一步说明。

实施例1：

将2.0g(4.9mmol)藜芦胺A溶于40mL甲苯中，加入环己酮5mL(48.2mmol)和异丙醇铝2.0g(9.8mmol)，升温至110℃反应3h，蒸除甲苯，得到黄色油状物，经硅胶柱纯化，得到白色粉末状化合物3-羰基-Δ⁴-藜芦胺B(1.2g)，收率60.3％，熔点187-189℃。

3-羰基-Δ⁴-藜芦胺(B)的结构确证：

ESI-MS：m/z 408[M+H]⁺，¹H-NMR(600MHz，CDCl₃，J/Hz)δ：7.24(d，1H，J＝7.8，H-16)，6.98(d，1H，J＝7.8，H-15)，5.83(s，1H，H-4)，3.50(dd，1H，J＝6.6，4.8，H-20)，3.26(m，1H，H-23)，3.06(m，1H，H-8)，2.92(dd，1H，J＝12，1.8，H-26_b)，2.76(q，1H，H-11_b)，2.61(m，1H，H-6_b)，2.56(m，1H，H-11_a)，2.55(m，1H，H-2_b)，2.49(d，1H，J＝4.2，H-22)，2.47(m，1H，H-6_a)，2.43(brs，1H，H-7_b)，2.40(brs，1H，H-2_a)，2.32(brs，3H，H-18)，2.11(t，1H，J＝11.4，H-26_a)，2.04(m，1H，H-1_b)，2.02(m，1H，H-24_b)，1.90(td，1H，4.2，H-1_a)，1.77(m，1H，H-9)，1.50(dd，1H，J＝12.6，3.6，H-25)，1.47(d，1H，J＝3.6，H-7_a)，1.39(d，3H，J＝7.2，H-21)，1.30(brs，3H，H-19)，1.01(q，1H，J＝10.8，H-24_a)，0.83(d，3H，J＝6.6，H-27)；¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃)δ：199.4(C-3)，170.0(C-5)，142.8(C-14)，142.1(C-12)，140.6(C-17)，132.9(C-13)，125.4(C-16)，125.1(C-4)，119.4(C-15)，70.8(C-23)，67.0(C-22)，59.4(C-9)，59.6(C-9)，53.9(C-26)，44.0(C-24)，43.7(C-8)，38.5(C-10)，36.1(C-1)，36.1(C-20)，33.7(C-2)，33.1(C-6)，32.0(C-25)，30.1(C-11)，29.5(C-7)，19.5(C-21)，18.8(C-27)，16.8(C-19)，15.8(C-18)。

实施例2：

将0.5g(1.2mmol)3-羰基-Δ⁴-藜芦胺(B)溶于50mL一缩二乙二醇，加入1.0mL(20mmol)水合肼，1.2g(21mmol)的氢氧化钾，在160℃下搅拌，2h后降温至120℃，除去体系中的水，再升温至180℃，反应4h左右。反应液加入150mL冰水中，于冰箱内静置2h，过滤，得白色固体0.36g。用50mL丙酮结晶，得白色粉末0.20g，母液上硅胶柱，用梯度的石油醚：乙酸乙酯混合液洗脱，得到白色固体3-去氧-Δ⁴-藜芦胺(C)46mg，收率为52.2％，ESI-MS：m/z 394[M+H]⁺。

实施例3：

在带搅拌的50mL高压反应釜中，加入3-去氧-Δ⁴-藜芦胺(C)0.3g，乙醇20mL，Pd/C 50mg，将反应釜中空气用氢气置换后加压至350psi，室温下反应6～8h，过滤回收Pd/C，蒸除溶剂得固体0.3g，上硅胶柱，用梯度的石油醚：乙酸乙酯混合液洗脱，得到白色固体3-去氧-5，6二氢-藜芦胺(D)256mg，收率为85％，ESI-MS：m/z 396[M+H]⁺。

实施例4：

将41mg(0.1mmol)藜芦胺A溶于8mL吡啶中，冰水冷却后滴加SOCl₂0.2mL(2.8mmol)，逐渐升温至25℃，反应过夜。TLC表明反应结束，加入50mL乙酸乙酯，用3×30mL的水洗涤，有机层用30mL的饱和食盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得粗产物40mg，经硅胶柱分离得到3-氯藜芦胺(E)(20mg)，ESI-MS：m/z 427.3[M+H]⁺。

实施例5：

将82mg(0.2mmol)藜芦胺(1)溶于15mL CH₂Cl₂中，加入75％的间氯过氧苯甲酸(mPCA)92mg(0.4mmol)。于30℃以下反应24h。反应结束后加入5％的Na₂CO₃溶液调pH至7-8，用3×50mL CH₂Cl₂萃取，有机层用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得78mg粗品，经硅胶柱纯化得白色粉末藜芦芴醛122mg，收率33.9％。

实施例6：

将82mg(0.2mmol)藜芦胺(1)溶于15mL CH₂Cl₂中，加入75％的间氯过氧苯甲酸(mPCA)92mg(0.4mmol)和碳酸氢钠20mg(0.24mmol)。于20℃以下反应14h。反应结束后用3×50mL CH₂Cl₂萃取，有机层用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得75mg粗品，经硅胶柱纯化得白色粉末藜芦芴醛138mg，收率58.5％。

实施例7：

将82mg(0.2mmol)藜芦胺(1)溶于15mL CH₂Cl₂中，加入75％的间氯过氧苯甲酸(mPCA)92mg(0.4mmol)和冰醋酸450mL(7.5mmol)。于20℃以下反应26h。反应结束后用3×50mL CH₂Cl₂萃取，有机层用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得83mg粗品，经硅胶柱纯化得白色粉末藜芦芴醛142.5mg，收率65％。

实施例8：

将82mg(0.2mmol)藜芦胺(1)溶于15mL CH₂Cl₂中，加入75％的间氯过氧苯甲酸(mPCA)92mg(0.4mmol)和碳酸氢钠20mg(0.24mmol)。于20℃以下反应6后加入冰醋酸600mL(10mmol)，继续反应6h，反应结束后用3×50mL CH₂Cl₂萃取，有机层用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得83mg粗品，经硅胶柱纯化得白色粉末藜芦芴醛148mg，收率74％。

化合物藜芦芴醛1的结构确证：

白色粉末，熔点：155～156℃；

ESI-MS：m/z 323[M-H]^-，325[M+H]⁺；

¹H-NMR(600MHz，CDCl₃，J/Hz)δ：7.0.3(d，1H，J＝8.0，H-16)，6.90(dd，1H，J＝8.0，3.6，H-15)，5.50(t，1H，J＝3.0，H-6)，3.84(m，1H，H-20)，3.59(m，1H，H-3)，3.00(td，1H，J＝12.0，6.0，H-8)，2.80(q，1H，J＝3.6，H-11_b)，2.65(m，1H，H-11_a)，2.61(m，1H，H-7_b)，2.42(m 1H，H-4_b)，2.30(m，1H，H-4_a)，2.27(brs，3H，H-18)，2.01(td，1H，J＝11.4，1.8，H-7_a)，1.91(m，1H，H-2_b)，1.87(m，1H，H-1_b)，1.84(m，1H，H-9)，1.61(m，1H，H-2_a)，1.40(d，3H，J＝8.4，H-21)，1.28(td，1H，J＝9.6，3.6，H-1_a)，1.15(brs，3H，H-19)；

¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃)δ：201.4(C-22)，145.6(C-14)，143.8(C-12)，142.5(C-5)，134.4(C-17)，132.7(C-13)，126.0(C-16)，121.9(C-6)，120.7(C-15)，71.8(C-3)，57.0(C-9)，49.4(C-20)，41.9(C-4)，41.4(C-8)，38.1(C-1)，36.9(C-10)，31.4(C-2)，30.5(C-11)，30.3(C-7)，19.3(C-19)，15.8(C-18)，14.6(C-21).

实施例9：

将10mg(0.25mmol)的NaOH溶于3mL水中，加入28.6(0.12mmol)的Ag₂O，搅拌溶解，冰浴冷却条件下滴加含20mg(0.06mmol)1的四氢呋喃(THF)的溶液2mL，升至室温，剧烈搅拌1～2h。反应结束后加5％的HCl调至中性，以25mL氯仿萃取2次，有机层用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得淡黄色固体18g，经硅胶柱纯化得白色粉末藜芦芴酸214mg，收率69％。其ESI-MS为m/z：339[M-H]^-。

实施例10：

将10mg(0.03mmol)1溶于3mL的乙醇中，加入3.4(0.09mmol)的NaBH₄，室温下搅拌0.5～1h。反应结束以20mL氯仿萃取2次，有机层用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得淡黄色固体9.5g，经硅胶柱纯化得白色粉末藜芦芴醇38mg，收率79％。其ESI-MS为m/z：325[M-H]^-，327[M+H]⁺。

实施例11：

将20mg(0.06mmol)1溶于25mL的甲醇中，再加入对甲苯磺酸2mg(0.01mmol)，反应瓶上端接索氏提取器，回流条件下搅拌2～3h。反应结束后蒸除甲醇，加入20mL水，以25mL氯仿萃取2次，有机层用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂得淡黄色固体20.5g，经硅胶柱纯化得白色粉末藜芦芴缩醛416mg，收率70％。其ESI-MS为m/z：369[M-H]^-，371[M+H]⁺。

实施例12：

藜芦芴醛1对胰腺癌细胞、小细胞肺癌细胞、肠癌细胞增殖的抑制作用

样品配制：将藜芦芴醛1用DMSO(Merck)溶解后，加入PBS(-)配成1000μg/mL的溶液，然后用含DMSO的PBS(-)稀释。

细胞株：BxPC-3(人原位胰腺癌细胞)；SW1990(人胰腺癌细胞)，NCI-H446(人小细胞肺癌)，LOVO(人肠癌细胞)

培养液：RPMI 1640+15％NBS+双抗

试验方法

MTT法：96孔板每孔加入浓度为3～4×104个/mL的细胞悬液100μL，置37℃，5％CO2培养箱内。24h后，加入样品液，10μL/孔，设双复孔，37℃，5％CO2作用72h。每孔加入5mg/mL的MTT溶液20μL，作用4h后加入溶解液，100μL/孔，置培养箱内，溶解后用MK-2全自动酶标仪测570nm OD值。

结果：见表1。表明化合物藜芦芴醛1对胰腺癌细胞BxPC-3和SW1990，小细胞肺癌(NCI-H446)，人肠癌(LOVO)均具有显著的抑制作用，其中对小细胞

肺癌(NCI-H446)的IC₅₀为0.566μg/mL。化合物2，5，8，13，17对所选四种瘤株也具有良好的抑制活性。

表124个化合物对胰腺癌、小细胞肺癌细胞、肠癌细胞增殖抑制作用

化合物             IC₅₀(μg/mL)

         BxPC-3       NCI-H446     SW1990            LOVO

1        6.35         0.566        3.58              4.55

2        17.3         09.71        16.59             10.23

3        ＞100        ＞100        ＞100             88.65

4        ＞100        ＞100        ＞100             95.60

5        16.05         5.35        10.10             21.33

6        20.87         18.20        17.69            15.23

7        ＞100         ＞100       ＞100             101.2

8        11.23         10          11.98             9.85

9        ＞100         2.26        ＞100             56.36

10        17.79        10.51        32.81            24.15

11        ＞100        78.09        ＞100            56.66

12        ＞100        27.90        ＞100            77.63

13        15.73        6.86         16.45            63.40

14        34.85        16.87        41.17            20.31

15        ＞100        53.18        ＞100            96.85

16      ＞100    ＞100    ＞100    ＞100

17      12.72    1.21    12.86    20.66

18      33.01    28.54    32.25    40.25

19      ＞100    ＞100    ＞100    ＞100

20      31.62    17.44    30.40    23.56

环杷明^* 18.68    8.26     28.81    40.16

^*环杷明为阳性对照药

实施例13：

试剂和材料

受试样品：藜芦芴醛1，用数滴土温-80助溶后加0.5％CMC配制成所需浓度

阳性对照药物：丝裂霉素(MMC，上海新亚药业有限公司)

实验动物：BALB/C裸鼠(SPF级)，雄性，18-20g，由上海斯莱克实验动物责任有限公司购得。

移植性肿瘤：人体胰腺癌PANC-1，由上海医药工业研究院药理室提供。

实验方法

取生长良好的PANC-1实体瘤，无菌条件下切割成2-3mm大小的均匀小块，用套管针每只小鼠右腋皮下接种一块，随机分为5组，分别为：

1)Control(生理盐水)，

2)MMC(1mg/kg，ip×2)

3)1(1mg/kg，ig×14)

4)1(3mg/kg，ig×14)

5)1(10mg/kg，ig×14)

接种后13日开始给药，藜芦芴醛1连续经口灌胃14天(d0-d13)，MMC腹腔注射2次(d0，d3)，给药体积为0.5ml/20g体重，并用游标卡尺每4天测瘤块的长径(a)、短径(b)，肿瘤体积(tumor volume，TV)计算公式为：TV＝1/2×a×b²，相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)计算公式为：RTV＝Vt/Vo，Vo为分笼时(即do)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％，或肿瘤增殖抑制率(％)：(1-T/C)×100％，并进行T检验。接种后35天脱颈处死动物，解剖取瘤块，称瘤重，计算瘤重抑瘤率。测试数据如表2。

表2.藜芦芴醛1的体内抗PANC-1肿瘤活性研究

Group Dosage Dosage  No.death/total  Weight(g)       Inhibition

             regime                                  rate

                                                     (％)

1    25.0    ig×14   10/10           2.08±0.45

2    1.0     ip×2    6/6             1.12±0.29^**    46.15

3    1.0     ig×14   6/6             1.30±0.33^**    37.50

4    3.0     ig×14   6/6             1.21±0.21^**    41.83

5    10.0    ig×14   6/6             1.12±0.19^**    46.15

^*p＜0.05，^**p＜0.01

藜芦胺降解产物藜芦芴醛及其衍生物与制备和应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。