专利摘要

专利摘要

本发明涉及医药技术领域。本发明提供了环巴胺类似物三元环环巴胺及其衍生物。本发明以甾体生物碱介芬胺为原料，经黄鸣龙反应制备三元环环巴胺，进一步经过反应，得到三元环环巴胺衍生物29个。本发明的三元环环巴胺及其衍生物对癌细胞系具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。

权利要求

1.一种环巴胺类似物三元环环巴胺及其衍生物，其特征在于，所述的三元环环巴胺的化学结构如式1所示：

2.一种环巴胺类似物三元环环巴胺及其衍生物，其特征在于，所述的衍生物为：

3-羰基三元环环巴胺、

5,6-二氢三元环环巴胺、

3-去氧三元环环巴胺、

3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺、

3-氯三元环环巴胺、

N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-三元环环巴胺、

N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-3-羰基三元环环巴胺、

N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-5,6-二氢三元环环巴胺、

N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-3-去氧三元环环巴胺、

N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺、

N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-3-氯三元环环巴胺、

N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-三元环环巴胺、

N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3-羰基三元环环巴胺、

N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-5,6-二氢三元环环巴胺、

N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3-去氧三元环环巴胺、

N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺、

N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3-氯三元环环巴胺、

N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-三元环环巴胺、

N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-3-羰基三元环环巴胺、

N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-5,6-二氢三元环环巴胺、

N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-3-去氧三元环环巴胺、

N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺、

N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-3-氯三元环环巴胺、

N-苯甲基三元环环巴胺、

N-苯甲基-3-羰基三元环环巴胺、

N-苯甲基-5,6-二氢三元环环巴胺、

N-苯甲基-3-去氧三元环环巴胺、

N-苯甲基-3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺，或

N-苯甲基-3-氯三元环环巴胺。

3.一种如权利要求1或2所述的环巴胺类似物三元环环巴胺及其衍生物的制备方法，其特征在于，该制备方法包括下列步骤：

（A）以甾体生物碱--介芬胺为原料，经过黄鸣龙反应制备三元环环巴胺；

（B）以步骤（A）获得的三元环环巴胺1为底物经取代反应得到4个衍生物：N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-三元环环巴胺7、N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-三元环环巴胺13、N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-三元环环巴胺19、N-苯甲基三元环环巴胺25；

（C）以步骤（A）获得的三元环环巴胺1为底物经氧化还原反应得到3-羰基三元环环巴胺2、5,6-二氢三元环环巴胺3、3-去氧三元环环巴胺4、3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺5、3-氯三元环环巴胺6；

（D）步骤（C）获得的化合物2，3，4，5，6分别经取代反应，各得4个衍生物，共20个化合物：N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-3-羰基三元环环巴胺8、N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-5,6-二氢三元环环巴胺9、N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-3-去氧三元环环巴胺10、N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺11、N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-3-氯三元环环巴胺12、N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3-羰基三元环环巴胺14、N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-5,6-二氢三元环环巴胺15、N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3-去氧三元环环巴胺16、N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺17、N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3-氯三元环环巴胺18、N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-3-羰基三元环环巴胺20、N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-5,6-二氢三元环环巴胺21、N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-3-去氧三元环环巴胺22、N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺23、N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-3-氯三元环环巴胺24、N-苯甲基-3-羰基三元环环巴胺26、N-苯甲基-5,6-二氢三元环环巴胺27、N-苯甲基-3-去氧三元环环巴胺28、N-苯甲基-3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺29、N-苯甲基-3-氯三元环环巴胺30。

4.根据权利要求3所述的环巴胺类似物三元环环巴胺及其衍生物的制备方法，其特征在于，所述的步骤（A）中，三元环环巴胺的制备中以一缩二乙二醇为溶剂；原料与溶剂的比例为1g︰200mL～1g︰20mL，原料与水合肼、氢氧化钾一起加热；原料与水合肼的比例为1g︰40mL～1g︰4mL，原料与氢氧化钾的比例为1g︰40g～1g︰4g；在160℃下搅拌，2h后降温至120℃，除去体系中的水，再升温至180℃，反应4h；反应液加入1500mL冰水中，于冰箱内静置2h，过滤，得白色固体；上硅胶柱，用梯度的石油醚：乙酸乙酯混合液洗脱，得到三元环环巴胺。

5.一种如权利要求1或2所述的环巴胺类似物三元环环巴胺及其衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

6.根据权利要求5所述的环巴胺类似物三元环环巴胺及其衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物是由三元环环巴胺及其衍生物作为活性成分与常规药用载体制成的药物组合物。

7.根据权利要求6所述的环巴胺类似物三元环环巴胺及其衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述药物组合物是片剂、分散片、含片、口崩片、缓释片、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸、颗粒剂、注射剂、粉针剂或气雾剂。

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及环巴胺类似物三元环环巴胺及其衍生物与制备和应用。 

背景技术

藜芦（学名：Veratrum nigrum L.），百合科藜芦属的植物，多年生草本，味苦、辛，性寒，有毒。中医用根及根茎入药，能催吐、祛痰、杀虫，主治中风痰壅、癫痫、喉痹等；外用治疥癣、恶疮、杀虫蛆。品种有中医用藜芦(V.nigrum L.)、兴安藜芦(V.dahuricum(Turcz.)Loes.f.)、天目藜芦(V.Schindleri L)等，主要分布于我国东北、河北、山东、河南、山西、陕西、内蒙古、甘肃、湖北（房县）、四川和贵州等地。 

现代药理学研究表明，藜芦主要成分甾体生物碱具有降血压和抗肿瘤作用(中药辞海(第四卷)，中国医药科技出版社，1998,8-13；徐国钧，徐珞珊，王峥涛等，常用中药才品种整理和质量研究(第四册)，福建科学技术出版社，2001,121-178)。 

从藜芦中分离得到的甾体生物碱——介芬胺，化学结构如式A所示，抗肿瘤活性较低，其IC₅₀约为500～700nM(Robbins D J,Goetz J A,Yuan Z,et al.Inhibitors of the Hedgehog signal transduction pathway[J].Current Cancer Therapy Reviews,2005,1(3):277-288.)。 

发明内容

本发明的目的在于针对介芬胺进行结构修饰，以获得更有药用价值特别是抗肿瘤活性高的化合物。 

本发明的技术方案是：研究设计以介芬胺（式A）为原料制备三元环环巴胺及其衍生物，提供其制备方法，以及这些化合物的医药应用。 

本发明的第一方面，是提供了一种环巴胺类似物三元环环巴胺（化合物1），其化学结构如式1所示： 

进一步的，本发明还提供了环巴胺类似物三元环环巴胺（化合物1）的衍生物，其化学结构如式表所示： 

片段结构 

本发明的第二方面，是提供了上述的环巴胺类似物三元环环巴胺及其衍生物（化合物1-30）的制备方法，包括下列步骤： 

（A）以甾体生物碱--介芬胺为原料，经过黄鸣龙反应制备三元环环巴胺（化合物1）； 

所述的介芬胺可以市售得到。 

黄鸣龙反应，参见文献Masamune,T,Mori,Y,Takasugi,M,et al.,11-Deoxojervine,a new alkaloid from Veratrum species.Bull.Chem.Soc.Jap.,1965,38(8):1374-1378.。 

（B）以步骤（A）获得的三元环环巴胺（化合物1）为底物经取代反应得到4个衍生物：N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-三元环环巴胺（化合物7）、N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-三元环环巴胺（化合物13）、N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-三元环环巴胺（化合物19）、N-苯甲基三元环环巴胺（化合物25）； 

取代反应，参见文献Ahmed F.Abdel-Magid,Kenneth G.Carson,Bruce D.Harris,et al.,Reductive Amination of Aldehydes and Ketones with Sodium Triacetoxyborohydride.Studies on Direct and Indirect Reductive Amination Procedures,J.Org.Chem.,1996,61(11),3849–3862.。 

（C）以步骤（A）获得的三元环环巴胺（化合物1）为底物经氧化还原反应得到3-羰基三元环环巴胺（化合物2）、5,6-二氢三元环环巴胺（化合物3）、3-去氧三元环环巴胺（化合物4）、3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺（化合物5）、3-氯三元环环巴胺（化合物6）； 

氧化还原反应参见工具书<<药物合成反应>>,化学工业出版社,2001,346-424。 

（D）步骤（C）获得的化合物2，3，4，5，6分别经取代反应，各得4个衍生物，共20个化合物：N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-3-羰基三元环环巴胺（化合物8）、N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-5,6-二氢三元环环巴胺（化合物9）、N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-3-去氧三元环环巴胺（化合物10）、N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-3- 去氧-5,6-二氢三元环环巴胺（化合物11）、N-{N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙胺}-3-氯三元环环巴胺（化合物12）、N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3-羰基三元环环巴胺（化合物14）、N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-5,6-二氢三元环环巴胺（化合物15）、N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3-去氧三元环环巴胺16、N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺（化合物17）、N-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基]-3-氯三元环环巴胺（化合物18）、N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-3-羰基三元环环巴胺（化合物20）、N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-5,6-二氢三元环环巴胺（化合物21）、N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-3-去氧三元环环巴胺（化合物22）、N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺（化合物23）、N-(2,3,8,11-四乙二醇-13-甲基)-3-氯三元环环巴胺（化合物24）、N-苯甲基-3-羰基三元环环巴胺（化合物26）、N-苯甲基-5,6-二氢三元环环巴胺（化合物27）、N-苯甲基-3-去氧三元环环巴胺（化合物28）、N-苯甲基-3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺（化合物29）、N-苯甲基-3-氯三元环环巴胺（化合物30）。 

所述的步骤（A）中，三元环环巴胺的制备中以一缩二乙二醇为溶剂；原料（介芬胺）与溶剂的比例为1g︰200mL～1g︰20mL，优选1g︰100mL～1g︰50mL；原料与水合肼、氢氧化钾一起加热；原料与水合肼的比例为1g︰40mL～1g︰4mL，优选1g︰20mL～1g︰10mL；原料与氢氧化钾的比例为1g︰40g～1g︰4g，优选1g︰20g～1g︰10g；在160℃下搅拌，2h后降温至120℃，除去体系中的水，再升温至180℃，反应4h；反应液加入1500mL冰水中，于冰箱内静置2h，过滤，得白色固体；上硅胶柱（颗粒度10-40u），用梯度的石油醚：乙酸乙酯混合液洗脱，得到三元环环巴胺。 

本发明的第三方面，是提供了上述三元环环巴胺及其衍生物（化合物1-30）在制备抗肿瘤药物中的应用。 

本发明选用人肺腺癌细胞A549，小细胞肺癌细胞NCI-H249，人乳腺癌细胞SK-BR-3和人肝癌细胞HepG2，采用MTT法测试三元环环巴胺及其衍生物的抗肿瘤活性。结果表明本发明化合物三元环环巴胺对小细胞肺癌细胞NCI-H249有显著的抑制作用。三元环环巴胺衍生物对所选四种瘤株也具有良好的抑制活性。 

本发明所述的三元环环巴胺及其衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，制备 抗肿瘤药物为由三元环环巴胺及其衍生物作为活性成分与常规药用载体制成的药物组合物。 

所述药物组合物可以是片剂、分散片、含片、口崩片、缓释片、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸、颗粒剂、注射剂、粉针剂或气雾剂等。 

本发明为抗肿瘤的治疗提供了新的药物，本发明也使天然植物的活性成份的发挥更大的临床应用价值。 

具体实施方式

现结合实施例，对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。 

本发明所用试剂和原料均市售可得或可按文献方法制备。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。 

实施例1：制备三元环环巴胺（化合物1） 

将8.5g（0.02mol）介芬胺A（购自百灵威科技有限公司）溶于700mL一缩二乙二醇中，加入水合肼150mL（0.3mol）和氢氧化钾120g（0.21mol），在160℃下搅拌，2h后降温至120℃，除去体系中的水，再升温至180℃，反应4h。反应液加入1500mL冰水中，于冰箱内静置2h，过滤，得白色固体。上硅胶柱，用梯度的石油醚：乙酸乙酯混合液洗脱，得到三元环环巴胺（化合物1）（4.3g），收率65%。 

三元环环巴胺（化合物1）的结构确证： 

无色结晶，熔点：241-243℃； 

ESI-MS：m/z410[M-H]^-，412[M+H]⁺； 

¹H-NMR（500MHz,MeOD,J/Hz）δ:5.29(m,1H,H-6),3.37(m,1H,H-3),3.27(m,1H,H-23),2.97(m,1H,H-26_b),2.85(m,1H,H-12),2.47(t,1H,H-22),2.26(m,1H,H-4_b),2.19(m,1H,H-26_a),2.14(m,1H,H-8),2.09(m,1H,H-4_a),2.07(m,2H,H-16_b,H-24_b),1.95(m,1H,H-9),1.92(m,1H,H-20),1.91(m,1H,H-1_b),1.87(m,1H,H-7_b),1.78(m,1H,H-2_b),1.68(m,1H,H-16_a),1.59(m,1H,H-7_a),1.58(m,3H,H-2_a,H-15_b,H-25),1.40(m,1H,H-15_a),1.31(m,1H,H-11),1.22(m,1H,H-1_a),1.18(m,1H,H-14),1.16(s,3H,H-19),1.12(m,1H,H-24_a),1.02(s,3H,H-18),0.98(d,3H,J=7.5,H-21),0.91(d,3H,J=6.6,H-27)； 

¹³C-NMR（125MHz,MeOD）δ:143.7(C-5),122.1(C-6),85.4(C-17),75.5(C-23),71.8(C-3),64.6(C-22),61.8(C-9),54.1(C-26),41.9(C-8),41.3(C-4), 40.0(C-12),39.2(C-24),39.0(C-10),38.3(C-1),37.5(C-14),37.1(C-20),34.4(C-16),33.6(C-11),32.7(C-13),31.0(C-25),30.8(C-2),27.3(C-7),26.6(C-15),26.3(C-18),19.5(C-19),18.1(C-27),10.8(C-21)。 

实施例2： 

将2.0g（4.9mmol）三元环环巴胺（化合物1）溶于40mL甲苯中，加入环己酮5mL（48.2mmol）和异丙醇铝2.0g（9.8mmol），升温至110℃反应3h，蒸除甲苯，得到黄色油状物，经硅胶柱纯化，得到白色粉末状化合物3-羰基三元环环巴胺（化合物2）（1.1g），收率69%，ESI-MS：m/z410[M+H]⁺。 

实施例3： 

在带搅拌的50mL高压反应釜中，加入0.3g三元环环巴胺（化合物1）、20mL乙醇和50mg Pd/C，将反应釜中的空气用氢气置换后加压至350psi，室温下反应6～8h，过滤回收Pd/C，蒸除溶剂得固体0.3g，上硅胶柱，用梯度的石油醚：乙酸乙酯混合液洗脱（15:1,10:1,5:1），得到249mg白色固体5,6-二氢三元环环巴胺（化合物3），收率为83%，ESI-MS：m/z414[M+H]⁺。 

实施例4： 

将2.0g（4.9mmol）3-羰基三元环环巴胺（化合物2）溶于175mL一缩二乙二醇中，加入水合肼38mL（0.1mol）和氢氧化钾30g（70mmol），在160℃下搅拌，2h后降温至120℃，除去体系中的水，再升温至180℃，反应4h。反应液加入1000mL冰水中，于冰箱内静置2h，过滤，得白色固体。上硅胶柱，用梯度的石油醚：乙酸乙酯混合液洗脱（15:1,10:1,5:1），得到3-去氧三元环环巴胺（化合物4）（1.0g），收率74%，ESI-MS：m/z396[M+H]⁺。 

实施例5： 

在带搅拌的50mL高压反应釜中，加入0.3g3-去氧三元环环巴胺（化合物4）、20mL乙醇和50mg Pd/C，将反应釜中的空气用氢气置换后加压至350psi，室温下反应6～8h，过滤回收Pd/C，蒸除溶剂得固体0.3g，上硅胶柱，用梯度的石油醚：乙酸乙酯混合液洗脱（15:1,10:1,5:1），得到254mg白色固体3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺（化合物5），收率为86%，ESI-MS：m/z398[M+H]⁺。 

实施例6： 

将41mg（0.1mmol）三元环环巴胺（化合物1）溶于8mL吡啶中，冰水冷却后滴加SOCl₂0.2mL（2.8mmol），逐渐升温至25℃，反应过夜。TLC表明反应结束，加入50mL乙酸乙酯，用3×30mL的水洗涤，有机层用30mL的饱和食盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥。蒸除溶剂，得到粗产物40mg，经过硅胶柱分离得到3-氯三元环环巴胺（化合物6）（20mg），ESI-MS：m/z430[M+H]⁺。 

实施例7： 

将41mg（0.1mmol）三元环环巴胺（化合物1）溶于2mL乙腈中，加入68mg（0.2mmol）Benzenepropanamide（N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙酰胺）、26mg（0.1mmol）NaBH(OAc)₃，25℃搅拌反应16h。蒸除溶剂，得到粗产物过硅胶柱分离，得到化合物7（24mg），ESI-MS：m/z632[M+H]⁺。 

实施例8： 

将41mg（0.1mmol）三元环环巴胺（化合物1）溶于2mL四氢呋喃中，加入24mg（0.2mmol）Acetaldehyde、60mg（0.2mmol）NaBH(OAc)₃，23℃搅拌反应12h。蒸除溶剂，得到粗产物过硅胶柱分离，得到化合物13（10mg），收率为23%，ESI-MS：m/z514[M+H]⁺。 

实施例9： 

将41mg（0.1mmol）三元环环巴胺（化合物1）溶于2mL四氢呋喃中，加入34mg（0.2mmol）3,6,9,12-四乙二醇al、60mg（0.2mmol）NaBH(OAc)₃， 23℃搅拌反应12h。蒸除溶剂，得到粗产物过硅胶柱分离，得到化合物19（12mg），收率为26%，ESI-MS：m/z602[M+H]⁺。 

实施例10： 

将41mg（0.1mmol）三元环环巴胺（化合物1）溶于5mL二氯甲烷中，加入30mg（0.2mmol）苯甲醛、60mg（0.2mmol）NaBH(OAc)₃，23℃搅拌反应12h。蒸除溶剂，得到粗产物过硅胶柱分离，得到化合物25（6mg），收率为10%，ESI-MS：m/z502[M+H]⁺。 

实施例11： 

将41mg（0.1mmol）3-羰基三元环环巴胺（化合物2）溶于2mL乙腈中，加入68mg（0.2mmol）Benzenepropanamide（N-(2-乙氧基)-6-[(3-苯丙醇)氨基]乙酰胺）、26mg（0.1mmol）NaBH(OAc)₃，25℃搅拌反应16h。蒸除溶剂，得 到粗产物过硅胶柱分离，得到化合物8（22mg），ESI-MS：m/z630[M+H]⁺。 

化合物9、10、11、12也按照此方法制备得到。 

实施例12： 

将41mg（0.1mmol）5,6-二氢三元环环巴胺（化合物3）溶于2mL四氢呋喃中，加入24mg（0.2mmol）Acetaldehyde、60mg（0.2mmol）NaBH(OAc)₃，23℃搅拌反应12h。蒸除溶剂，得到粗产物过硅胶柱分离，得到化合物15（12mg），收率为24%，ESI-MS：m/z516[M+H]⁺。 

化合物14、16、17、18也按照此方法制备得到。 

实施例13： 

将41mg（0.1mmol）3-去氧三元环环巴胺（化合物4）溶于2mL四氢呋喃中，加入34mg（0.2mmol）3,6,9,12-四乙二醇al、60mg（0.2mmol）NaBH(OAc)₃，23℃搅拌反应12h。蒸除溶剂，得到粗产物过硅胶柱分离，得到化合物22（11mg），收率为25%，ESI-MS：m/z586[M+H]⁺。 

化合物20、21、23、24也按照此方法制备得到。 

实施例14： 

将41mg（0.1mmol）3-去氧-5,6-二氢三元环环巴胺（化合物5）溶于5mL二氯甲烷中，加入30mg（0.2mmol）苯甲醛、60mg（0.2mmol）NaBH(OAc)₃，23℃搅拌反应12h。蒸除溶剂，得到粗产物过硅胶柱分离，得到化合物29（8mg），收率为11%，ESI-MS：m/z488[M+H]⁺。 

实施例15： 

将41mg（0.1mmol）3-氯三元环环巴胺（化合物6）溶于5mL二氯甲烷中，加入30mg（0.2mmol）苯甲醛、60mg（0.2mmol）NaBH(OAc)₃，23℃搅拌反应12h。蒸除溶剂，得到粗产物过硅胶柱分离，得到化合物30（7mg），收率为10%，ESI-MS：m/z520[M+H]⁺。 

化合物26、27、28也按照此方法制备得到。 

实施例16：三元环环巴胺及其衍生物体外抗肿瘤作用研究 

样品配制：用DMSO（Merck）溶解后，加入PBS(-)配成1000μg/ml的溶液或均匀的混悬液，然后用含DMSO的PBS(-)稀释。 

细胞株：A549（人肺腺癌细胞）；NCI-H249（小细胞肺癌细胞）；SK-BR-3（人乳腺癌细胞）；HepG2（人肝癌细胞），购自中科院细胞所。 

培养液：DMEM+10%FBS+双抗 

试验方法：MTT法。96孔板每孔加入浓度为4-6×10⁴个/ml的细胞悬液100μl，置37℃，5%CO₂培养箱内。24h后，加入样品液，10μl/孔，设双复孔，37℃，5%CO₂作用72h。每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl，作用4h后加入溶解液，100μl/孔，置培养箱内，溶解后用全波长多功能酶标仪测570nm OD值。 

结果：见表1。表明三元环环巴胺1对NCI-H249（小细胞肺癌细胞）具有显著地抑制作用。衍生物对所选四种瘤株均具有良好的抑制活性。 

表130个化合物对人肺腺癌细胞、小细胞肺癌细胞、人乳腺癌细胞、人肝癌细胞增值抑制作用 

实施例17：三元环环巴胺1及其衍生物8体外抗肿瘤作用研究 

样品配制：用DMSO（Merck）溶解后，加入PBS(-)配成1000μg/ml的溶液或均匀的混悬液，然后用含DMSO的PBS(-)稀释。 

细胞株：MDA-MB-435（人乳腺癌细胞）；A549（人肺腺癌细胞）；K562（人白血病细胞）；HL-60（人白血病细胞）；MCF-7（人乳腺癌细胞）；PANC-1 （人胰腺癌细胞）；SW1990（人胰腺癌细胞）；PC-3M（人前列腺癌细胞）；NCI-H249(小细胞肺癌细胞)；colo205（人肠癌细胞）；A375（人黑色素瘤细胞）；HepG2（人肝癌细胞），购自中科院细胞所。 

培养液：DMEM+10%FBS+双抗 

试验方法：MTT法。96孔板每孔加入浓度为4-6×10⁴个/ml的细胞悬液100μl，置37℃，5%CO₂培养箱内。24h后，加入样品液，10μl/孔，设双复孔，37℃，5%CO₂作用72h。每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl，作用4h后加入溶解液，100μl/孔，置培养箱内，溶解后用全波长多功能酶标仪测570nm OD值。 

结果：见表2。表明三元环环巴胺1及其衍生物8对PANC-1（人胰腺癌细胞）、PC-3M（人前列腺癌细胞）和NCI-H249（小细胞肺癌细胞）具有显著地抑制作用。 

表2.三元环环巴胺1及其衍生物8对人体肿瘤细胞的IC₅₀(μM) 

实施例18：三元环环巴胺1及其衍生物8对人体胰腺癌PANC-1裸鼠移植瘤的疗效 

阳性对照药物：Gemzar（健择，注射用盐酸吉西他滨，购自礼来公司），用生理盐水配制成溶液 

动物：BALB/C裸鼠（SPF级），雄性，18-20g，每组6只（对照组10只） 

移植性肿瘤：人体胰腺癌PANC-1 

试验方法：取生长良好的PANC-1实体瘤，无菌条件下切割成2-3mm大 小的均匀小块，用套管针每只小鼠右腋皮下接种一块，随机分为8组，分别为： 

1)Control（生理盐水） 

2)Gemzar（60mg/kg，ip×1） 

3)三元环环巴胺1（0.5mg/kg，iv14） 

4)三元环环巴胺1（5mg/kg，iv14） 

5)三元环环巴胺1（10mg/kg，iv14） 

6)三元环环巴胺衍生物8（0.5mg/kg，iv14） 

7)三元环环巴胺衍生物8（5mg/kg，iv14） 

8)三元环环巴胺衍生物8（10mg/kg，iv14） 

接种后13日开始给药，连续尾静脉14天（d0-d13），MMC腹腔注射2次（d13，d16），给药体积为0.5ml/20g体重，并用游标卡尺每4天测瘤块的长径（a）、短径（b），肿瘤体积（tumor volume,TV）计算公式为：TV=1/2×a×b²，相对肿瘤体积（relative tumor volume,RTV）计算公式为：RTV=V_t/V₀，V₀为分笼时（即d0）测量所得肿瘤体积，V_t为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(%)，T/C(%)=TRTV/CRTV×100%，或肿瘤增殖抑制率(%)：（1-T/C）×100%，并进行T检验。接种后35天脱颈处死动物，解剖取瘤块，称瘤重，计算瘤重抑瘤率。 

结果：见表3-5。表明三元环环巴胺1在0.5、5、10mg/kg剂量时，连续尾静脉给药14天，肿瘤增殖抑制率为52.28、53.87、55.36%；三元环环巴胺衍生物8在0.5、5、10mg/kg剂量时，连续尾静脉给药14天，肿瘤增殖抑制率为57.67、63.26、69.30%；阳性对照药GEMZAR60mg/kg,腹腔给药2次肿瘤增殖抑制率为48.28%。 

表3.三元环环巴胺1及其衍生物8对移植于裸鼠的人胰腺癌PANC-1的抑瘤作用（瘤重） 

与Control组比较：*P<0.05，**P<0.01。 

表4.三元环环巴胺1及其衍生物8对移植于裸鼠的人胰腺癌PANC-1的抑瘤作用（肿瘤体积） 

与生理盐水组比较：*P<0.05，**P<0.01。 

表5.三元环环巴胺1及其衍生物8对移植于裸鼠的人胰腺癌PANC-1的抑瘤（相对肿瘤体积） 

与生理盐水组比较：*P<0.05，**P<0.01。()内为肿瘤增殖抑制率。 

实施例19：三元环环巴胺1及其衍生物8对人体前列腺癌PC-3M裸鼠移植瘤的疗效 

阳性对照药物：Gemzar（健择，注射用盐酸吉西他滨），用生理盐水配制成溶液 

动物：BALB/C裸鼠（SPF级），雄性，18-20g，每组6只（对照组10只） 

移植性肿瘤：人体前列腺癌PC-3M 

试验方法：取生长良好的PC-3M实体瘤，无菌条件下切割成2-3mm大小的均匀小块，用套管针每只小鼠右腋皮下接种一块，随机分为8组，分别为： 

1)Control（生理盐水） 

2)Gemzar（60mg/kg，ip×1） 

3)三元环环巴胺1（0.5mg/kg，iv14） 

4)三元环环巴胺1（5mg/kg，iv14） 

5)三元环环巴胺1（10mg/kg，iv14） 

6)三元环环巴胺衍生物8（0.5mg/kg，iv14） 

7)三元环环巴胺衍生物8（5mg/kg，iv14） 

8)三元环环巴胺衍生物8（10mg/kg，iv14） 

接种后13日开始给药，连续尾静脉14天（d0-d13），MMC腹腔注射2次（d13，d16），给药体积为0.5ml/20g体重，并用游标卡尺每4天测瘤块的长径（a）、短径（b），肿瘤体积（tumor volume,TV）计算公式为：TV=1/2×a×b²，相对肿瘤体积（relative tumor volume,RTV）计算公式为：RTV=V_t/V₀，V₀为分笼时（即d0）测量所得肿瘤体积，V_t为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(%)，T/C(%)=TRTV/CRTV×100%，或肿瘤增殖抑制率(%)：（1-T/C）×100%，并进行T检验。接种后20天脱颈处死动物，解剖取瘤块，称瘤重，计算瘤重抑瘤率。 

结果：见表6-8。表明三元环环巴胺1在0.5、5、10mg/kg剂量时，连续尾静脉给药14天，肿瘤增殖抑制率为47.33、44.11、52.67%；三元环环巴胺衍生物8在0.5、5、10mg/kg剂量时，连续尾静脉给药14天，肿瘤增殖抑制率为54.20、60.31、68.70%；阳性对照药GEMZAR60mg/kg,腹腔给药2次肿瘤增殖抑制率为45.80%。 

表6.三元环环巴胺1及其衍生物8对移植于裸鼠的人体前列腺癌PC-3M的抑瘤作用（瘤重） 

与Control组比较：*P<0.05，**P<0.01。 

表7.三元环环巴胺1及其衍生物8对移植于裸鼠的人体前列腺癌PC-3M的抑瘤作用（肿瘤体积） 

与生理盐水组比较：*P<0.05，**P<0.01。 

表8.三元环环巴胺1及其衍生物8对移植于裸鼠的人体前列腺癌PC-3M的抑瘤（相对肿瘤体积） 

与生理盐水组比较：*P<0.05，**P<0.01。()内为肿瘤增殖抑制率。 

实施例20：三元环环巴胺1及其衍生物8对小细胞肺癌NCI-H249裸鼠移植瘤的疗效 

阳性对照药物：Gemzar（健择，注射用盐酸吉西他滨），用生理盐水配制成溶液 

动物：BALB/C裸鼠（SPF级），雄性，18-20g，每组6只（对照组10只） 

移植性肿瘤：小细胞肺癌NCI-H249 

试验方法：取生长良好的NCI-H249实体瘤，无菌条件下切割成2-3mm大小的均匀小块，用套管针每只小鼠右腋皮下接种一块，随机分为8组，分别为： 

1)Control（生理盐水） 

2)Gemzar（60mg/kg，ip×1） 

3)三元环环巴胺1（0.5mg/kg，iv14） 

4)三元环环巴胺1（5mg/kg，iv14） 

5)三元环环巴胺1（10mg/kg，iv14） 

6)三元环环巴胺衍生物8（0.5mg/kg，iv14） 

7)三元环环巴胺衍生物8（5mg/kg，iv14） 

8)三元环环巴胺衍生物8（10mg/kg，iv14） 

接种后13日开始给药，连续尾静脉14天（d0-d13），MMC腹腔注射2次（d13，d16），给药体积为0.5ml/20g体重，并用游标卡尺每4天测瘤块的长径（a）、短径（b），肿瘤体积（tumor volume,TV）计算公式为：TV=1/2×a×b²，相对肿瘤体积（relative tumor volume,RTV）计算公式为：RTV=V_t/V₀，V₀为分笼时（即d0）测量所得肿瘤体积，V_t为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(%)，T/C(%)=TRTV/CRTV×100%，或肿瘤增殖抑制率(%)：（1-T/C）×100%，并进行T检验。接种后20天脱颈处死动物，解剖取瘤块，称瘤重，计算瘤重抑瘤率。 

结果：见表9-11。表明三元环环巴胺1在0.5、5、10mg/kg剂量时，连续尾静脉给药14天，肿瘤增殖抑制率为51.32、53.96、56.72%；三元环环巴胺衍生物8在0.5、5、10mg/kg剂量时，连续尾静脉给药14天，肿瘤增殖抑制率为59.84、63.76、69.12%；阳性对照药GEMZAR60mg/kg,腹腔给药2次肿瘤增殖抑制率为46.92%。 

表9.三元环环巴胺1及其衍生物8对移植于裸鼠的小细胞肺癌NCI-H249的抑瘤作用（瘤重） 

与Control组比较：*P<0.05，**P<0.01。 

表10.三元环环巴胺1及其衍生物8对移植于裸鼠的小细胞肺癌NCI-H249的抑瘤作用（肿瘤体积） 

与生理盐水组比较：*P<0.05，**P<0.01。 

表11.三元环环巴胺1及其衍生物8对移植于裸鼠的小细胞肺癌NCI-H249的抑瘤（相对肿瘤体积） 

与生理盐水组比较：*P<0.05，**P<0.01。()内为肿瘤增殖抑制率。 

以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可作出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。 

环巴胺类似物三元环环巴胺及其衍生物与制备和应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

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A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

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