一种新的Istaroxime的合成方法

IPC分类号 : C07J41/00,

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CN201610061330.0

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专利摘要

本发明属于药物化学领域，公开了一种新的Istaroxime的合成方法，该方法以去氢表雄酮为起始原料，经环氧化、开环、还原、氧化等反应制得中间体M-06；再利用苯甲酸乙酯为起始原料，与盐酸羟胺作用得苯羟肟酸，同时以乙醇胺为原料，通过盐酸化、氯代，得二氯乙酸盐酸盐后，再与苯羟肟酸经过取代、水解等反应制得中间体M-11；最后，将M-06与M-11反应制得终产物Istaroxime。该方法在中间体M-06的合成过程中，所有中间体的极性与杂质以及反应试剂的极性差异较大；而中间体11的合成，在反应底物中可参与化学反应的活性位点均较单一。因此，在本发明不需要进行柱层析纯化即可达到要求，从而简化了合成后处理过程。

权利要求

1.一种新的Istaroxime的合成方法，其特征在于：以去氢表雄酮为起始原料，经环氧化、开环、还原、氧化四步反应制得中间体M-06；再利用苯甲酸乙酯作为起始原料，与盐酸羟胺作用得到苯羟肟酸，同时以乙醇胺作为原料，通过盐酸化、氯代，得到二氯乙酸盐酸盐后，再与苯羟肟酸经过取代、水解反应制得中间体M-11；最后，将M-06与M-11反应制得终产物Istaroxime；

各结构式如下：

2.根据权利要求1所述的新的Istaroxime的合成方法，其特征在于具体包括以下步骤：

(1)在二氯甲烷为溶剂的条件下，取去氢表雄酮与间氯过氧苯甲酸进行双键环氧化反应，然后再加入稀硫酸进行环氧化开环反应，将所得反应液纯化得M-02；

(2)在丙酮为溶剂的条件下，取步骤(1)得到的M-02与Jones试剂，搅拌反应20min，再终止反应，将所得反应液纯化得M-03；

(3)在乙醇为溶剂的条件下，取步骤(2)中所得的M-03，在硫酸作用下，加热回流3～15h，将所得反应液纯化得M-04；

(4)在甲醇为溶剂的条件下，取硼氢化钠、六水合氯化镍以及步骤(3)中制备得到的M-04发生还原反应，然后终止反应，将所得反应液纯化得M-05；将M-05溶于丙酮中，滴加Jones试剂，然后继续搅拌反应20min，再终止反应，将所得反应液纯化得M-06；

(5)向乙醇胺中滴加浓盐酸，滴加完毕后反应，将所得反应液纯化得乙醇胺盐酸盐M-07；

(6)在甲苯为溶剂的条件下，取步骤(5)中得到的M-07与SOCl₂进行羟基氯代反应，纯化，得二氯乙胺盐酸盐M-08；

(7)在甲醇为溶剂的条件下，取氢氧化钾和盐酸羟胺发生中和反应，将反应液过滤，并向所得滤液中加入苯甲酸乙酯混合，室温静置，抽滤，滤饼以乙酸水加热溶解完全，静置，抽滤得苯羟肟酸M-09；

(8)在溶剂存在条件下，取步骤(6)中的M-08、步骤(7)中的M-09和强碱，反应，将所得反应液纯化得M-10；

(9)将步骤(8)中所得产物M-10在3～6mol/L的盐酸中加热回流4h，将所得反应液纯化得M-11；

(10)在溶剂存在条件下，取M-11和M-06反应，将所得反应液纯化得终产物Istaroxime；

各化合物的结构式如下：

3.根据权利要求2所述的新的Istaroxime的合成方法，其特征在于：

步骤(4)中所用的M-04、硼氢化钠和六水合氯化镍的摩尔比为1：(3～7)：(1～2)；

步骤(4)中所述的还原反应是指在室温下搅拌反应0.8～3h；

步骤(4)中第一次所述的纯化是指将还原反应后的反应液抽滤，然后将所得滤液减压浓缩得M-05；

步骤(4)中所述的滴加的终点为反应体系成黄棕色且不褪为绿色；

步骤(4)中所述的终止反应均指加入亚硫酸钠水溶液来终止反应；

步骤(4)中第二次所述的纯化是指将所得反应液抽滤，将所得滤饼用石油醚-乙酸乙酯重结晶，得纯化后的M-06。

4.根据权利要求2所述的新的Istaroxime的合成方法，其特征在于：

步骤(1)中所用的去氢表雄酮和间氯过氧苯甲酸的摩尔比为1：(1.5～4)；

步骤(1)中所述的双键环氧化反应的条件为在室温下反应15～35h；

步骤(1)中所述的环氧化开环反应的条件为在室温下反应10～20h；

步骤(1)中所述的纯化是指将环氧化开环反应结束后的反应液倒入水中，抽滤，并用二氯甲烷洗涤沉淀，干燥得纯化后的M-02。

5.根据权利要求2所述的新的Istaroxime的合成方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的取M-02与Jones试剂指先将M-02溶于丙酮溶剂中，在0～20℃的条件下滴加Jones试剂，直至反应体系成黄棕色且不褪为绿色为止；

步骤(2)中所述的终止反应是指加入亚硫酸钠冰水溶液终止反应；

步骤(2)中所述的纯化是指将所得反应液加水稀释、分散、抽滤，滤饼用石油醚-乙酸乙酯重结晶得纯化后的M-03；

步骤(3)中所用的硫酸量为每3mmol的M-03，对应加入2～5mL质量分数为20～60％的硫酸；

步骤(3)中所述的纯化指所得反应液浓缩、分散、抽滤，得纯化后的M-04。

6.根据权利要求2所述的新的Istaroxime的合成方法，其特征在于：

步骤(5)中所述的浓盐酸为质量分数为36％的浓盐酸；

步骤(5)中所述的滴加是指以1滴/2s～3滴/s的速度滴加；

步骤(5)中所述的反应是指在控温不超过40℃下反应20min；

步骤(5)中所用的浓盐酸和乙醇胺的质量比为9:5；

步骤(5)中所述的纯化指浓缩、冷却得纯化后的乙醇胺盐酸盐M-07；

步骤(6)中所用的M-07和SOCl₂的质量比为1：(1.2～2)；

步骤(6)中所述的羟基氯代反应是指在65～85℃下反应3～4h；

步骤(6)中所述的纯化指将反应完成后的反应液冷却，然后抽滤，将所得滤饼用甲苯洗涤，干燥，得纯化后的二氯乙胺盐酸盐M-08。

7.根据权利要求2所述的新的Istaroxime的合成方法，其特征在于：

步骤(7)中所用的盐酸羟胺与氢氧化钾的摩尔比为3:(4～7.5)；

步骤(7)中所述的中和反应的温度不超过50℃。

8.根据权利要求2所述的新的Istaroxime的合成方法，其特征在于：

步骤(8)中所述的溶剂指甲醇和水的混合溶液、N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜；

步骤(8)中所述的强碱为氢氧化钾、碳酸钾、氢化钠或1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯中的至少一种；

步骤(8)中所用的M-08，M-09和强碱的摩尔比为1:1.5:(4～6)；

步骤(8)中所述的反应是指在90℃下反应20～35h；

步骤(8)中所述的纯化是指将所得反应液冷却，回收甲醇、然后用水和乙醚萃取，合并有机层，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，然后抽滤，浓缩，干燥得纯化后的M-10。

9.根据权利要求2所述的新的Istaroxime的合成方法，其特征在于：

步骤(9)中每加入1g的M-10对应加入15～20mL的3～6mol/L的盐酸；

步骤(9)中所述的纯化指所得反应液冷却、抽滤除去沉淀，并将所得滤液中的溶剂蒸干，然后用甲醇重结晶得纯化后的M-11。

10.根据权利要求2所述的新的Istaroxime的合成方法，其特征在于：

步骤(10)中所用的M-06和M-11的摩尔比为1:(1～1.3)；

步骤(10)中，当在四氢呋喃和水的混合溶液为溶剂时，所述的反应指将M-11溶于水中再与M-06在室温下反应1h；当在95％乙醇为溶剂时，所述的反应指取M-11和M-06在三水醋酸钠作碱的条件下65℃反应5h；

步骤(10)中所述的纯化指将所得反应液旋蒸减压回收THF，残留物加饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯萃取，合并有机层，加入无水硫酸钠干燥，然后抽滤除去无水硫酸钠，将所得滤液浓缩至干，得纯化后的最终产物。

说明书

技术领域

本发明属于药物化学领域，特别涉及一种新的Istaroxime的合成方法。

背景技术

Istaroxime(化学名为3-[O-(2-氨基乙基)酮肟]-(5α)-雄甾-3,6,17-三酮)是一种新型的、具有抑制Na⁺/K⁺-ATP酶和Ca²⁺-ATP酶双重作用的抗心衰药。Istaroxime前期是由意大利Sigma-Tau制药公司的MauroGobbini等人以格木属多种植物中分离得到的Cassaine作为母体化合物进行设计合成所得，并将其开发成新型抗心衰药，且获得了专利。在完成I期临床试验后，于2006年与瑞士Debiopharm制药公司签署了共同研发和推广该药的协议。Debiopharm公司还获得在全球大多数国家和地区开发及经销该药的许可，并开始着手开展该药的后续临床研究。

目前，Istaroxime的合成可见于中国专利CN103360457B和德国专利公开文本DE19633349A1，其盐酸盐形式的合成可见于文献J.Med.Chem.,2003,46(17),3644-3654；J.Med.Chem.,2008,51(15),4601-4608；欧洲专利EP1156058A2和世界专利WO2010149666A1。这些文献所报道的合成方法，归纳总结主要有三种：

方法一：以去氢表雄酮作为起始原料，在氮气保护及-10℃条件下，与四氢呋喃硼烷络合物和四水过硼酸钠反应生成雄甾-3,6,17-三醇，然后在溴酸钠与二水合二氧化铷，N-溴代丁二酰亚胺或者Jones试剂作为氧化剂的条件下反应得到(5α)-雄甾-3,6,17-三酮。

与此同时，关于2-氨基乙氧基胺双盐酸盐片段的合成主要也有如下两种方法：

(a)以乙醇胺为起始原料，利用Boc2O保护氨基，然后与N-羟基邻苯二甲酰亚胺(NOP)在三苯基膦和偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)的作用下，通过Mitsunobu反应得到二者的反应产物N-[2-(N-叔丁氧羰基)氨基乙氧基]-邻苯二甲酰亚胺，紧接着再利用水合肼脱除邻苯二甲酰亚胺的氨基保护片段，得到2-(N-叔丁氧羰基)氨基乙羟胺，然后再在盐酸和乙酸乙酯的体系中脱除Boc保护得到2-氨基乙氧基胺双盐酸盐。

(b)以苯羟肟酸为原料，在甲醇钠为碱的作用下，与N-(2-溴乙基)邻苯二甲酰亚胺在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶剂中反应得到二者的缩合产物，再利用水合肼脱除邻苯二甲酰亚胺片段，所得中间体直接再利用盐酸进行水解本羟肟醚后得到2-氨基乙氧基胺双盐酸盐。

最后，2-氨基乙氧基胺双盐酸盐和(5α)-雄甾-3,6,17-三酮在四氢呋喃体系中合成得到Istaroxime。该方法合成2-氨基乙氧基胺双盐酸盐的过程中，(a)路线中需要多次硅胶柱纯化，且Mitsunobu反应中存在诸如三苯基氧膦等较多的副产物，在一定程度上增加了纯化的难度。而在(5α)-雄甾-3,6,17-三酮的合成中，虽然合成路线较短，但合成需要低温条件和气体保护，对设备的要求以及投入成本均较高。

方法二：以去氢表雄酮为起始原料，先利用叔丁基二甲基氯硅烷(TBSCl)保护甾体3位的羟基，接着再还原甾体17位的羰基以及5,6位的双键为羟基，得到相关中间体以后，再利用羟基乙酰化反应将甾体6位和17位的羟基进行乙酰化后，脱除甾体3位的叔丁基二甲基硅烷基(TBS)保护，并将该羟基进一步氧化，同时水解6位和17位的乙酰基得到(6α,17β)-二羟基-雄甾-3-酮，该中间体再与2-氨基乙氧基胺盐酸反应得到甾体3位形成酮肟的中间体，最后再将6位和17位的羟基氧化为羰基后得到了Istaroxime。该合成方法该方法与方法一相比，在不涉及2-氨基乙氧基胺盐酸合成的前提下，采用了9步反应合成了Istaroxime，其步骤较繁杂，合成过程中涉及到多个羟基的保护与去保护反应，不利于工业化大生产，且Istaroxime在后续的研究中均为采用该法进行合成。

方法三：以去氢表雄酮乙酸酯为起始原料，利用氢氧化钠水解脱除乙酰基得到去氢表雄酮后，再用与方法一相同的四氢呋喃硼烷络合物、过硼酸钠、氧化铷、次氯酸钠等试剂在室温条件下反应制得(5α)-雄甾-3,6,17-三酮；最后在磷酸氢二钠的作用下与2-氨基乙氧基胺双盐酸盐在四氢呋喃与水的体系中反应得到Istaroxime。该方法的优点在于合成过程多在室温下进行，适当的缩短了反应时间，不需要过低的反应温度，以四步反应合成了(5α)-雄甾-3,6,17-三酮。但其不足之处在于合成(5α)-雄甾-3,6,17-三酮过程中，由于合成温度比方法一的温度高，易挥发的四氢呋喃硼烷络合物用量较大，除了增加合成投入费用，还因为出现较多的副产物而增加了(5α)-雄甾-3,6,17-三酮纯化的难度。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种新的Istaroxime的合成方法。该方法条件温和、原料易得，无惰性气体保护要求，合成过程无需惰性气体保护，中间体及终产物经抽滤、重结晶等常规操作处理即可，无需柱层析纯化。

本发明的目的通过下述方案实现：

一种新的Istaroxime的合成方法，以去氢表雄酮为起始原料，经环氧化、开环、还原、氧化等四步反应制得中间体M-06；再利用苯甲酸乙酯作为起始原料，与盐酸羟胺作用得到苯羟肟酸，同时以乙醇胺作为原料，通过盐酸化、氯代，得到二氯乙酸盐酸盐后，再与苯羟肟酸经过取代、水解等反应制得中间体M-11；最后，M-06与M-11反应制得终产物Istaroxime。

去氢表雄酮、M-06、M-11、Istaroxime的结构式如下所示：

所述的新的Istaroxime的合成方法具体包括以下步骤：

(1)在二氯甲烷为溶剂的条件下，取去氢表雄酮(DHEA)与间氯过氧苯甲酸(m-CPBA)进行双键环氧化反应，然后再加入稀硫酸进行环氧化开环反应，将所得反应液纯化得M-02；

(2)在丙酮为溶剂的条件下，取步骤(1)得到的M-02与Jones试剂，搅拌反应20min，再终止反应，将所得反应液纯化得M-03；

(3)在乙醇为溶剂的条件下，取步骤(2)中所得的M-03，在硫酸作用下，加热回流3～15h，将所得反应液纯化得M-04；

(5)向乙醇胺中滴加浓盐酸，滴加完毕后反应，将所得反应液纯化得乙醇胺盐酸盐M-07；

(6)在甲苯为溶剂的条件下，取步骤(5)中得到的M-07与SOCl₂进行羟基氯代反应，纯化，得二氯乙胺盐酸盐M-08；

(8)在溶剂存在条件下，取步骤(6)中的M-08、步骤(7)中的M-09和强碱，反应，将所得反应液纯化得M-10；

(9)将步骤(8)中所得产物M-10在3～6mol/L的盐酸中加热回流4h，将所得反应液纯化得M-11；

(10)在溶剂存在条件下，取M-11和M-06反应，将所得反应液纯化得终产物Istaroxime。

步骤(1)中所用的去氢表雄酮和间氯过氧苯甲酸的摩尔比为1：(1.5～4)。

步骤(1)中所述的双键环氧化反应的条件为在室温下反应15～35h。

步骤(1)中所述的环氧化开环反应的条件为在室温下反应10～20h。

步骤(1)中所述的纯化是指将环氧化开环反应结束后的反应液倒入水中，抽滤，并用二氯甲烷洗涤沉淀，干燥得纯化后的M-02。

步骤(1)中加入稀硫酸进行环氧化开环反应之前可加入亚硫酸钠水溶液终止双键环氧化反应。

步骤(2)中所述的取M-02与Jones试剂，优选指先将M-02溶于丙酮溶剂中，在0～20℃的条件下滴加Jones试剂，直至反应体系成黄棕色且不褪为绿色为止。

步骤(2)中所述的终止反应是指加入亚硫酸钠冰水溶液终止反应。

步骤(2)中所述的纯化是指将所得反应液加水稀释、分散、抽滤，滤饼用石油醚-乙酸乙酯重结晶得纯化后的M-03。

步骤(3)中所用的硫酸量为每3mmol的M-03，对应加入2～5mL质量分数为20～60％的硫酸。

步骤(3)中所述的纯化指将所得反应液浓缩、分散、抽滤，得纯化后的M-04。

步骤(4)中所用的M-04、硼氢化钠和六水合氯化镍的摩尔比为1：(3～7)：(1～2)。

步骤(4)中所述的还原反应是指在室温下搅拌反应0.8～3h。

步骤(4)中第一次所述的纯化是指将还原反应后的反应液抽滤，然后将所得滤液减压浓缩得M-05。

步骤(4)中所述的滴加的终点为反应体系成黄棕色且不褪为绿色。

步骤(4)中所述的终止反应均指加入亚硫酸钠水溶液来终止反应。

步骤(4)中第二次所述的纯化是指将所得反应液抽滤，将所得滤饼用石油醚-乙酸乙酯重结晶，得纯化后的M-06。

步骤(5)中所述的浓盐酸优选为质量分数为36％的浓盐酸。

步骤(5)中所述的滴加是指以1滴/2s～3滴/s的速度滴加。

步骤(5)中所述的反应是指在控温不超过40℃下反应20min。

步骤(5)中所用的浓盐酸和乙醇胺的质量比为9:5。

步骤(5)中所述的纯化指浓缩、冷却得纯化后的乙醇胺盐酸盐M-07。

步骤(6)中所用的M-07和SOCl₂的质量比为1：(1.2～2)。

步骤(6)中所述的羟基氯代反应是指在65～85℃下反应3～4h。

步骤(6)中所述的纯化优选指将反应完成后的反应液冷却，然后抽滤，将所得滤饼用甲苯洗涤，干燥，得纯化后的二氯乙胺盐酸盐M-08。

步骤(7)中所用的盐酸羟胺与氢氧化钾的摩尔比为3:(4～7.5)。

步骤(7)中所述的中和反应的温度不超过50℃。

步骤(8)中所述的溶剂指甲醇和水的混合溶液、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亚砜。

步骤(8)中所述的强碱可为氢氧化钾、碳酸钾、氢化钠或1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)中的至少一种。

步骤(8)中所用的M-08，M-09和强碱的摩尔比为1:1.5:(4～6)。

步骤(8)中所述的反应是指在90℃下反应20～35h。

步骤(9)中每加入1g的M-10对应加入15～20mL的3～6mol/L的盐酸。

步骤(9)中所述的纯化指所得反应液冷却、抽滤除去沉淀，并将所得滤液中的溶剂蒸干，然后用甲醇重结晶得纯化后的M-11。

步骤(10)中所用的M-06和M-11的摩尔比为1:(1～1.3)。

步骤(10)中，当在四氢呋喃和水的混合溶液为溶剂时，所述的反应指将M-11溶于水中再与M-06在室温下反应1h；当在95％乙醇为溶剂时，所述的反应指取M-11和M-06在三水醋酸钠作碱的条件下65℃反应5h。

各化合物的结构式为：

合成路线如下所示：

本发明的机理为：

在本发明中间体M-06的合成中，采用常用的间氯过氧苯甲酸在温和的条件下进行双键环氧化反应，虽然此处的环氧结构具有构型差异，但在先经硫酸开环、Jones试剂氧化以及硫酸脱水后，所有的异构体均转为不含构型差异的中间体M-04。而中间体M-04经硼氢化钠还原时也得到多个羟基呈异构态的混合物，但该化合物直接经Jones试剂氧化后即可全部转为不含异构体的中间体M-06，同时还去掉中间体M-04所含的双键。由于M-06合成过程中，所有中间体的极性与杂质以及反应试剂的极性差异较大，可直接加水分散，再经过滤、重结晶即可得到纯度较高的目标中间体M-06。而对于中间体M-11的合成，反应底物可参与化学反应的活性位点均较单一，所得产物的杂质就少。因此，在合成过程中不需要进行柱层析纯化即可达到要求，从而简化了合成后处理过程。

本发明相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：

本发明的合成方法操作简单，原料易得，总产率高，而且安全，是一条新的合成技术路线。对比已报到的文献，本发明的合成方法对设备除耐酸碱外无特殊要求，无需惰性气体保护，无需柱层析纯化，降低了合成成本，有利于工业化生产。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

本发明采用Bruker300MHz核磁共振仪测定其¹H谱和¹³C谱；采用Agilent5975E型质谱仪测定其分子量；实施例中所用试剂均可从市场常规购得。所用试剂均为分析纯或化学纯。

实施例1

(1)中间体M-02的合成

试剂及反应条件为：i.m-CPBA，CH₂Cl₂,rt；ii.H₂SO₄,rt。

取去氢表雄酮(DHEA,5mmol)于反应瓶，加入CH₂Cl₂搅拌溶解后，加入间氯过氧苯甲酸(10mmol)，混合物室温搅拌反应，经TLC检测，约22h后反应完全，向反应液中加入亚硫酸钠冰水溶液淬灭反应。搅拌5min后，再加入质量分数20％的硫酸水溶液4mL，室温搅拌12h。将反应液倒入水中，抽滤，取下层沉淀，用二氯甲烷洗涤，干燥得白色固体1.56g，即为M-02，产率97％。

M-02的波谱数据为：

ESI-MS:m/z:323.1[M+H]⁺；

¹H-NMR(DMSO-d₆,300MHz):δ4.51(s,1H,C₅-OH),δ4.30(s,1H,C₃-OH),δ3.75(s,1H,C₆-OH),δ3.87-3.65(m,2H,C_3,6-H),δ2.41-2.32(dd,2H,J₁＝6.0Hz,J₂＝9.0Hz,C₁₆-H),δ2.06-1.97(m2H,C₁₅-H),δ1.05(s,3H,C₁₈-H),δ0.77(s,3H,C₁₉-H)；

¹³C-NMR(DMSO-d₆,75MHz):δ220.5(C-17),δ74.8(C-6),δ74.4(C-5),δ66.1(C-3),δ16.7(C-18),δ13.9(C-19).

通过以上波谱数据，确证步骤(1)所得的化合物为M-02。

(2)M-03的合成

试剂及反应条件：Jones,acetone,10℃。

取M-02(4mmol)于反应瓶，加入丙酮搅拌溶解，冷却至10℃，缓慢滴加过量的Jones试剂至反应体系成黄棕色且不褪为绿色为止，继续搅拌反应15min，反应物缓慢倾倒入亚硫酸钠的冰水中，抽滤，将所得的滤饼以石油醚-乙酸乙酯重结晶，得白色固体1.15g，即为M-03，产率91％。

ESI-MS:m/z:319.3[M+H]⁺；

¹H-NMR(DMSO-d₆,300MHz):δ3.21-2.95(m,3H,C₄-H,C₅-OH),δ2.57-2.35(m,5H,C_2,7,16-H),δ1.07(s,3H,C₁₈-H),δ0.78(s,3H,C₁₉-H)；

¹³C-NMR(DMSO-d₆,75MHz):δ223.1(C-17),δ212.3(C-3),δ209.8(C-6),δ81.2(C-5),δ14.2(C-18),δ13.9(C-19)。

通过以上波谱数据，确证步骤(2)所得的化合物为M-03。

(3)M-04的合成

试剂及反应条件：H₂SO₄,EtOH,reflux。

取M-03(3mmol)于反应瓶，加入乙醇搅拌溶解，随后加入质量分数为40％的硫酸3mL，混合物加热回流5h，TLC检测原料消失，减压回收乙醇，残留物倾入冰水中，抽滤，将所得沉淀加水洗涤，干燥得0.78g中间体，即为M-04，产率87％。

通过以上波谱数据，确证步骤(3)所得的化合物为M-04。

ESI-MS:m/z:323.1[M+Na]⁺；

¹H-NMR(CDCl₃,300MHz):δ6.20(s,1H,C₄-H),δ2.86-2.75(m,1H),δ2.60-2.43(m,3H),δ2.23-1.29(m,13H),δ1.20(s,3H,C₁₈-H),δ0.93(s,3H,C₁₉-H).

¹³C-NMR(CDCl₃,75MHz):δ219.3(C-17),δ201.2(C-6),δ199.1(C-3),δ160.2(C-5),δ125.9(C-4),δ51.5,50.9,47.6,39.7,35.6,33.9,33.7,30.9,21.6,20.2,17.6(C-18),δ13.7(C-19)。

(4)中间体M-06的合成

试剂及反应条件：i.NaBH₄,NiCl₂·6H₂O,MeOH,rt；ii.Jones,acetone,10℃。

取M-04(2mmol)于反应瓶，加入甲醇溶解，并加入六水合氯化镍(3mmol)搅拌，待其溶解完全后，一次性加入NaBH₄(10mmol)，室温搅拌反应，TLC检测约50min后反应完全，以2.0mol/L的盐酸水溶液淬灭反应，调节pH接近中性，减压回收甲醇，所得残留物加乙酸乙酯溶解，抽滤除掉不溶物，滤液以无水硫酸钠干燥，浓缩至干，所得残留物加丙酮溶解，冷却至10℃，缓慢滴加过量的Jones试剂至反应体系成黄棕色且不褪为绿色为止，继续反应15min，反应物缓慢倾倒入亚硫酸钠的冰水中，抽滤，将所得滤饼加水洗涤至滤液无色，滤饼以石油醚-乙酸乙酯重结晶得白色固体0.47g，即为M-06，产率78％。

ESI-MS:m/z:303.2[M+H]⁺；

¹H-NMR(CDCl₃,300MHz):δ2.68-1.31(m,20H),δ0.99(s,3H,C₁₈-H),δ0.90(s,3H,C₁₉-H)；

¹³C-NMR(CDCl₃,75MHz):δ219.5(C-17),δ210.8(C-6),δ208.2(C-3),δ57.5,53.4,51.5,48.1,45.3,41.2,37.4,35.6,21.6,20.9,13.8(C-18),δ12.6(C-19)。

通过以上波谱数据，确证步骤(4)所得的化合物为M-06。

(5)M-07的合成

试剂及反应条件：36％HCl,rt。

取15.0g乙醇胺于三口反应瓶中，搅拌下由恒压滴液漏斗以1滴/s的速率滴加质量分数为36％的浓盐酸27.0g，控制体系温度不高于40℃，滴毕继续搅拌20min，至pH为2左右，反应停止，减压浓缩除水，待出水很少后，加入少量甲苯共沸除去残留的水，快速倒出冷却，得23.7g略带淡棕色的固体，即为M-07，产率99％。

(6)M-08的合成

试剂及反应条件：SOCl₂,Toluene,75℃

在三口瓶中加入15.0g乙醇胺盐酸盐M-07和甲苯15mL，搅拌下油浴加热至75℃，由恒压滴液漏斗缓慢滴入20.0g二氯亚砜，经3h后反应结束。冷却至室温，抽滤，滤饼用少量甲苯洗涤，滤液回收甲苯下次重复利用。滤饼真空干燥得白色固体2-氯乙胺盐酸盐16.9g，即为M-08，产率95％。

(7)M-09的合成

试剂及反应条件：KOH,MeOH。

两口瓶中加入盐酸羟胺(0.10mol)和甲醇40mL，冰水冷却搅拌下，缓慢滴加KOH(0.15mol)的甲醇溶液20mL。滴毕，抽滤除去KCl沉淀。滤液中加入苯甲酸乙酯(0.05mol)，快速抽滤，以少量甲醇洗涤滤饼。滤液静置48h析出苯羟肟酸钾大量固体，抽滤，将所得滤饼加入1.25mol/L的乙酸水溶液中，搅拌加热溶解完全后，冷却得到白色片状固体6.25g，即为M-09，产率91％。

ESI-MS:m/z:138.3[M+H]⁺；

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):δ11.18(s,1H),δ9.03(s,1H),δ7.81-7.70(m,2H),δ7.53-7.49(m,1H),δ7.47-7.36(m,2H)；

¹³C-NMR(DMSO-d₆,75MHz):164.7(-CO-),133.3(Ar-C),131.6(Ar-C),128.8(Ar-C),127.3(Ar-C)。

通过以上波谱数据，确证步骤(7)所得的化合物为M-09。

(8)M-10的合成

试剂及反应条件：KOH,MeOH,90℃。

单口瓶中加入M-09(15mmol)和KOH(40mmol)，以甲醇40mL和35mL水溶解，继续搅拌30min后，加入M-08(10mmol)，油浴90℃反应，约20h后反应达到平衡，冷却至室温，回收甲醇，残留物加水和乙醚萃取，合并有机层，依次以饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，干燥得1.27g中间体M-10，产率71％。

ESI-MS:m/z:180.1[M]⁺；

¹H-NMR(DMSO-d₆,300MHz):δ8.01-7.92(m,3H,Ar-H,-CONH-),δ7.77-7.61(m,3H,Ar-H),δ5.88(s,2H,-NH₂),δ3.59-3.55(t,J＝6.8Hz,-OCH₂-),δ2.86-2.76(m,2H,-CH₂N-)。

¹³C-NMR(DMSO-d₆,75MHz):δ168.2(-CO-),δ134.1-127.6(Ar-C),δ75.5(-OCH₂-),δ38.1(-CH₂N-)。

通过以上波谱数据，确证步骤(8)所得的化合物为M-10。

(9)M-11的合成

试剂及反应条件：HCl,reflux。

取M-10(1.0g)于反应瓶，加入6mol/L的盐酸水溶液15mL，加热回流4h。冷却，抽滤除去沉淀，滤液蒸干后得到粗产物。甲醇重结晶得到黄色晶体0.61g，即为M-11，产率74％。

¹H-NMR(DMSO-d₆,300MHz):δ11.3(-NH₂),δ8.34(-NH₂),δ4.28(-CH₂-),δ3.14(-CH₂-).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,75MHz):δ70.9,37.5。

通过以上波谱数据，确证步骤(9)所得的化合物为M-11。

(10)终产物Istaroxime的合成

反应瓶中加入M-06(0.5g)和THF，室温搅拌溶解后，快速滴加M-11(0.25g)的水溶液，含THF和水的混合反应体系继续搅拌1h，TLC检测反应完全，减压回收THF，残留物加饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩得浅黄色固体0.48g，即为目标产物istaroxime,产率81％。

ESI-MS:m/z:383.3[M+Na]⁺；

¹H-NMR(DMSO-d₆,300MHz):δ8.05(s,2H,-NH₂),δ4.15-3.92(m,2H,-OCH₂-),δ3.41-3.37(m,2H,-CH₂N),δ3.12-2.74(m,2H,C₇-H),δ2.45-1.06(m,18H),δ0.85(s,3H,C₁₈-H),δ0.79(s,3H,C₁₉-H)；

¹³C-NMR(DMSO-d₆,75MHz):δ219.6(C-17),δ211.0(C-6),δ209.2(C-3),δ56.5,52.4,51.0,47.9,45.0,41.0,37.6,37.4,37.2,37.1,35.7,31.4,20.9,13.9(C-18),δ12.6(C-19)。

通过以上波谱数据，确证步骤(10)所得的化合物为Istaroxime。

综合以上反应步骤，Istaroxime合成的总产率21.8％。

实施例2

本实例的方法与实例1的过程相同，不同之处在于：

(i)、步骤(1)使用1.5倍于去氢表雄酮物质的量的间氯过氧苯甲酸(m-CPBA)，反应35小时，产率79％；

(ii)、步骤(2)的反应温度为0℃，产率93％；

(iii)、步骤(3)使用20％的硫酸5mL反应15小时，产率77％；

(iv)、步骤(4)采用1倍于M-04物质的量的六水合氯化镍和3倍于M-04物质的量的硼氢化钠反应3小时，产率68％；

(v)、步骤(5)以1滴/2s的速率滴加浓盐酸，产率99％；

(vi)、步骤(6)使用1.2倍于M-07质量的SOCl₂在65℃下反应4小时，产率91％；

(vii)、步骤(7)使用1.5倍物质的量的盐酸羟胺和2倍物质的量的KOH进行反应，产率85％；