专利摘要

专利摘要

本发明涉及一种生产2’‑岩藻糖基乳糖的重组大肠杆菌及其应用，属于微生物代谢工程领域。本发明提供的2’‑岩藻糖基乳糖从头合成途径关键酶表达水平的调控策略，通过将不同的酶分别进行基因组过表达或者质粒过表达的调控，能够大幅提高代谢通路的效率，利用相关策略构建的基因工程菌株，与现有技术相比提高13倍以上，为2’‑岩藻糖基乳糖的工业生产奠定了基础。

权利要求

1.一种生产2’-岩藻糖基乳糖的重组菌株，其特征在于，是在宿主细胞基因组上插入单拷贝磷酸甘露糖异构酶ManA、磷酸甘露糖变位酶ManB，GDP-甘露糖-4,6-脱水酶Gmd和GDP-岩藻糖合成酶WcaG，在质粒上多拷贝过表达甘露糖-1-磷酸鸟嘌呤基转移酶ManC和2’-岩藻糖基乳糖合成酶FutC，敲除β-半乳糖苷酶LacZ，过表达β-半乳糖苷透性酶LacY获得的；所述宿主细胞为大肠杆菌。

2.如权利要求1所述的一种生产2’-岩藻糖基乳糖的重组菌株，其特征在于，还包括在质粒上多拷贝过表达糖外排转运蛋白SetA。

3.如权利要求1所述的一种生产2’-岩藻糖基乳糖的重组菌株，其特征在于，所述宿主细胞为大肠杆菌BL21（DE3）、大肠杆菌K12 MG1655或大肠杆菌JM109。

4.如权利要求1所述的一种生产2’-岩藻糖基乳糖的重组菌株，其特征在于，所述质粒是pTrc99a、pSB4K5、pET28a或pET22b。

5.如权利要求1所述的一种生产2’-岩藻糖基乳糖的重组菌株，其特征在于，磷酸甘露糖异构酶ManA、磷酸甘露糖变位酶ManB、GDP-甘露糖-4,6-脱水酶Gmd、GDP-岩藻糖合成酶WcaG和β-半乳糖苷透性酶LacY通过Ptrc启动子进行过表达。

6.如权利要求1所述的一种生产2’-岩藻糖基乳糖的重组菌株，其特征在于，

所述磷酸甘露糖异构酶ManA的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述磷酸甘露糖变位酶ManB的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述GDP-甘露糖-4,6-脱水酶Gmd的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述GDP-岩藻糖合成酶WcaG的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述甘露糖-1-磷酸鸟嘌呤基转移酶ManC的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

所述2’-岩藻糖基乳糖合成酶FutC的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

所述β-半乳糖苷酶LacZ的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；

所述β-半乳糖苷透性酶LacY的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

7.如权利要求2所述的一种生产2’-岩藻糖基乳糖的重组菌株，其特征在于，所述糖外排转运蛋白SetA的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。

8.权利要求1-7任意所述重组菌株在生产2’-岩藻糖基乳糖中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，发酵生产2’-岩藻糖基乳糖的方法，具体如下：发酵温度为36-38℃，发酵时间24-48h，摇床转速200-220r/min，接种量1.8%-2%。

一种生产2’-岩藻糖基乳糖的大肠杆菌及其应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。