专利摘要

专利摘要

本发明涉及抗肿瘤药物制备领域，具体地，涉及一种罗氏海盘车提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。所述的罗氏海盘车提取物是将罗氏海盘车用溶剂提取得到的罗氏海盘车醇提物；所述的溶剂为甲醇水溶液或乙醇水溶液或两者的混合溶液，也可以是罗氏海盘车醇提物的乙酸乙酯萃取物或正丁醇萃取物。经实验证明本发明所述的罗氏海盘车提取物有中等抗肿瘤活性，对小鼠H22实体瘤及小鼠S180实体瘤均显示出较明确的抑制作用，尤其是罗氏海盘车醇提物的乙酸乙酯萃取物的抑制作用较明显，提示其可在治疗癌症尤其是肝癌中应用。

权利要求

1.一种罗氏海盘车提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的罗氏海盘车提取物是将罗氏海盘车用溶剂提取得到的罗氏海盘车醇提物；所述的溶剂为甲醇水溶液或乙醇水溶液或两者的混合溶液。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的罗氏海盘车为海盘车科Asteriidae动物罗氏海盘车Asterias rollestoni Bell。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的罗氏海盘车提取物是罗氏海盘车醇提物的乙酸乙酯萃取物或正丁醇萃取物。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的罗氏海盘车醇提物的乙酸乙酯萃取物通过如下方法制备得到：首先将罗氏海盘车用所述溶剂提取得到罗氏海盘车醇提物，然后用乙酸乙酯进行萃取即得。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的罗氏海盘车醇提物的正丁醇萃取物通过如下方法制备得到：首先将罗氏海盘车用所述溶剂提取得到罗氏海盘车醇提物，然后用正丁醇进行萃取即得；

或首先将罗氏海盘车用所述溶剂提取得到罗氏海盘车醇提物，然后用乙酸乙酯萃取后，再用正丁醇萃取即得。

6.根据权利要求1至5任一项权利要求所述的应用，其特征在于，所述的溶剂是指体积百分比为50~100%的甲醇或乙醇水溶液。

7.根据权利要求1至5任一项权利要求所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗实体瘤药物。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗实体瘤药物。

9.根据权利要求1至5任一项权利要求所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗肝癌药物。

10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗肝癌药物。

说明书

技术领域

本发明涉及抗肿瘤药物制备领域，具体地，涉及一种罗氏海盘车提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。 

背景技术

罗氏海盘车（Asterias rollestoni Bell），体五角星状，很扁，盘略宽，腕5，辐径约12cm，间辐径约为3cm。腕基部略缩，末端渐细且翘起，边缘很锐。背板结合成不规则网状，上具很多结节，背棘短而稀疏，龙骨板上棘排列较规则而整齐。背棘尖锥形，或较宽而钝，顶端截形，但不肯纵沟槽。上缘板构成腕的边缘，各板普遍有3个左右的上缘棘，下缘板在口面，各板有2个下缘棘。侧步带棘交互排列成2纵行；内行棘尖较细长而弯曲，各载有3-5个大而发达的直形叉棘。 

现代药理表明罗氏海盘车具有如下作用：（1）抗胃溃疡作用；（2）抗体克作用；（3）壮阳作用。目前尚无发现罗氏海盘车具有抗肿瘤作用。 

肝癌是指发生于肝脏的恶性肿瘤，包括原发性肝癌和转移性肝癌两种，人们日常说的肝癌指的多是原发性肝癌。原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，根据最新统计，全世界每年新发肝癌患者约六十万，居恶性肿瘤的第五位。原发性肝癌按细胞分型可分为肝细胞型肝癌、胆管细胞型肝癌及混合型肝癌。按肿瘤的形态可分为结节型、巨块型和弥漫型。原发性肝癌在我国属于高发病，一般男性多于女性。中国是乙肝大国，我国的肝癌多在乙肝肝硬化的基础上发展而来，丙肝病人也在逐渐增加，乙肝后也会发展为肝癌。目前我国发病人数约占全球的半数以上，占全球肝癌病人的55%，已经成为严重威胁我国人民健康和生命的一大杀手，其危险性不容小视。目前，尚缺乏治疗肝癌的有效药物。 

发明内容

本发明所要解决的首要技术问题在于，为了克服现有技术中对罗氏海盘车应用的不足，提供一种罗氏海盘车提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。 

本发明所要解决的上述技术问题通过以下技术方案予以实现： 

一种罗氏海盘车提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述的罗氏海盘车提取物是将罗氏海盘车用溶剂提取得到的罗氏海盘车醇提物；所述的溶剂为甲醇水溶液或乙醇水溶液或两者的混合溶液。 

作为一种优选方案，所述的罗氏海盘车为棘皮动物门Echinodermata、海星纲Asteroidea、钳棘目Forcipulatida、海盘车科Asteriidae动物罗氏海盘车Asterias rollestoni Bell。 

作为一种优选方案，所述的罗氏海盘车提取物是罗氏海盘车醇提物的乙酸乙酯萃取物或正丁醇萃取物。 

作为一种优选方案，所述的罗氏海盘车醇提物的乙酸乙酯萃取物通过如下方法制备得到：首先将罗氏海盘车用所述溶剂提取得到罗氏海盘车醇提物，然后用乙酸乙酯进行萃取即得。 

作为一种优选方案，所述的罗氏海盘车醇提物的正丁醇萃取物通过如下方法制备得到：首先将罗氏海盘车用所述溶剂提取得到罗氏海盘车醇提物，然后用正 丁醇进行萃取即得； 

或首先将罗氏海盘车用所述溶剂提取得到罗氏海盘车醇提物，然后用乙酸乙酯萃取后，再用正丁醇萃取即得。 

作为一种优选方案，所述的溶剂提取是指溶剂室温提取或加热提取。 

作为一种进一步优选方案，所述的室温是指温度为20~30℃。 

作为一种优选方案，本发明所用的提取方法，是中药领域常规的提取方法，例如可以是，渗漉法、回流法、浸渍法或超声波提取法。 

作为一种优选方案，所述的室温提取次数为2~4次。 

作为一种进一步优选方案，所述的室温提取次数为3次。 

作为一种优选方案，所述的溶剂是指体积百分比为50~100%的甲醇或乙醇水溶液。 

作为一种进一步优选方案，所述的溶剂是指体积百分比为70~95%的甲醇或乙醇水溶液。 

本发明所述的罗氏海盘车醇提物、罗氏海盘车醇提物的乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物，经薄层层析（TLC）检测，均含有如下结构的化合物： 

作为一种优选方案，所述的抗肿瘤药物为抗实体瘤药物。 

作为一种最优选方案，所述的抗肿瘤药物为抗肝癌药物。 

有益效果：经实验证明本发明所述的罗氏海盘车提取物有中等抗肿瘤活性，对小鼠H₂₂实体瘤及小鼠S₁₈₀实体瘤均显示出较明确的抑制作用，尤其是罗氏海盘车醇提物的乙酸乙酯萃取物的抑制作用较明显，提示其可在治疗癌症尤其是肝癌中应用。 

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对发明做任何形式的限定。 

实施例1 

取罗氏海盘车Asterias rollestoni干重1公斤，用2升95%乙醇室温浸渍提取3次，每次24小时，合并提取液并浓缩得浸膏即乙醇提取物，将浸膏用水混悬，先加入1升乙酸乙酯萃取3次再加入1升正丁醇萃取3次，浓缩后分别得到乙酸乙酯浸膏（即乙酸乙酯萃取物）20克和正丁醇浸膏（即正丁醇萃取物）18克。实施例2 

取罗氏海盘车Asterias rollestoni干重1公斤，用2升70%乙醇室温浸渍提取3次，每次24小时，合并提取液并浓缩得浸膏即乙醇提取物，将浸膏用水混悬，先加入1升乙酸乙酯萃取3次再加入1升正丁醇萃取3次，浓缩后分别得到乙酸乙酯浸膏（即乙酸乙酯萃取物）22克和正丁醇浸膏（即正丁醇萃取物）19克。 实施例3 

取罗氏海盘车Asterias rollestoni干重1公斤，用2升95%乙醇加热回流提取3次，1小时，合并提取液并浓缩得浸膏即乙醇提取物，将浸膏用水混悬，先加入1升乙酸乙酯萃取3次再加入1升正丁醇萃取3次，浓缩后分别得到乙酸乙酯浸膏（即乙酸乙酯萃取物）28克和正丁醇浸膏（即正丁醇萃取物）24克。 

实施例4 

取罗氏海盘车Asterias rollestoni干重1公斤，用2升甲醇室温浸渍提取3次，合并提取液并浓缩得浸膏即甲醇提取物，将浸膏用水混悬，先加入1升乙酸乙酯萃取3次再加入1升正丁醇萃取3次，浓缩后分别得到乙酸乙酯浸膏（即乙酸乙酯萃取物）18克和正丁醇浸膏（即正丁醇萃取物）16克。 

实施例5 

将实施例1中制备得到的乙酸乙酯萃取物用硅胶柱以氯仿-甲醇梯度洗脱，进而用中压液相色谱，以ODS反相硅胶为材料分离，最后然后用凝胶sphadex LH-20纯化，最后得白色固体22mg。 

由¹H，¹³C-NMR谱（见表1）可以知道该化合物（I）一共有27个碳，结合高分辨质谱，其分子量确定为C₂₇H₄₃NaO₇S，包括5个甲基，9个亚甲基，8个次甲基和5个季碳，稍加分析发现，5个甲基中，3个为s峰，另外2个为d峰，提示该化合物的3个甲基在季碳上，而2个甲基与CH相连；8个次甲基中，2个与氧相连（79.7d，69.7d），另有1个在双键上（117.8d）；5个季碳中，1个为酮基碳（213.8s），1个在双键上（146.6s），1个与氧相连（75.1s）。根据进一步详细的2D NMR数据分析，包括HSQC和HMBC，即可确定该化合物的结构，结合文献报道，从而鉴定该化合物为：sodium5α-cholesta-9(11)-en-3β,6α,20β-triol-23-one3-sulphate，其纯度经用HPLC测定为98.1%。结构式如下： 

表1上述化合物的¹H,¹³C核磁共振数据 

实施例6体外S₁₈₀肉瘤和H₂₂肝癌小鼠抗肿瘤实验研究 

（1）取昆明种小鼠，雌性，每只小鼠用强力碘和酒精消毒皮肤； 

（2）于右前肢皮下分别接种S₁₈₀瘤液或H₂₂瘤液0.2ml(瘤细胞数在2×10⁶～2.2×10⁶范围内)，24小时后，随机分组； 

（3）对照组灌胃给药10mL/kg0.6%羧甲基纤维素钠，阳性药组腹腔注射环磷酰胺20mg/kg，给药组则每日分别灌胃实施例1制备得到的罗氏海盘车乙醇提取物、乙酸乙酯和正丁醇萃取物0.5g/kg。每天1次，连续10天； 

（4）末次给药后1小时处死小鼠，称体重，剥瘤块称重，计算抑瘤率。抑制率=（对照组瘤重－样品组瘤重）×100%÷对照组瘤重，用SPSS软件，计算药物的EC₅₀值。结果见表2。 

表2实施例1所述提取物_对小鼠S₁₈₀和H₂₂实体瘤的影响 

实施例7体外S₁₈₀肉瘤和H₂₂肝癌小鼠抗肿瘤实验研究 

（1）取昆明种小鼠，雌性，每只小鼠用强力碘和酒精消毒皮肤； 

（2）于右前肢皮下分别接种S₁₈₀瘤液或H₂₂瘤液0.2ml(瘤细胞数在2×10⁶～2.2×10⁶范围内)，24小时后，随机分组； 

（3）对照组灌胃给药10mL/kg0.6%羧甲基纤维素钠，阳性药组腹腔注射环磷酰胺20mg/kg，给药组则每日分别灌胃实施例2制备得到的罗氏海盘车乙醇提取物、乙酸乙酯和正丁醇萃取物0.5g/kg。每天1次，连续10天； 

（4）末次给药后1小时处死小鼠，称体重，剥瘤块称重，计算抑瘤率。抑制率=（对照组瘤重－样品组瘤重）×100%÷对照组瘤重，用SPSS软件，计算药物的EC₅₀值。结果见表3。 

表3实施例2所述提取物_对小鼠S₁₈₀和H₂₂实体瘤的影响 

实施例8体外S₁₈₀肉瘤和H₂₂肝癌小鼠抗肿瘤实验研究 

（1）取昆明种小鼠，雌性，每只小鼠用强力碘和酒精消毒皮肤； 

（2）于右前肢皮下分别接种S₁₈₀瘤液或H₂₂瘤液0.2ml(瘤细胞数在2×10⁶～2.2×10⁶范围内)，24小时后，随机分组； 

（3）对照组灌胃给药10mL/kg0.6%羧甲基纤维素钠，阳性药组腹腔注射环磷酰胺20mg/kg，给药组则每日分别灌胃实施例3制备得到的罗氏海盘车乙醇提取物、乙酸乙酯和正丁醇萃取物0.5g/kg。每天1次，连续10天； 

（4）末次给药后1小时处死小鼠，称体重，剥瘤块称重，计算抑瘤率。抑制率=（对照组瘤重－样品组瘤重）×100%÷对照组瘤重，用SPSS软件，计算药物的EC₅₀值。结果见表4。 

表4实施例3所述提取物_对小鼠S₁₈₀和H₂₂实体瘤的影响 

实施例9体外S₁₈₀肉瘤和H₂₂肝癌小鼠抗肿瘤实验研究 

（1）取昆明种小鼠，雌性，每只小鼠用强力碘和酒精消毒皮肤； 

（2）于右前肢皮下分别接种S₁₈₀瘤液或H₂₂瘤液0.2ml(瘤细胞数在2×10⁶～2.2×10⁶范围内)，24小时后，随机分组； 

（3）对照组灌胃给药10mL/kg0.6%羧甲基纤维素钠，阳性药组腹腔注射环磷酰胺20mg/kg，给药组则每日分别灌胃实施例4制备得到的罗氏海盘车乙醇提取物、乙酸乙酯和正丁醇萃取物0.5g/kg。每天1次，连续10天； 

（4）末次给药后1小时处死小鼠，称体重，剥瘤块称重，计算抑瘤率。抑制率=（对照组瘤重－样品组瘤重）×100%÷对照组瘤重，用SPSS软件，计算药物的EC₅₀值。结果见表5。 

表5实施例4所述提取物_对小鼠S₁₈₀和H₂₂实体瘤的影响 

体外实验表明，罗氏海盘车醇提取物的乙酸乙酯和正丁醇萃取物对小鼠S₁₈₀和H₂₂实体瘤均有较强的抑制作用，其抑瘤率约为20%，提示其在肝癌预防、治疗方面具有极大的应用价值。 

一种罗氏海盘车提取物在制备抗肿瘤药物中的应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。