专利摘要

本发明公开了一种从雷公藤中制备雷公藤乙素的方法。将雷公藤根用乙醇水溶液加热回流提取，得到总浸膏。将总浸膏用乙酸乙酯溶解数次至不再溶解，得乙酸乙酯部位。将乙酸乙酯部位依次经中性氧化铝色谱柱、MCIGEL色谱柱和硅胶色谱柱层析，得雷公藤乙素粗品。最后用乙酸乙酯重结晶，得雷公藤乙素纯品。该法提取制备过程相对简单、设备要求低、产品得率高、纯度高、适合雷公藤乙素的大规模分离制备。

权利要求

1.从雷公藤中制备雷公藤乙素的方法，其特征在于它包含以下步骤：

（1）将雷公藤根切片，用3～10倍量的乙醇水溶液（70%～95%）加热回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩回收乙醇得到总浸膏，将总浸膏用乙酸乙酯溶解数次至不再溶解，合并乙酸乙酯溶液，减压浓缩回收乙酸乙酯得乙酸乙酯部位；

（2）将乙酸乙酯部位经10～30倍量中性氧化铝色谱柱层析，先用石油醚—乙酸乙酯（2:3，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用乙酸乙酯—甲醇（3:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得中性氧化铝色谱柱洗脱部位；

（3）将中性氧化铝色谱柱洗脱部位经MCIGEL色谱柱层析，先用甲醇—水（1:3，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用甲醇—水（1:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得MCIGEL色谱柱洗脱部位；

（4）将MCIGEL色谱柱洗脱部位经10～30倍量硅胶色谱柱层析，先用石油醚—乙酸乙酯（7:4，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用石油醚—乙酸乙酯（1:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得硅胶色谱柱洗脱部位，并析出雷公藤乙素粗品；

（5）将雷公藤乙素粗品用乙酸乙酯结晶，得到雷公藤乙素粗晶，再用乙酸乙酯重结晶1～2次，得雷公藤乙素纯晶。

说明书

技术领域

本发明属于药物制备领域，特别涉及一种从雷公藤中制备雷公藤乙素的方法。

背景技术

雷公藤( Tripteryginum Wilfordii Hook. F) 又名黄藤、黄藤木、黄腊藤、黄檀根、断肠草等，属卫茅科植物。味辛、苦，性凉，有大毒，归心、肝、脾、肾经，有清热解毒，祛风除湿，舒筋活血通络，消肿止痛，杀虫止痒之功。主要分布福建、湖南、江西等地。临床常用于治疗类风湿性关节炎、慢性肾炎、红斑狼疮等难治性免疫功能亢进疾病。目前有雷公藤片、雷公藤多苷片、雷公藤内酯、雷公藤内酯软膏、雷公藤总萜片等国家药品标准收载的多个国产药品品种广泛应用于临床，疗效显著。

雷公藤乙素（Tripdiolide），又名雷公藤内酯二醇，是雷公藤中的一种二萜内酯类成分。雷公藤乙素是雷公藤的主要活性成分，也是雷公藤多苷片和雷公藤总萜片的主要有效成分。研究表明雷公藤乙素具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤以及治疗糖尿病肾病等作用，具有很好的药用开发前景。

目前关于雷公藤乙素的制备方法有：雷公藤提取物反复柱层析制备法，雷公藤提取物高效液相色谱制备法，雷公藤提取物高速逆流色谱制备法等。这些方法有的过程非常复杂、提取制备效率低，有的产品纯度不高、得率低，有的需要昂贵仪器设备、有机溶剂的用量很大、成本高、难以适合雷公藤乙素的大规模分离制备。

本发明公开了一种从雷公藤中制备雷公藤乙素的方法，该法与现有方法比较，具有提取制备过程相对简单、设备要求低、产品得率高、纯度高、适合雷公藤乙素的大规模分离制备等优势。

发明内容

本发明的目的是提供一种从雷公藤中制备雷公藤乙素的方法，该法与现有方法比较，具有提取制备过程相对简单、设备要求低、产品得率高、纯度高、适合雷公藤乙素的大规模分离制备等优势。

本发明的技术方案如下：

（1）将雷公藤根切片，用3～10倍量的乙醇水溶液（70%～95%）加热回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩回收乙醇得到总浸膏。将总浸膏用乙酸乙酯溶解数次至不再溶解，合并乙酸乙酯溶液，减压浓缩回收乙酸乙酯得乙酸乙酯部位。

（2）将乙酸乙酯部位经10～30倍量中性氧化铝色谱柱层析，先用石油醚—乙酸乙酯（2:3，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用乙酸乙酯—甲醇（3:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得中性氧化铝色谱柱洗脱部位。

（3）将中性氧化铝色谱柱洗脱部位经MCI GEL色谱柱层析，先用甲醇—水（1:3，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用甲醇—水（1:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得MCI GEL色谱柱洗脱部位。

（4）将MCI GEL色谱柱洗脱部位经10～30倍量硅胶色谱柱层析，先用石油醚—乙酸乙酯（7:4，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用石油醚—乙酸乙酯（1:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得硅胶色谱柱洗脱部位，并析出雷公藤乙素粗品。

（5）将雷公藤乙素粗品用乙酸乙酯结晶，得到雷公藤乙素粗晶，再用乙酸乙酯重结晶1～2次，得雷公藤乙素纯晶，采用雷公藤乙素对照品对照HPLC法以及核磁共振波谱法鉴定产品。经HPLC检测雷公藤乙素含量大于99%。相对于雷公藤药材中雷公藤乙素的量，该法制得雷公藤乙素产品得率大于90%。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但应理解本发明的范围非仅限于这些实施例的范围。

实施例1：

将雷公藤根30千克切片，用10倍量的95%乙醇水溶液加热回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩回收乙醇得到总浸膏2915克。将总浸膏用乙酸乙酯溶解数次至不再溶解，合并乙酸乙酯溶液，减压浓缩回收乙酸乙酯得乙酸乙酯部位480克。将乙酸乙酯部位经30倍量中性氧化铝色谱柱层析，先用石油醚—乙酸乙酯（2:3，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用乙酸乙酯—甲醇（3:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得中性氧化铝色谱柱洗脱部位36克。将中性氧化铝色谱柱洗脱部位经MCI GEL色谱柱层析，先用甲醇—水（1:3，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用甲醇—水（1:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得MCI GEL色谱柱洗脱部位3.3克。将MCI GEL色谱柱洗脱部位经30倍量硅胶色谱柱层析，先用石油醚—乙酸乙酯（7:4，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用石油醚—乙酸乙酯（1:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得硅胶色谱柱洗脱部位，并析出雷公藤乙素粗品0.12克。将雷公藤乙素粗品用乙酸乙酯结晶，得到雷公藤乙素粗晶，再用乙酸乙酯重结晶1次，得雷公藤乙素纯晶0.084克，采用雷公藤乙素对照品对照HPLC法以及核磁共振波谱法鉴定产品。经HPLC检测雷公藤乙素含量为99.1%。经HPLC测得雷公藤药材中雷公藤乙素含量为3.1ppm。相对于雷公藤药材中雷公藤乙素的量，雷公藤乙素产品得率为90.3%。

实施例2：

将雷公藤根30千克切片，用3倍量的70%乙醇水溶液加热回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩回收乙醇得到总浸膏3045克。将总浸膏用乙酸乙酯溶解数次至不再溶解，合并乙酸乙酯溶液，减压浓缩回收乙酸乙酯得乙酸乙酯部位498克。将乙酸乙酯部位经10倍量中性氧化铝色谱柱层析，先用石油醚—乙酸乙酯（2:3，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用乙酸乙酯—甲醇（3:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得中性氧化铝色谱柱洗脱部位38克。将中性氧化铝色谱柱洗脱部位经MCI GEL色谱柱层析，先用甲醇—水（1:3，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用甲醇—水（1:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得MCI GEL色谱柱洗脱部位4.1克。将MCI GEL色谱柱洗脱部位经10倍量硅胶色谱柱层析，先用石油醚—乙酸乙酯（7:4，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用石油醚—乙酸乙酯（1:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得硅胶色谱柱洗脱部位，并析出雷公藤乙素粗品0.13克。将雷公藤乙素粗品用乙酸乙酯结晶，得到雷公藤乙素粗晶，再用乙酸乙酯重结晶2次，得雷公藤乙素纯晶0.085克，采用雷公藤乙素对照品对照HPLC法以及核磁共振波谱法鉴定产品。经HPLC检测雷公藤乙素含量为99.2%。经HPLC测得雷公藤药材中雷公藤乙素含量为3.1ppm。相对于雷公藤药材中雷公藤乙素的量，雷公藤乙素产品得率为91.3%。

实施例3：

将雷公藤根30千克切片，用6倍量的85%乙醇水溶液加热回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩回收乙醇得到总浸膏3002克。将总浸膏用乙酸乙酯溶解数次至不再溶解，合并乙酸乙酯溶液，减压浓缩回收乙酸乙酯得乙酸乙酯部位496克。将乙酸乙酯部位经20倍量中性氧化铝色谱柱层析，先用石油醚—乙酸乙酯（2:3，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用乙酸乙酯—甲醇（3:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得中性氧化铝色谱柱洗脱部位40克。将中性氧化铝色谱柱洗脱部位经MCI GEL色谱柱层析，先用甲醇—水（1:3，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用甲醇—水（1:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得MCI GEL色谱柱洗脱部位4.3克。将MCI GEL色谱柱洗脱部位经20倍量硅胶色谱柱层析，先用石油醚—乙酸乙酯（7:4，V/V）洗脱，洗脱液弃去，再用石油醚—乙酸乙酯（1:1，V/V）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得硅胶色谱柱洗脱部位，并析出雷公藤乙素粗品0.14克。将雷公藤乙素粗品用乙酸乙酯结晶，得到雷公藤乙素粗晶，再用乙酸乙酯重结晶2次，得雷公藤乙素纯晶0.0841克，采用雷公藤乙素对照品对照HPLC法以及核磁共振波谱法鉴定产品。经HPLC检测雷公藤乙素含量为99.2%。经HPLC测得雷公藤药材中雷公藤乙素含量为3.1ppm。相对于雷公藤药材中雷公藤乙素的量，雷公藤乙素产品得率为90.4%。

从雷公藤中制备雷公藤乙素的方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。