专利摘要

专利摘要

本发明公开了一种天冬氨酸激酶基因的表达调控序列及其应用。通过对SEQIDNO：1所示序列的第366位至373位进行改造，将该序列与起始密码子GTG或TTG连接后形成的多核苷酸序列，具有转录表达调控活性，这些多核苷酸序列能够增加天冬氨酸激酶编码基因lysC的表达，从而实现L‑赖氨酸的大量积累。

权利要求

1. 一种用于天冬氨酸激酶基因lysC表达调控的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示。

2.一种包含权利要求1所述多核苷酸的载体。

3.根据权利要求2所述的载体，其特征在于，所述载体是以pK18mobsacB为骨架，所述pK18mobsacB的GenBank登记号为FJ437239.1。

4.一种用于天冬氨酸激酶基因lysC表达调控的表达盒，其特征在于，所述表达盒为将权利要求1所述的多核苷酸与无起始密码子的天冬氨酸激酶基因lysC可操作地连接形成的多核苷酸。

5.一种包含权利要求1所述的多核苷酸或权利要求4所述的表达盒的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞来源于谷氨酸棒杆菌。

6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为谷氨酸棒杆菌ATCC13032。

7.根据权利要求6所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是经过如下改良的谷氨酸棒杆菌：1）谷氨酸棒杆菌 ATCC 13032中的天冬氨酸激酶编码基因lysC引入了T311I突变编码序列；2）谷氨酸棒杆菌中丙酮酸羧化酶基因pyc启动子的第279位至第317位的核心区由野生型CGATGTTTGATTGGGGGAATCGGGGGTTACGATACTAGG突变为CGGGCCTTGATTGTAAGATAAGACATTTAGTATAATTAG；3）谷氨酸棒杆菌中二氨基庚二酸脱氢酶基因ddh启动子的第279位至第317位的核苷酸序列由野生型ATGCATCTC突变为CCTTGTTAT。

8.一种增强天冬氨酸激酶编码基因lysC表达的方法，其特征在于，所述方法为将含有权利要求1所述的多核苷酸的载体导入宿主细胞中，通过同源重组整合到宿主细胞的基因组中，所述宿主细胞为谷氨酸棒杆菌。

9.根据权利要求8所述的增强天冬氨酸激酶编码基因lysC表达的方法，其特征在于，所述宿主细胞为谷氨酸棒杆菌ATCC 13032。

10. 根据权利要求9所述的增强天冬氨酸激酶编码基因lysC表达的方法，其特征在于，所述宿主细胞是经过如下改良的谷氨酸棒杆菌：1）谷氨酸棒杆菌 ATCC 13032中的天冬氨酸激酶编码基因lysC引入了T311I突变编码序列；2）谷氨酸棒杆菌中丙酮酸羧化酶基因pyc启动子的第279位至第317位的核心区由野生型CGATGTTTGATTGGGGGAATCGGGGGTTACGATACTAGG突变为CGGGCCTTGATTGTAAGATAAGACATTTAGTATAATTAG；3）谷氨酸棒杆菌中二氨基庚二酸脱氢酶基因ddh启动子的第279位至第317位的核苷酸序列由野生型ATGCATCTC突变为CCTTGTTAT。

11.权利要求1所述的多核苷酸、权利要求2或3所述的载体、权利要求4所述的表达盒、权利要求6或7所述的宿主细胞在制备L-赖氨酸中的应用。

12.一种生产L-赖氨酸的方法，所述方法包括培养权利要求6或7所述的宿主细胞，使之生产L-赖氨酸，从发酵液中分离L-赖氨酸。

13.权利要求1所述的多核苷酸、权利要求2或3所述的载体、权利要求4所述的表达盒、权利要求6或7所述的宿主细胞在制备天冬氨酸家族氨基酸及其衍生物中的应用。

14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述天冬氨酸家族氨基酸及其衍生物为L-苏氨酸、L-异亮氨酸、L-高丝氨酸、L-甲硫氨酸和L-赖氨酸下游产物，所述L-赖氨酸下游产物为戊二胺、5-氨基戊酸、戊二酸。

一种天冬氨酸激酶基因表达调控序列及其应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。