3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成方法

IPC分类号 : C07J1/00,C07J43/00,A61P35/00

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CN201610093398.7

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专利摘要

本发明涉及一种3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成方法，包括如下步骤：(a)(3β)-羟基-16-溴-雄甾-5(6)-烯-17-酮的合成；(b)中间体(3β)-羟基-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成；(c)将步骤(b)所得产物在溶剂体系下碘代生成(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮；(d)最后将步骤(c)所得产物在钯催化剂作用下与芳基硼酸进行偶联反应得到目标化合物。

权利要求

1.一种3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成方法，其特征在于包括如下步骤：

(a)(3β)-羟基-16-溴-雄甾-5(6)-烯-17-酮的合成：

将去氢表雄酮在有机溶剂中与溴化酮反应生成(3β)-羟基-16-溴-雄甾-5(6)-烯-17-酮；

(b)中间体(3β)-羟基-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成：

将步骤(a)所得产物在氮气保护下脱溴成烯得到中间体(3β)-羟基-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮；

(c)(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮：

将步骤(b)所得产物在溶剂体系下碘代生成(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮；

(d)最后将步骤(c)所得产物在钯催化剂作用下与芳基硼酸进行偶联反应得到目标化合物3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮。

2.根据权利要求1所述的一种3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成方法，其特征在于其所述步骤(a)中的有机溶剂选自甲醇、乙醇。

3.根据权利要求1所述的一种3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成方法，其特征在于其所述步骤(b)是通过溴化锂和碳酸锂进行脱溴反应。

4.根据权利要求1所述的一种3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成方法，其特征在于其所述步骤(c)中溶剂体系为吡啶和CCl₄体系。

5.根据权利要求1所述的一种3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成方法，其特征在于其所述步骤(d)中催化剂为Pd催化剂可选Pd(dppf)Cl₂，Pd(PPh₃)₄,Pd(acac)₂,PdCl₂(DPPE),Pd/C或Pd(CH₃CN)Cl₂。

说明书

技术领域

本发明属于化学合成领域，涉及到一种化合物的制备方法，具体是3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成方法。

背景技术

天然甾体的改造和修饰已经越来越受到人们的关注，经过某些特定的修饰，如甾体环、侧链的修饰，可以得到一些重要的优于母体生物活性甾体化合物衍生物【Levina,I.S.；Pokrovskaya,E.V.；Kulikova,L.E.；Kamernitzky,A.V.；Kachala,V.V.；Smirnov,A.N.Steroids.2008,73,815】。如已经用于临床的醋酸阿比特龙酯，化学名为17-(3-吡啶基)雄甾-5,16-二烯-3β-乙酸酯，是由CentocorOrtho公司开发的口服有效的CYP17酶不可逆抑制剂，通过转化成阿比特龙对睾丸及身体其它部位如肾上腺等产生的雄激素起抑制作用。2011年4月28日经美国FDA批准上市，与泼尼松联用治疗前列腺癌【G.A.Potter,S.E.Barrie,M.JarmanandM.G.Rowlands,J.Med.Chem.,1995，38,2463.】。

许多研究发现，甾体D环修饰时，如果能够保留甾体C-17位的羰基，而在羰基的邻位C-16位上引入一些特征侧链，同样能够获得优于母体化合物的生理功能【Chattopadhaya,R.；Jindal,D.P.；Minu,M.；Gupta,R.Arzneim.Forsch.2004,54,551；Bansal,R.；Guleria,S.Steroids.2008,73,1391；Dubey,S.；Kaur,P.；Jindal,D.P.；Satyanarayan,Y.D.；Piplani,P.Med.Chem.2008,4,229；Guo,H.；Wu,H.；Yang,J.；Xiao,Y.；Altenbach,H.；Qiu,G.；Hu,H.；Wu,Z.；He,X.；Zhou,D.；Hu,X.Steroids.2011,76,709；Moreira,V.M.；Salvador,J.A.R.；Bejad,A.M.；Paixaod,J.A.Steroids.2011,76,582.】。如2004年，Dubey等人通过多步合成了一系列16-(4-取代的苯乙烯基)-雄甾-5-烯衍生物，细胞活性测试表明这是一类新型的细胞毒性药物，通过对人体的三种癌症细胞：乳癌细胞MCF-7，肺癌细胞NCI-H460和中枢神经肿瘤细胞SF-268这三种人癌细胞的体外抗肿瘤实验，发现这些化合物可以诱导人体的癌细胞凋亡，从而抑制肿瘤细胞的增殖【Dubey,S.；Piplani,P.；Jindal,D.P.ChemBiodiver.2004,1,1529.】。2007年，Gamal课题组报道了在表雄酮D-环保留17-位羰基的情况下键连了一个杂环结构，获得了很好的抗菌活性【Mervat,M.；Abdelhalim.；Manal,M.T.；Samira,T.；Rabie.；Gamal,A.Steroids.2007,72,459.】。2012年，Bansa等人以雄甾去氢表雄酮为原料，在甾体D环的16位的碳原子上，在保留17-位羰基的基础上键连了一个咪唑基，生物活性测试表明具有很强的抑制癌症细胞的作用【Ranju,B.；Sheetal,G.；Sridhar,T.；Subhash,L.；Patwar,R.Steroids.2012,77,621.】。

近来研究发现甾体环中如存在多个烯基，更能够强化甾体化合物的生理活性。如2015年GabrieleM. 等人从海绵Callyspongiacf.C.flammea中分离到三个多烯基甾体化合物，尤其值得注意的是这些甾体化合物中存在一般甾体衍生物不常形成的C(8)＝C(14)的烯基。这些化合物具有抑制Aftin-5细胞产生Ab-42而用于治疗老年痴呆症。

发明内容

针对以上所述缺陷，本发明提供了一种3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成方法，将3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮作为目标化合物，结构式如下：

此化合物中除了保留了甾体应有的活性结构，同时在甾体D环上保留17-位羰基的，在甾体刚性骨架上构建α,β-不饱和羰基结构单元，能与多种受体结合,呈现出广泛的生物活性。

为达到以上目的，本发明采用了以下技术方案，一种3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成方法，包括如下步骤：

(a)(3β)-羟基-16-溴-雄甾-5(6)-烯-17-酮的合成：

将去氢表雄酮在有机溶剂中与溴化酮反应生成(3β)-羟基-16-溴-雄甾-5(6)-烯-17-酮；

(b)中间体(3β)-羟基-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成：

将步骤(a)所得产物在氮气保护下脱溴成烯得到中间体(3β)-羟基-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮；

(c)(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮：

将步骤(b)所得产物在溶剂体系下碘代生成(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮；

(d)最后将步骤(c)所得产物在钯催化剂作用下与芳基硼酸进行偶联反应得到目标产物

本发明所述步骤(a)中的有机溶剂选自甲醇、乙醇；所述步骤(b)是通过溴化锂和碳酸锂进行脱溴反应；所述步骤(c)中溶剂体系为吡啶和CCl4体系；所述步骤(d)中所催化剂为Pd催化剂可选Pd(dppf)Cl2，Pd(PPh3)4,Pd(acac)2,PdCl2(DPPE),Pd/C或Pd(CH3CN)Cl2。

采用以上技术方案后，本发明在甾体刚性骨架上具有α,β-不饱和羰基结构单元对生物活性有着重要的作用，从甾体合成角度出发，因为甾体C(8)＝C(14)烯基对甾体母环的影响，在甾体C(8)-C(14)进行结构修饰会给出特殊的生理活性。

通过本发明的方法合成3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮，收率如表1所示。

表1化合物3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6)，8(14)，15(16)-三烯-17-酮(5a-h)的收率

^aIsolatedyields.

下面结合实施例对本发明作进一步描述。

具体实施方式

本发明一种3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成方法，包括如下步骤：

(a)(3β)-羟基-16-溴-雄甾-5(6)-烯-17-酮的合成：

将去氢表雄酮在有机溶剂中与溴化酮反应生成(3β)-羟基-16-溴-雄甾-5(6)-烯-17-酮；

(b)中间体(3β)-羟基-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成：

将步骤(a)所得产物在氮气保护下脱溴成烯得到中间体(3β)-羟基-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮；

(c)(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮：

将步骤(b)所得产物在溶剂体系下碘代生成(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮；

(d)最后将步骤(c)所得产物在钯催化剂作用下与芳基硼酸进行偶联反应得到目标化合物3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮。

测试仪器

红外光谱分析：Brukertensor27红外光谱仪，KBr压片法，检测范围为4000～400cm-1；熔点测量：WRR熔点仪(上海精密科学仪器有限公司)，数据未经校正。1H-NMR及13C-NMR分析：BrukerAdvance600(德国Bruker公司)；反应进程用TLC跟踪检测。

(3β)-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮(5a-h)的合成

Scheme1为目标化合物3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成路线：

试剂和条件:(a)CuBr2,CH3OH,回流8h,82％；(b)LiBr,Li2CO3,DMF,回流,31％；(c)I2,DMAP,吡啶,CCl4,0℃,80％；(d)Pd(PPh3)2Cl2/CuI,ArB(OH)2,2mol/LNa2CO3,THF,CH3OH,回流,74-91％。

Scheme1

原料(3β)-羟基-16-溴-雄甾-5(6)-烯-17-酮(2)的合成

取2.88g(0.01mol)去氢表雄酮，5.6g(0.025mol)溴化铜，30mL甲醇，回流，TLC跟踪。8h原料完全反应。停止反应，旋干甲醇，用150mLDCM萃取，依次水洗，饱和食盐水洗1-2遍，然后收集有机相，无水硫酸钠干燥。旋干得黄色固体，重结晶，得类白色固体3.5g，产率82％；IR(KBr,cm-1):3287,2936,2859,1749,1454,1375,1195,1133,1103,910,884,608；Mp:178-179℃[文献值为177-178℃](PE/AcOEt).【ZhangBL,ZhangE,PangLP,SongLX,LiYF,YuB,LiuHM.Steroids2013,78,1200–08】。

实施例1：关键中间体(3β)-羟基-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮(3)的合成

取化合物(6)3.67g(0.01mol)，一水溴化锂3.67g(0.035mol)，碳酸锂2.96g(0.04mol)，30mLDMF，回流，氮气保护。8h后停止反应，冷却后逐滴加到碎冰中，搅拌，有固体析出，抽滤，得到黄色固体。用DCM溶解，依次用水洗，饱和食盐水洗1-2遍，然后收集有机相，无水硫酸钠干燥，旋干得黄色粘稠状固体，柱层析，DCM:EA＝20:1，收集第二个点得0.88g，产率31.0％；IR(KBr,cm-1):3312,2930,2858,1709,1643,1519,1453,1219,1108,1009,940,865,700；13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ(ppm):212.2,152.69,141.65,139.34,133.78,128.06,118.87,70.98,48.28,45.75,41.59,38.87,36.34,31.50,28.97,27.63,22.95,19.50,18.82；Mp:194-195℃；1HNMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):7.81(d,J＝5.7Hz,1H),5.94(d,J＝5.7Hz,1H),5.28(s,1H),3.52(m,1H),1.12(s,3H),0.95(s,3H)；MS(EI)(m/z):285.43[(M+1)+](100％)。

实施例2：(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮(4)的合成

取化合物(7)0.50g(1.74mmol)，碘0.89g(3.48mmol),DMAP0.01g(0.087mmol)，吡啶6mL(0.07mmol)，CCl415mL于0℃下搅拌，搅拌过夜。反应结束后旋干溶剂后，用DCM萃取之后，用饱和的硫代硫酸钠的溶液洗1-2遍，20％稀盐酸洗1-2遍之后，饱和食盐水洗一遍，收集有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析，DCM:EA＝20:1，得到浅棕色产品，产率80％；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):8.16(s,1H),5.28(s,1H),3.68-3.39(m,1H),1.15(s,3H),0.94(s,3H)；13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ(ppm):204.62,158.00,140.59,138.94,133.13,117.62,97.47,69.95,47.06,43.82,40.52,37.88,35.24,30.46,28.06,26.81,22.11,18.52,17.70.IR(KBr):3468,2929,2858,1700,1657,1513,1450,1370,1276,1211,1062,1004,937,918,846,734；HRMS(ESI)calcdforC19H23IO2[M+H]412.0822；Found411.0818；Mp:135-136℃(PE/AcOEt)。

实施例3：(3β)-羟基-16-苯基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮(5a)的合成

取化合物(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮0.50g(1.2mmol)，苯硼酸0.26g(2.13mmol)，双三苯基膦二氯化钯0.017g(0.024mmol)，碘化亚铜0.0024g(0.013mmol),THF20mL，甲醇4mL，随后加入2M碳酸钠溶液2.4mL，升温至回流。10h后原料消耗完毕。反应结束，旋干溶剂后，用DCM萃取，之后，用水洗1-2遍，饱和食盐水洗1-2遍，收集有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析，DCM:EA＝10:1，得到淡黄色固体产品，产率：91％,Mp:175-176℃(PE/AcOEt)；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):7.96(s,1H),7.77(d,J＝7.7Hz,2H),7.31(t,J＝7.6Hz,2H),7.24(t,J＝7.3Hz,1H),5.31(s,1H),3.53(m,1H),1.19(s,3H),0.96(s,3H)；13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ(ppm):209.53,146.57,141.62,137.77,136.78,133.70,132.22,128.49,128.29,127.12,119.04,71.05,48.53,47.50,41.61,38.98,36.33,31.52,29.11,27.87,23.36,19.58,18.87；IR(KBr,cm-1):3462,2929,2856,1684,1450,1339,1292,1176,1059,927,795,750,654；HRMS(ESI)calcdforC25H28O2[M+H]361.2168；Found361.2164；

Pd催化剂可选Pd(dppf)Cl2，Pd(PPh3)4,Pd(acac)2,PdCl2(DPPE),Pd/C或Pd(CH3CN)Cl2。

实施例4：(3β)-羟基-16-(3-吡啶基)雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮(5b)的合成

取化合物(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮0.50g(1.2mmol)，吡啶-3-硼酸0.26g(2.13mmol)，双三苯基膦二氯化钯0.017g(0.024mmol)，碘化亚铜0.0024g(0.013mmol),THF20mL，甲醇4mL，随后加入2M碳酸钠溶液2.4mL，升温至回流。10h后原料消耗完毕。反应结束，旋干溶剂后，用DCM萃取，之后，用水洗1-2遍，饱和食盐水洗1-2遍，收集有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析，DCM:EA＝10:1，得到淡黄色固体产品,产率:85％,Mp:167-168℃(PE/AcOEt)；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):8.91(s,1H),8.46(d,J＝4.4Hz,1H),8.17(d,J＝7.9Hz,1H),8.06(s,1H),7.28–7.23(m,1H),5.32(s,1H),3.58–3.51(m,1H),1.98(s,1H),1.20(s,3H),0.98(s,3H)；13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ(ppm):208.10,147.92,147.00,146.13,140.75,136.75,134.59,133.43,132.83,122.32,119.83,117.80,69.99,47.61,46.25,40.57,38.05,35.31,30.49,29.90,26.80,22.26,18.57,17.80；IR(KBr,cm-1):3472,2928,2857,1697,1647,1458,1415,1376,1299,1066,933,808；HRMS(ESI)calcdforC24H27NO2[M+H]362.2121；Found362.2112。

实施例5：(3β)-羟基-16-(2-氟苯基)雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮(5c)的合成

取化合物(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮0.50g(1.2mmol)，2-氟苯硼酸0.30g(2.13mmol)，双三苯基膦二氯化钯0.017g(0.024mmol)，碘化亚铜0.0024g(0.013mmol),THF20mL，甲醇4mL，随后加入2M碳酸钠溶液2.4mL，升温至回流。10h后原料消耗完毕。反应结束，旋干溶剂后，用DCM萃取，之后，用水洗1-2遍，饱和食盐水洗1-2遍，收集有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析，DCM:EA＝10:1，得到淡黄色固体产品,产率:86％,Mp:164-165℃(PE/AcOEt)；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):8.17(s,1H),8.01(t,J＝7.2Hz,1H),7.22–7.17(m,2H),7.10(dd,J＝13.5,6.1Hz,1H),5.31(s,1H),3.53(m,1H),1.20(s,3H),0.97(s,3H)；13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ(ppm):209.43,159.53(d,J＝249.6Hz),149.42(d,J＝10.2Hz),140.49,137.02,133.70,130.16,129.91,128.32(d,J＝8.5Hz),123.03(d,J＝3.3Hz),119.13(d,J＝12.3Hz),118.02,114.62(d,J＝22.3Hz),70.02,47.58,45.45,40.58,37.98,35.32,30.49,28.05,26.82,22.31,18.54,17.84；IR(KBr,cm-1):3491,3043,2930,2859,1691,1562,1480,1449,1274,1213,1110,1055,930,875,800,758,722；HRMS(ESI)calcdforC25H27FO2[M+H]379.2074；Found379.2074。

实施例6：(3β)-羟基-16-(3-氟苯基)雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮(5d)的合成

取化合物(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮0.50g(1.2mmol)，3-氟苯硼酸0.30g(2.13mmol)，双三苯基膦二氯化钯0.017g(0.024mmol)，碘化亚铜0.0024g(0.013mmol),THF20mL，甲醇4mL，随后加入2M碳酸钠溶液2.4mL，升温至回流。10h后原料消耗完毕。反应结束，旋干溶剂后，用DCM萃取，之后，用水洗1-2遍，饱和食盐水洗1-2遍，收集有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析，DCM:EA＝10:1，得到淡黄色固体产品,产率:84％,Mp:190-191℃(PE/AcOEt)；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):7.97(s,1H),7.55(t,J＝7.7Hz,2H),7.27(dd,J＝14.3,7.8Hz,1H),6.93(t,J＝7.6Hz,1H),5.32(s,1H),3.53(m,1H),1.19(s,3H),0.97(s,3H)；13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ(ppm):207.90,161.88(d,J＝245.6Hz),146.03,140.69,136.62,134.57(d,J＝2.1Hz),133.75,133.32,128.89(d,J＝8.1Hz),121.69(d,J＝2.8Hz),117.90,114.04(d,J＝21.3Hz),112.96(d,J＝22.8Hz),70.05,47.64,46.57,40.63,38.02,35.35,30.56,28.13,26.88,22.32,18.56,17.84；IR(KBr,cm-1):3500,3075,2928,2857,1679,1577,1426,1340,1263,1185,1058,886,790,681；HRMS(ESI)calcdforC25H27FO2[M+H]379.2074；Found379.2074。

实施例7：(3β)-羟基-16-(4-氟-3-吡啶)雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮(5e)的合成

取化合物(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮0.50g(1.2mmol)，4-氟-3-吡啶硼酸0.30g(2.13mmol)，双三苯基膦二氯化钯0.017g(0.024mmol)，碘化亚铜0.0024g(0.013mmol),THF20mL，甲醇4mL，随后加入2M碳酸钠溶液2.4mL，升温至回流。10h后原料消耗完毕。反应结束，旋干溶剂后，用DCM萃取，之后，用水洗1-2遍，饱和食盐水洗1-2遍，收集有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析，DCM:EA＝10:1，得到淡黄色固体产品,产率:90％,Mp:180-181℃(PE/AcOEt)；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):8.56(s,1H),8.26(t,J＝7.2Hz,1H),8.02(s,1H),6.89(d,J＝6.6Hz,1H),5.32(s,1H),3.54(m,1H),1.20(s,3H),0.98(s,3H)；13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ(ppm):207.92,162.11(d,J＝238.5Hz),145.84,145.04(d,J＝14.7Hz),140.67,138.64(d,J＝8.0Hz),136.54,134.65,131.76(d,J＝2.9Hz),125.34,117.74,108.24(d,J＝37.3Hz),70.00,47.61,46.19,40.57,38.05,35.31,30.49,28.17,26.78,22.25,18.56,17.79；IR(KBr,cm-1):3497,2696,2930,2851,2818,1680,1587,1472,1376,1297,1176,1120,1069,1022,928,834,744,670；HRMS(ESI)calcdforC24H26FNO2[M+H]380.2027；Found380.2012。

实施例8：(3β)-羟基-16-(5-嘧啶)雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮(5f)的合成

取化合物(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮0.50g(1.2mmol)，5-嘧啶硼酸0.26g(2.13mmol)，双三苯基膦二氯化钯0.017g(0.024mmol)，碘化亚铜0.0024g(0.013mmol),THF20mL，甲醇4mL，随后加入2M碳酸钠溶液2.4mL，升温至回流。10h后原料消耗完毕。反应结束，旋干溶剂后，用DCM萃取，之后，用水洗1-2遍，饱和食盐水洗1-2遍，收集有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析，DCM:EA＝10:1，得到淡黄色固体产品,产率:87％,Mp:203-204℃(PE/AcOEt)；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):9.11(s,2H),9.07(s,1H),8.13(s,1H),5.32(s,1H),3.59–3.50(m,1H),1.21(s,3H),0.98(s,3H)；13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ(ppm):207.56,156.63,153.76,146.98,140.77,136.67,136.43,129.91,125.53,117.52,69.89,47.69,46.10,40.54,38.16,35.32,30.46,28.26,26.73,22.19,18.60,17.75；IR(KBr,cm-1):3487,3034,2940,2861,2799,1701,1644,1558,1406,1299,1144,1009,932,721；HRMS(ESI)calcdforC23H26N2O2[M+H]363.2073；Found363.2068。

实施例9：(3β)-羟基-16-(3-三氟甲基苯基)雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮(5g)的合成

取化合物(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮0.50g(1.2mmol)，3-三氟甲基苯硼酸0.40g(2.13mmol)，双三苯基膦二氯化钯0.017g(0.024mmol)，碘化亚铜0.0024g(0.013mmol),THF20mL，甲醇4mL，随后加入2M碳酸钠溶液2.4mL，升温至回流。10h后原料消耗完毕。反应结束，旋干溶剂后，用DCM萃取，之后，用水洗1-2遍，饱和食盐水洗1-2遍，收集有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析，DCM:EA＝10:1，得到淡黄色固体产品,产率:93％,Mp:195-196℃(PE/AcOEt)；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):8.04(s,1H),8.02(s,1H),7.99(d,J＝7.8Hz,1H),7.49(d,J＝7.7Hz,1H),7.43(t,J＝7.8Hz,1H),5.32(s,1H),3.56-3.52(m,1H),1.20(s,3H),0.98(s,3H)；13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ(ppm):207.94,146.41,140.64,136.56,134.31(d,J＝8.5Hz),131.99,129.87(q,J＝32.6Hz),129.28,127.91,123.98,123.69(q,J＝3.7Hz),123.07(q,J＝271.5Hz),122.74(q,J＝3.5Hz),117.83,70.02,47.63,46.50,40.58,38.03,35.31,30.50,28.17,26.82,22.28,18.56,17.81；IR(KBr,cm-1):3489,3032,2939,2894,2827,1680,1587,1475,1419,1322,1123,1006,805；HRMS(ESI)calcdforC26H27F3O2[M+H]429.2042；Found429.2039。

实施例10：(3β)-羟基-16-(5-甲氧基-3-吡啶)雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮(5h)的合成

取化合物(3β)-羟基-16-碘-雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮0.50g(1.2mmol)，5-甲氧基吡啶-3-硼酸0.36g(2.13mmol)，双三苯基膦二氯化钯0.017g(0.024mmol)，碘化亚铜0.0024g(0.013mmol),THF20mL，甲醇4mL，随后加入2M碳酸钠溶液2.4mL，升温至回流。10h后原料消耗完毕。反应结束，旋干溶剂后，用DCM萃取，之后，用水洗1-2遍，饱和食盐水洗1-2遍，收集有机相，无水硫酸钠干燥。柱层析，DCM:EA＝10:1，得到深黄色固体产品,产率:74％,Mp:193-194℃(PE/AcOEt)；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ(ppm):8.49(s,1H),8.16(s,1H),8.07(s,1H),7.79(s,1H),5.32(s,1H),3.82(s,3H),3.57-3.50(m,1H),1.20(s,3H),0.97(s,3H)；13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ(ppm):208.27,154.50,146.50,140.67,139.05,136.60,136.17,134.84,132.37,127.83,117.76,117.45,69.95,54.57,47.64,46.32,40.57,38.07,35.32,30.48,28.19,26.80,22.26,18.57,17.80；IR(KBr,cm-1):3488,2930,2872,1686,1610,1521,1450,1370,1296,1119,1008,940；HRMS(ESI)calcdforC25H29NO3[M+H]392.2226；Found392.2229。

从CH2Cl2溶剂中得到5a的晶体和从CHCl3溶剂中得到5b的晶体，通过X-射线单晶衍射进行表征，晶体数据信息列于表2中。晶体结构进一步验证了目标化合物的结构，并且可以看出甾体8(14)位上的双键的存在。

CCDC935129

化合物5a的分子结构(含CH2Cl2)

化合物5b的分子结构(含CHCl3)

表2化合物5a和5b的晶体参数

实施例11：抗癌活性的测试

所合成化合物5a-h对A549人肺癌细胞，SKOV3人卵巢癌细胞，MKN45人胃癌细胞和MDA-MB-435人乳腺癌高转移细胞体外增殖的抑制作用进行了测试。

测试结果表明所合成化合物5a-h对A549人肺癌细胞，SKOV3人卵巢癌细胞，MKN45人胃癌细胞和MDA-MB-435人乳腺癌高转移细胞等都具有抑制作用，所有化合物对SKOV3人卵巢癌细胞抑制作用优于对其它三类人癌细胞。而芳基上具有氟取代基的化合物5c,5d,5e和5g抑制效果最好。

表3化合物5a-h对人癌细胞株体外增殖的抑制作用(半数抑制浓度)a

a实验结果取八次实验数据平均值±标准偏差；

bA549:人肺癌细胞,SKOV3:人卵巢癌细胞,MKN-45:人胃癌细胞；MDA-MB-435:人乳腺癌高转移细胞。

3β-羟基-16-芳基雄甾-5(6),8(14),15(16)-三烯-17-酮的合成方法专利购买费用说明