专利摘要

专利摘要

本发明公开了一种利用菜豆环氧化物水解酶制备(R)‑间硝基苯乙二醇的方法，属于生物催化技术领域。本发明以表达有环氧化物水解酶PvEH2的大肠杆菌全细胞为催化剂，根据其针对外消旋间硝基环氧苯乙烷的优良的立体选择性特性，通过建立一种双相体系——石油醚/水，提高了底物的初始上样浓度和整个催化反应的效率，减轻了单水相体系中高浓度的间硝基环氧苯乙烷对于PvEH2活性的抑制，同时降低了底物自发水解的程度，产物邻二醇的对映体纯度(eep)可达90.2％，底物的转化率可达99.5％。

权利要求

1.一种制备(R)-间硝基苯乙二醇的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将外消旋的间硝基环氧苯乙烷溶解于有机试剂中；

（2）向步骤（1）所得含有外消旋的间硝基环氧苯乙烷的有机试剂中加入水溶液，所述水溶液含表达菜豆环氧化物水解酶的细胞，在20-30℃下恒温搅拌反应8-12 h，所述菜豆环氧化物水解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的；有机相与水相的体积比为(1:4)~(3:7)；有机试剂为沸程为60-90℃的石油醚；加入的菌体质量与底物物质的量的比例δ为3-5 mg/μmol；

（3）反应结束后将整个反应体系静置或离心，使有机相与水相分层，分取下层的水相，萃取，得到(R)-间硝基苯乙二醇；

所述细胞为表达菜豆环氧化物水解酶的重组大肠杆菌细胞；

底物的初始浓度为5-40 mM。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，编码所述菜豆环氧化物水解酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中水溶液包括浓度为100-200 mg/mL的菌悬液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中以乙酸乙酯作为萃取剂。

5.权利要求1-4任一所述的方法在制药或化工领域的应用。

一种利用菜豆环氧化物水解酶制备(R)-间硝基苯乙二醇的方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。