专利摘要
提供样品收集管及其制备方法。考虑的收集管包括具有布置在其中的分离剂物质的管。在一些方面，分离剂物质优选在辐射或热灭菌过程中保持预定的流动性，并且可以随后在暴露于UV光或其它适当来源时聚合。
权利要求
1.样品收集管，其包括：
具有腔的管；
可聚合组合物，所述可聚合组合物具有1.00-1.09g/cm
其中所述可聚合组合物被布置在所述腔内，并且包括：
低聚物；
光引发剂，所述光引发剂以小于所述可聚合组合物的3wt％的浓度存在；
稳定剂；和
生育酚，所述生育酚以所述可聚合组合物的大于75mM且小于200mM的浓度存在；并且
其中所述可聚合组合物能够在小于20kGy的剂量下通过辐射灭菌而无固化，同时保持1.00-1.09g/cm
2.根据权利要求1所述的样品收集管，其中所述可聚合组合物进一步被设置成使得其能够耐受小于20kGy剂量的辐射灭菌和少于2小时时间的、灭菌后的热，同时保持1.00-1.09g/cm
3.根据权利要求1所述的样品收集管，其中所述可聚合组合物是通过UV固化可聚合成聚合物的，所述聚合物选自：丙烯酸酯聚合物、甲基丙烯酸酯聚合物、环氧聚合物、聚氨酯和硫醇-烯聚合物。
4.根据权利要求1所述的样品收集管，其中所述低聚物包括含有丙烯酸酯的低聚物。
5.根据权利要求1所述的样品收集管，其中所述低聚物包括含有甲基丙烯酸酯的低聚物。
6.根据权利要求1所述的样品收集管，其中所述可聚合组合物进一步包括包含末端环氧基的聚合物、包含侧部环氧基的聚合物、环氧-聚氨酯、环氧-聚酯、表氯醇、和多羟基多元醇中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的样品收集管，其中所述可聚合组合物进一步包括包含末端或侧部异氰酸酯基中的至少一种的聚合物、和包含至少两个羟基的聚合物中的至少一种。
8.根据权利要求1所述的样品收集管，其中所述可聚合组合物进一步包括脂肪族二硫醇、芳香族二硫醇、聚合聚硫醇、丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、烯基和环烯基中的至少一种。
9.根据权利要求1所述的样品收集管，其中所述可聚合组合物进一步包括光抑制剂。
10.根据权利要求1所述的样品收集管，其中所述光引发剂选自氧化膦光引发剂、酮系光引发剂和苯偶姻醚光引发剂。
11.根据权利要求1所述的样品收集管，其中所述辐射包括γ射线辐射和电子束辐射中的至少一种。
12.根据权利要求1所述的样品收集管，其中所述可聚合组合物是经少于60秒的时间可UV固化至肖氏D硬度标度上至少10的硬度的。
13.根据权利要求1所述的样品收集管，其中：
所述光引发剂以小于所述可聚合组合物的2wt％的浓度存在；并且
其中所述可聚合组合物进一步被设置成使得其能够耐受小于20kGy剂量的辐射灭菌和少于2小时时间的、灭菌后的热，同时保持1.00-1.09g/cm
14.根据权利要求13所述的样品收集管，其中所述可聚合组合物是通过UV固化可聚合成聚合物的，所述聚合物选自：丙烯酸酯聚合物、甲基丙烯酸酯聚合物、环氧聚合物、聚氨酯和硫醇-烯聚合物。
15.根据权利要求13所述的样品收集管，其中所述低聚物包括含有丙烯酸酯的低聚物。
16.根据权利要求13所述的样品收集管，其中所述低聚物包括含有甲基丙烯酸酯的低聚物。
17.根据权利要求13所述的样品收集管，其中所述可聚合组合物进一步包括包含末端环氧基的聚合物、包含侧部环氧基的聚合物、环氧-聚氨酯、环氧-聚酯、表氯醇、和多羟基多元醇中的至少一种。
18.根据权利要求13所述的样品收集管，其中所述可聚合组合物进一步包括包含末端或侧部异氰酸酯基中的至少一种的聚合物、和包含至少两个羟基的聚合物中的至少一种。
19.根据权利要求13所述的样品收集管，其中所述可聚合组合物进一步包括脂肪族二硫醇、芳香族二硫醇、聚合聚硫醇、丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、烯基和环烯基中的至少一种。
20.根据权利要求13所述的样品收集管，其中所述可聚合组合物进一步包括光抑制剂。
21.根据权利要求13所述的样品收集管，其中所述光引发剂选自氧化膦光引发剂、酮系光引发剂和苯偶姻醚光引发剂。
22.根据权利要求13所述的样品收集管，其中所述辐射包括γ射线辐射和电子束辐射中的至少一种。
23.根据权利要求13所述的样品收集管，其中所述可聚合组合物是经少于60秒的时间可UV固化至肖氏D硬度标度上至少10的硬度的。
24.根据权利要求1所述的样品收集管，其中所述浓度的生育酚不干扰UV固化过程中产生的自由基。
25.根据权利要求1所述的样品收集管，其中所述可聚合组合物进一步包括环氧-硅氧烷树脂。
26.根据权利要求1所述的样品收集管，其中所述可聚合组合物进一步包括多羟基二醇。
说明书
本申请要求2014年10月28日提交的欧洲专利申请序号14190681.8的优先权。该参考文献以及所有其它外来参考文献的全部内容通过引用被并入本文。若并入的参考文献中的术语的定义或使用与本文所提供的该术语的定义不一致或矛盾，本文所提供的该术语的定义适用，而该术语在参考文献中的定义不适用。
发明领域
本发明的领域是样品分离技术。
血液样品的分析通常需要将全血分离成两个或更多个部分，例如，血清部分和含细胞部分。本领域公知，全血分离可以经由离心进行——通过将全血置于血液收集管中，将该管置于离心机中，和使血液旋转下降(spin down)。
不幸地，一旦血液分离，全血的部分可以再混合，通过扩散、搅动、样品提取、或其它不期望的相互作用而导致该部分的污染。理想地，两部分应保持分离，以确保在取用期望的部分时不发生污染。
为了克服上述问题，在提供布置在管底部中的分离剂凝胶方面已提出尝试。这些分离剂凝胶旨在协助保持分析物稳定性，减少体力劳动(移液至第二管)，和允许延迟处理——可能由于需要将样本从抽取位置转移至测试设施。凝胶的一些功能和性能特性一般包括以下：(1)凝胶性质防止在应用前流动，从而消除抽血过程中回流可能性；(2)凝胶具有在细胞与血清/血浆之间的密度值(约1.04比重)；(3)凝胶是触变的(在普通临床实验室方案下，离心机中的剪切稀化(shear thins))；(4)凝胶在离心过程中液化并流过血细胞和蛋白；和(5)液化的凝胶在离心后在细胞与血清之间的层处重新胶凝，并附着至管壁。此外，凝胶的组分总体上不应干扰在临床实验室中使用的血液组分或测验。
不幸地，已知的分离剂凝胶有一个或多个直接和间接的缺点，例如包括：干扰(已知某些测验是存在问题的)；因渗透性导致的分析物漂移、凝胶表面之中或之上的细胞截留；分析仪探针或电泳凝胶的物理污染；由重复旋转造成的不准确；等分需求(具有随之而来的体力劳动成本和重新标记错误的可能性)；不完全吸出(aspiration)，其对标准化产生负面影响并造成浪费；和存储/运输问题，如凝胶移位(dislodging)、冷冻-解冻问题、和不能再混合样品与软凝胶屏障。
为了克服与分离剂凝胶相关的问题的其中一些，已经提出尝试以试图提供确保有效保护全血的分离部分以免遭不期望的样品相互作用所带来的污染的、用于全血分离的组合物和方法。例如，申请人已经获得此前针对光聚合物血清分离剂和方法的工作的几项专利(例如，美国专利号7,674,388、7,673,758、7,775,962、7,971,730、7,780,861、8,206,638、8,282,540)。光聚合物血清分离剂可有优势在细胞和血清或血浆之间提供固体界面(当光聚合物凝胶聚合时)，该固体界面允许样品的完全吸出。此外，包含一些光聚合物分离剂凝胶的管(在聚合形成固体之前)可以在反复冷冻-解冻循环的情况下被运输、冷藏或冷冻。更进一步，管可以进行混合而不破坏屏障，以确保测试部分的一致取样(例如，当管被搅动时，血液不会再混合)，管不含软凝胶物质(聚合后)，该软凝胶物质可以阻塞分析器探针或移液器尖端，或与测试部分接触从而干扰易感的(susceptible)实验室测验方法(例如，电泳)。
不幸地，一些已知的分离剂组合物和方法因各种原因是有问题的，包括可光固化组合物的高成本、对配制触变组合物的需求、放热聚合反应中产生的可影响分析物的热、不能通过辐射灭菌同时保持分离剂组合物的流动性以进行随后的UV固化(例如，在已灭菌的组合物被装载在样品收集管中之后)、以及体积相关性UV光暴露要求。
因此，仍需要改进的分离技术。
本发明主题提供了设备、组合物、系统和方法，这些总体上试图通过提供样品收集管来解决上述问题，该样品收集管包括：(i)具有腔的管、和(ii)布置在该腔内的复合分离剂物质，其中分离剂物质包含凝胶组分层材料和可光固化的密封剂组分层材料。更具体地，凝胶组分层材料可包括被配制以在搅拌或振荡时变成液体的触变分离剂凝胶，并且可光固化的密封剂组分层材料可包括光聚合物密封剂。凝胶组分层材料和可光固化的密封剂组分层材料可以是分开的层(例如，在辐射灭菌前、离心前、固化前、在辐射灭菌后、离心后、固化后、辐射灭菌之前和之后、离心之前和之后、固化之前和之后)。另外或可选地，凝胶组分层材料和可光固化的密封剂组分层材料可构成混合物。
可光固化的密封剂组分可以任选地是抗触变的。另外或可选地，可光固化的密封剂组分可被配制以在通过适当能源(例如，UV光(弧光灯、微波能灯泡(microwave powerbulbs)、LED))触发时在10分钟内聚合至肖氏00硬度标度上至少1的硬度。
存在很多因素可影响本发明主题的可光固化的密封剂和可光固化的分离剂物质的固化。适当的光源可以发射具有在5-100W/cm
从另一个角度来看，可光固化的密封剂组分可包括促进剂，以允许当通过适当能源触发时，在10分钟内聚合至肖氏00硬度标度上的至少1。另外或可选地，可光固化的密封剂组分可以被配制以当通过适当能源触发时在10分钟内聚合至肖氏A硬度标度和肖氏D硬度标度中的至少一种上的至少10。从又一个角度来看，考虑在通过适当能源触发的聚合之后，可光固化的密封剂组分对于探针可以是固体。
本发明主题还提供设备、系统和方法，其中收集管包括分离剂物质，该分离剂物质可以使分析物水平(例如，钾水平和葡萄糖水平)长期保持在可接受的阈值以内。在一个实施方式中，钾水平稳定在离心前初始水平的10％以内，并且葡萄糖水平稳定在5％内。从另一个角度来看，凝胶组分和可光固化的密封剂组分中的一者或两者(例如，整个分离剂物质)可以被配制以使布置在管中的样品的钾水平保持在初始钾水平的25％以内、15％以内、10％以内、或者甚至5％以内至少四天。还考虑凝胶组分和可光固化的密封剂组分中的一者或两者可以被配制以使布置在管中的样品的葡萄糖水平保持在初始钾水平的25％以内、15％以内、10％以内、或者甚至5％以内至少四天，更优选至少五天。
另外或可选地，分离剂物质可以有利地与全血生物相容，并且被配制以具有介于全血的血清/血浆部分和全血的含细胞部分的平均密度之间的密度(例如，约1.04g g/cm
从另一个角度来看，本发明主题包括制备样品收集管的方法。本文所述方法中考虑的步骤可以包括将可光固化的密封剂组分层材料布置在管的腔中。另外的步骤可以包括将凝胶分离剂组分层材料布置在管的腔中。上述步骤可以任何适当的顺序完成，以使凝胶组分可以被布置在可光固化的密封剂组分上方或下方。在一些方法中，可光固化的密封剂组分层材料被沉积在凝胶组分层材料之前/之下，并且被配置以在固化后在凝胶组分层材料上方形成固体密封层。在一些考虑的方法中，首先将凝胶组分置于管中，然后是可光固化的密封剂组分。离心后，密封剂组分可以上升到凝胶组分上方而形成密封层，该密封层充当凝胶组分与血浆、血清或其它样品部分之间的屏障。应当理解，凝胶组分和可光固化的密封剂组分构成如上所述的本发明主题的复合分离剂物质。
一些考虑的方法可以另外包括将样品(例如，血液)布置在管的腔中，和将带有布置在其中的复合分离剂物质和样品的样品收集管离心。另外或可选地，样品收集管可以暴露于UV光(例如，在离心过程中或离心后)，以使可光固化的密封剂组分凝固。另外或可选地，在全血被布置在管中的情况下，本发明主题的方法可以包括，在将管暴露于UV光或其它适当能源而引起可光固化的密封剂组分聚合之后，将全血的含细胞部分与血清部分分离(例如，通过移液管以物理手段移除一个部分)。
一些考虑方法的其它任选步骤包括在将复合分离剂物质布置于收集管中之前或之后将收集管灭菌，和将真空引入管腔内以促进预定体积的液体吸出，等等。灭菌步骤可以以任何适当的方式进行，包括例如γ辐射、电子束辐射，或通过暴露于热(例如，至至少250摄氏度)而将组分灭菌。引入真空的步骤可以以任何适当的方式进行。例如，可以使用抽空-封闭装置来至少部分地抽空管的内部和将阻塞物施加至管的开口。另外或可选地，可以利用任何适当的泵通过使腔体减压而将真空引入收集管中。
应当理解，本发明主题的样品收集管可以用于包括例如全血在内的任何适当样品的分部分离(fractionation)。适当的分离剂物质被配制以具有介于被分离的样品的部分中间的适当密度。例如，当被分离的样品为全血时，分离剂物质可被配制以具有介于全血的血清部分和全血的含细胞部分的平均密度之间的密度，并且可在全血中流动。一旦分离剂物质将被分离的样品的部分分开，可通过聚合来硬化可光固化的密封剂组分/层以防止分离的部分混合。
其它组分可以有利地包括在本发明主题的管中，包括例如抗凝剂(例如，在样品包含血浆的情况下)或凝块活化剂(例如，在样品包含血清的情况下)。
本发明主题还提供了提供可聚合组合物的设备、组合物、系统和方法，该可聚合组合物是可通过辐射或施热灭菌的，同时保持预定流动性，该预定流动性有效允许组合物在离心力下沉降到全血的细胞除去相和全血的细胞富集相之间的位置。在一些方面，可聚合组合物包括低聚物、光引发剂、稳定剂和抗氧化剂，并且可以被布置在样品收集管的腔内。在管和可聚合组合物通过辐射或热灭菌的情况下，优选以允许组合物随后通过UV固化而聚合的方式来保持组合物的预定流动性。
本发明主题的各种目的、特征、方面和优势将通过以下优选实施方式的详细描述以及附图，变得更加显而易见，附图中相同的编号代表相同的组分。
图1示例了在离心和固化之前和之后带有凝胶分离剂的管和带有复合分离剂的管。
图2示例了包括本发明主题的光聚合物分离剂的分离剂管。
以下论述提供了本发明主题的多个示例实施方式。虽然每个实施方式代表发明要素的一种组合，但考虑本发明主题包括所公开的要素的所有可能的组合。因此，如果一个实施方式包括要素A、B和C，第二个实施方式包括要素B和D，则还考虑本发明主题包括A、B、C或D的其它其余组合——即使没有明确公开。
至少基于以下原因，本发明主题的分离剂物质优于现有分离剂物质：
·能够将可存在于凝胶内的任何细胞截留(cell trapping)与上层测试部分分离。
·减少完全固化(凝固)屏障所需的UV光强度和曝光时间，至少因为所需的可光固化的密封剂组分的体积减少。例如，我们已经将所需时间(在相同的UV光强度下)从超过一分钟减少到10-20秒之间。这种减少具有如下附加益处：降低UV对光敏性颜料的影响、通过减少处理时间来改善工作流程、和减少固化期间的放热产生(其可能影响某些血液组分，如酶)。
·允许样品完全吸出样品，而无来自凝胶组分的显著(如有)污染，至少因为凝固的可光固化密封剂组分充当凝胶组分的屏障。
·允许全血的无细胞部分混合和再混合，以确保一致取样。
·防止在软凝胶分离剂通过搅动而被物理手段扰乱(例如在运输或混合过程中)时可能发生的血液再混合。
·允许管的反复冷冻-解冻循环。血清或血浆的冷冻是普通实践，例如为了将来测试或为了符合某些管控要求。在使用凝胶分离剂来分离样品的部分时，分离剂下方的部分一般先于凝胶冷冻，从而膨胀和使凝胶分离剂屏障的形状变形。由于本发明主题的分离剂物质包括可光固化的密封剂组分——该可光固化的密封剂组分被配制以在暴露于适当能源时凝固，显著减少或甚至消除了一般与冷冻和解冻分离剂管相关的问题中的一些或全部。
·可以最小化可光固化的层的体积，从而降低成本。
·可光固化的层不需要是触变性的，因为触变软凝胶被加载到管中的可光固化层上方，并且在使用前不产生流动。这允许具有少量细胞截留的单纯组合物，并消除了对可促进降解血细胞或干扰实验室测验的添加剂的需要。
·降低与将血清或血浆移除至第二管相关的劳动成本。
·降低与将血清或血浆移除至第二管相关的重新标记错误的可能性。
使用可光固化的密封剂的可行性已被证实，该可光固化的密封剂包括：(1)单体和低聚物中的至少一种(例如，其组合(例如，Ebecryl、Cytec))、(2)光引发剂(例如， BDK、 TPO)、和(3)稳定剂(吩噻嗪)。应理解，可以使用任何商业上适当可光固化的密封剂组分。适当可光固化的密封剂组分一般是至少一种凝胶(例如，当添加胶凝剂(例如，DBS或二氧化硅)时)，并且在聚合之前是可流动的(随着全血)，并且可在暴露于适当能源(例如，UV光)时凝固。适当的可光固化的密封剂的实例可以包括MLA(例如，M1L1A1)、MLAI(例如，M1L1A1和吩噻嗪)、MAI(例如，M1A1和吩噻嗪)、LAI(例如，L1A1和吩噻嗪)和LMA(例如，L1M1A1)等。如本文所用，M＝单体(例如，M1，其是来自Sigma-Aldrich目录号407577的丙氧基化三羟甲基丙烷三丙烯酸酯单体)；L＝低聚物(例如，L1＝Ebecryl 230，来自Allnex，此前来自Cytec Industries,Inc.)；A＝光引发剂(例如，A1＝Additol BDK)；I＝稳定剂(例如，吩噻嗪)。参见下表1。LAI(例如，L1、A1和吩噻嗪)可以被包括在一些特别优选的可光固化的密封剂组分中，因为其可以具有1.00-1.09g/cm
适当的可光固化的密封剂的其它实例包括LAIR、LAIE(例如，L1、A1、吩噻嗪和生育酚)和LAIER，其中R＝胶凝剂(例如，DBS、二氧化硅)，并且E＝抗氧化剂和自由基清除剂(例如，维生素E、丁基化羟基甲苯(BHT)、丁基羟基茴香醚(BHA)、胡萝卜素、胆红素、抗坏血酸)中的至少一种。虽然R和E总体上不是必要的，但是每一种均可以给可光固化的密封剂提供有益特征。更具体地，胶凝剂总体上不是可光固化的密封剂的必要组分，因为触变软凝胶可以被加载到管中可光固化层上方，使得在使用之前不产生流动。然而，可期望具有触变密封剂，例如，在期望有密封剂布置在管中软凝胶组分上方的情况下的。此外，自由基清除剂，如具有维生素E活性的化合物(例如生育酚)，尽管并非必要的，可以允许可光固化的密封剂通过辐射(例如，γ、电子束)灭菌而不固化(例如，通过改变密度性质)，而不需要热灭菌以保持有效允许沉降在样品的两个部分之间的流动性。
表1
考虑本发明主题的复合分离剂在可光固化组分和凝胶组分中的一者或两者中可以包括聚合物，如硅油、聚酰胺、烯烃聚合物、聚丙烯酸酯、聚酯及其共聚物、聚硅烷和聚异戊二烯。另外或可选地，复合分离剂可以包括填充剂(例如，二氧化硅、胶乳、其它惰性材料)，以调节分离剂或其组分的密度。另外或可选地，复合分离剂可以包括另外的材料或试剂来实现期望的目的(例如，EDTA(螯合剂)、或肝素、柠檬酸盐、右旋糖(抗凝剂))。
同样地，应当理解，任何适当凝胶组分都可以被布置在本发明主题的管中。适当的凝胶组分包括在离心过程中液化并且其后再胶凝的那些，并且可以包括，例如，在售凝胶(例如，BD SST
图1示例了对照管100A和本发明主题管100B。对照管100A是包括市售的凝胶分离剂110A的样品收集管(例如Vacutainer)。管100B是包括市售的凝胶分离剂110B和可光固化的密封剂120的样品收集管。全血样品125被转移到对照管100A中，并且另一个全血样品130被转移到对照管100B中。离心后，凝胶分离剂110A(包括从细胞富集部分截留的一些细胞)位于管100A中的全血较致密部分125A和全血较不致密部分125B之间。凝胶分离剂110B(包括从细胞富集部分截留的一些细胞)类似地位于全血的较致密与较不致密部分——分别为130A和130B——之间。
有益地，不含胶凝剂或触变改性组分的光密封剂120在管100B中的离心和UV固化每一项之前和之后都是透明的，并且无细胞截留。由于分析物沥滤到测试部分中，细胞截留是不期望的。细胞常附着至软凝胶的上层，如图1所示的110A和110B。然而，可以通过光密封剂120将其与血浆分离。
以下数据显示了与仅使用软凝胶相比时，利用本发明主题的复合分离剂(光凝胶血浆分离剂管)提高的分析物稳定性。
本发明主题的一些样品收集管可以包括管、塞子、和布置在管腔中的分离剂物质，该分离剂物质具有凝胶组分/层和可光固化的密封剂组分/层。收集管可以由适当刚性的材料制成，以支持腔内真空。实例材料包括硬塑料、玻璃或其它类似材料。腔优选具有足够的容积以容纳期望的全血样品或其它液体。一般容积范围为几毫升至10ml或更大。塞子可以充分贴合适配到管中以维持腔内真空。可用于制备本发明主题的收集管的可接受的管的实例包括由Becton、Dickenson and Company(Franklin Lakes，NJ USA 07417)开发的 样本收集产品。
术语“管”被委婉地用于指代具有内腔的容器。尽管优选的实施方式包括管，但应理解，其它具有腔的容器也可用，同时仍落入本发明主题的范围内。例如，考虑收集管可以用能够容纳液体或任选地支持真空的其它容器替代。容器的可选实例包括烧瓶、罐、烧杯、瓶(bottles)、血液收集袋或小瓶(phials)。当本发明的主题被应用于血液收集以外的可选市场时，管以外的容器也具有可用性。
在优选实施方式中，通过如下制备收集管：将复合分离剂布置在管腔中，并将真空引入腔内以备出售。可以优选(例如，出于成本和固化时间目的)将不超过约1ml，或约1g的分离剂物质布置在一般的10ml收集管的腔中。另外或可选地，可以优选将不超过50％，更优选不超过25％，还更优选不超过10％的分离剂物质包括可光固化的密封剂层。考虑在一些实施方式中可以使用其它量的分离剂物质(或其层)，以适配具体的使用情况。例如，较小型的管可需要较少的分离剂物质，而较大型可需要较多，以制成充足的密封屏障。
在一些实施方式中，收集管在销售前被灭菌以符合国际标准化管理(theInternational Organization for Standardization，ISO)协议。例如，可以利用γ辐射(例如，来自钴源(例如，钴60))、利用电子束辐射(例如，来自电子束发生器)、气体(例如，环氧乙烷)，或100至250摄氏度之间或还更高的热将管进行灭菌(优选分离剂物质或其部分无显著聚合)。从另一个角度来看，分离剂物质可以有效允许辐射、气体或热灭菌，而无高于40％的固化，更优选无高于30％的固化，以及允许随后通过UV或其它固化而聚合。任选的真空可被引入，例如通过简单地使管腔体减压——通过使用适当的泵。
考虑所有适当的灭菌时间(例如，少于10分钟、少于5分钟、少于2分钟、5-120秒之间、5-90秒之间)，其中收集管(和分离剂物质)在5-25kGy之间，更一般在10-20kG之间的剂量下进行电子束灭菌。考虑所有适当的灭菌时间(例如，少于10分钟、少于5分钟、少于2分钟、5-120秒之间、5-90秒之间)，其中收集管(和分离剂物质)在5-25kGy之间，更一般在10-20kGy之间的剂量下进行γ灭菌。已观察到，在γ灭菌的情况下，具有较低剂量递送率的较弱源更可能固化化合物。ISO要求的剂量取决于被灭菌对象的生物负载等。所需的辐射时间不仅取决于所使用的灭菌技术，而且例如取决于被灭菌对象的生物负载和辐射剂量(kGy)。
还考虑可以对收集管进行灭菌，并可以向该管添加灭菌后的分离剂物质。另外或可选地，使用者可以在购买后将一种或多种分离剂物质添加到收集管，而不是管内具有预先布置的分离剂物质。
在样品(例如全血)被添加到本发明主题的收集管的情况下，离心可以将全血分离成血清部分和含细胞部分。当分离剂物质的各层(凝胶/可光固化的密封剂)具有介于血清部分和含细胞部分中间的密度时，其可以在离心过程中迁移至这两部分之间，从而使该部分彼此分离。分离剂物质然后可在通过适当能源触发时通过聚合迅速硬化，以在这两部分之间提供固体屏障。
如上所述，适当的光源可以发射具有5-100W/cm
一个示例性适当光源是由Heraeus制造的定制光照箱，其产生具有385nm波长下的最大峰和2.2W/cm
在本发明主题的一些方面中，分离剂管可以配备有(1)可聚合的组合物和触变的凝胶，如图1中所示；或(2)仅可聚合的组合物，如图2所示。如示，样品收集管200包含布置在其中的本发明主题的可聚合组合物210(例如，LAIE)，并且在离心到全血的细胞除去相220和细胞富集相230之间的位置后固化。
可聚合组合物优选包含以下组分中的至少三种：低聚物(L)(例如，含丙烯酸酯的低聚物和含甲基丙烯酸酯的低聚物)、光引发剂(A)、稳定剂(I)以及自由基清除剂和抗氧化剂中的至少一种(E)。
可聚合组合物可以有利地具有有效允许辐射灭菌(例如，γ、电子束)而不损失预定流动性(例如，有效允许组合物在离心力下沉降到样品的两相之间的位置(例如，全血的细胞除去相和细胞富集相))的组合物。
从另一个角度来看，组合物可以有效允许辐射或热灭菌，而不使组合物固化超过40％，更优选不使组合物固化超过30％，以及允许通过UV或其它固化进行随后的聚合。
随后通过UV固化的聚合可以在辐射灭菌发生后数分钟(例如，超过30分钟)、数小时(例如，超过1小时、超过2小时、超过5小时、超过10小时)、数天(超过1天、超过5天、超过10天、超过15天、超过20天、超过25天)、数个月(超过1个月、超过2个月、超过6个月、超过9个月)、或甚至数年(超过1年、超过2年、超过3年、超过5年、甚至更长时间)发生。在一些实施方式中，可聚合组合物可以经受5至35kGy之间(包括5和35kGy)的辐射剂量，更优选10至30kGy之间的辐射剂量(包括10和30kGy)，甚至更优选10至20kGy之间的辐射剂量(包括10和20kGy)，而不损失流动性。从不同的角度来看，可聚合组合物可以经受小于30kGy，更优选小于20kGy，甚至更优选小于17kGy的辐射剂量，从而(1)允许在不损失预定流动性的情况下辐射灭菌，和(2)允许通过UV固化进行随后的聚合。
考虑光引发剂(例如，偶氮二异丁腈、过氧化苯甲酰、樟脑醌、氧化膦光引发剂、酮系光引发剂、苯偶姻醚(benzoin ether)光引发剂)可以以任何适当的浓度存在于可聚合组合物中。在一些优选实施方式中，光引发剂以小于5wt％的浓度，更优选小于2wt％的浓度，甚至更优选小于1.5wt％的浓度存在于组合物中。另外或可选地，本发明主题的可聚合组合物可以包含光抑制剂。
应注意，在所有考虑的可聚合组合物中，自由基清除剂或抗氧化剂不是必要的。然而，在被包括的情况下(例如，为促进保持流动性，通过经由γ束或电子束的辐射灭菌)，考虑自由基清除剂和抗氧化剂中的至少一种(例如生育酚)可以以任何适当的摩尔浓度存在于可聚合组合物中。申请人惊奇地发现，在自由基清除剂如生育酚被包括的情况下，本发明主题的一些组合物(例如LAIE)将在超过3kG辐射剂量下的辐射灭菌期间保持流动性，而一些其它组合物(例如LAI)在相同的辐射剂量下不保持流动性。从另一个角度来看，发现LAI仅在上至约3kG辐射剂量的辐射灭菌期间保持流动性。在一些优选的实施方式中，自由基清除剂和抗氧化剂中的至少一种包括生育酚，并且以至少75mM，更优选至少100mM，甚至更优选至少135mM的摩尔浓度存在于组合物中。因各种原因，较低浓度的生育酚(例如，小于约75mM)不是优选的。例如，具有较低生育酚浓度的分离剂物质只能在较低辐射剂量下保持流动性，这可能不允许根据ISO协议规定的成本有效的灭菌。此外，具有较低生育酚浓度的分离剂物质一般需要较低的光引发剂浓度(例如，小于1wt％))，其总体上需要较长固化时间。
另外或可选地，可聚合组合物可以通过UV固化(例如，在辐射灭菌(γ、电子束)之后)可聚合形成任何适当的聚合物，包括例如丙烯酸酯聚合物、甲基丙烯酸酯聚合物、环氧聚合物、聚氨酯或硫醇-烯聚合物。
从不同的角度来看，本发明主题的可聚合组合物可以包括一种或多种包含末端环氧基的聚合物、包含侧部环氧基的聚合物、环氧-硅氧烷树脂、环氧-聚氨酯、环氧-聚酯、表氯醇、多羟基二醇、多羟基多元醇、包含末端或侧部异氰酸酯基的聚合物、包含至少两个羟基的聚合物、多羟基二醇、多羟基多元醇、脂肪族单体聚硫醇、脂肪族二硫醇、芳香族二硫醇、聚合聚硫醇、丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、烯基和环烯基。当本发明主题的可聚合组合物经历适当的能源(例如，UV能源)时，考虑组合物可以经少于10分钟的时间，更优选少于5分钟的时间，更优选少于60秒的时间，甚至更优选少于20秒的时间固化至肖氏A硬度标度上至少1的硬度(例如，至少10的硬度)。从另一个角度来看，考虑组合物可以在至少10分钟，更优选少于5分钟的时间，更优选少于60秒的时间，甚至更优选小于20秒的时间内固化至肖氏00硬度标度上至少1的硬度(例如，至少10的硬度)。从再另一个角度来看，考虑组合物可以经少于10分钟的时间，更优选少于5分钟的时间，更优选少于60秒的时间，甚至更优选少于20秒的时间固化至肖氏D硬度标度上至少1的硬度(例如，至少10的硬度)。
对差异性地包含低聚物或单体(或两者)、光引发剂、稳定剂、抗氧化剂、密度调节剂或胶凝剂(或两者)的不同候选组合物进行测试，以确定预定流动性是否可以在辐射(电子束或γ)灭菌期间在不同辐射剂量下保持和保持不同时间等。更具体地，组合物的测试关于以下：
a.最终密度——在离心过程中通过全血中的比重和表现测定。一些优选组合物的最终密度在1.04-1.08g/cm
b.干扰实验室测试——通过将结果与BD管中收集的血液所得到的结果比较来测试。当测量结果的平均值在测验CV以内时，推断无干扰。实验室测试比较包括在离心机中使用分离剂和用UV固化的全过程。还对单体和低聚物进行测试——关于将血液留置与固化光聚合物接触上至8天，以检验延迟干扰。
i.综合代谢全套(钠、钾、氯、CO2、肌酸酐、胆红素(直接和总量))、总蛋白、AST、ALT、碱性磷酸酶、葡萄糖、尿素氮、白蛋白)
ii.免疫测验(PSA、睾酮、雌二醇、TSH、甲状腺素(游离T4)、铁蛋白、敏感性CRP)
iii.电泳(血清蛋白电泳和免疫固定(部分定量(5个部分)，副蛋白鉴定)、通过电泳的脂质全套)
iv.脂质(总胆固醇、LDL-c、HDL-c、VLDL-c、Lp(a)、甘油三酯)
v.分子测试(DNA(braf)、外来体RNA(HBB、ACTB、DEFA3)、GAPDH、ITGA2B))
vi.治疗药物监测(阿米卡星(amikacin)、扑米酮(primadone)、利多卡因(lidocaine)、咖啡因(caffeine)、醋氨酚(acetaminophen)、NAP、普鲁卡因胺(procainamide))
vii.血浆中的血小板、红细胞和白细胞计数(微分)，包括血小板向瑞斯托菌素(ristocetin)、胶原蛋白和ADP的聚集。
c.当光聚合物或凝胶分离剂的量减少时，上述i-vii中的一项或多项观察到较少干扰。任一种的组分都具有干扰可能性。当具体分析物被凝胶组分干扰时，可以减少该组分。当具体分析物被光聚合物组分干扰时，可以减少该组分。
d.溶血——通过自动分析仪上的指数、视觉评估和升高钾水平来测量。
e.利用UV灯(弧光灯、微波功率灯泡、LED)的固化时间
i.过度增加抗氧化剂浓度(例如超过500mM的生育酚)对固化时间有不利影响(延长)。为抵消这种影响而增加光引发剂浓度超过约3％在通过灭菌辐射来保存化合物时对抗氧化剂的功能有不利影响。
f.固化时的产热。
g.固化时的收缩
h.通过热或辐射灭菌(电子束和γ，在各种剂量和剂量递送方案下)的能力。
i.对于热灭菌，不需要抗氧化剂，L和M的数种组合满足其它性能要求。
ii.对于通过辐射的灭菌，如果剂量递送迅速(例如通过电子束，而非γ)，给定的组合物更可能发挥作用。
1.在无抗氧化剂的情况下，可以以上至3kGy对LAI进行灭菌。
测试的单体(一些为组合，用于密度调节)包括M1、1,6-己二醇乙氧基化物二丙烯酸酯、聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯、聚(乙二醇)二丙烯酸酯(目录号437441)、聚(乙二醇)二丙烯酸酯(目录号475629)、丙氧基化三羟甲基丙烷三丙烯酸酯、和1,6-己二醇乙氧基化二丙烯酸酯(目录号497134)。在测试的单体中，M1效果最好。不幸的是，包含一种或多种单体(例如M1)的组合物在固化后导致收缩，因此对于用于密封剂组合物而言不被认为是最佳的。然而，考虑组合物可以被改性以例如解决固化速率和产生的温度，从而防止或减少收缩。
测试的低聚物全部都在Ebecryl系列中，并且包括L1-L10(从Cytec获得的不同低聚物)。在测试的低聚物中，与L3-L5和L7相比，L1、L2、L6、L8、L9和L10更适于保持流动性。就例如固化过程中产热较少、收缩较少(如有)、密度、粘度、气泡截留较少以及利用标准血清测试呈现的干扰较少而言，L1表现最佳，而其它低聚物因不符合标准而被舍弃。L8和L9相比于L1对酶产生更大干扰，而L10导致与固化后的材料可见的相互作用。血浆可见地分割到屏障的上层中。
虽然L1在Ebecryl系列的测试低聚物中具有最佳整体性能，但应理解，数种低聚物能够在辐射灭菌期间保持流动性。还应理解，本领域普通技术人员可以进行对例如辐射剂量、灭菌时间或可光固化物质的组分浓度的调整，以允许将各种其它低聚物包含在被配制以在辐射灭菌期间保持流动性的分离剂物质中。
在M1中以1wt％浓度测试的光引发剂包括(偶氮二异丁腈)：254nm；二苯甲酮：254nm；4-(二甲基氨基)二苯甲酮：356nm；4,4'-双(二甲基氨基)二苯甲酮：370nm；4,4'-双(二乙基氨基)二苯甲酮：379nm；和A1：365nm。根据通过所用PET管的透射度，来选择光引发剂的波长。发现A1具有较优性能——利用包括如下的标准：与血液的相容性、固化时间、生热和与低聚物和单体的混溶性。可以使用其它光引发剂中的一些，例如，利用较长的固化时间或不同光源。
对L1中不同浓度(5-8wt％之间，包括5和8wt％)的A1进行测试。发现当存在抗氧化剂时1％±.5％是最佳的。然而，A1的浓度可以增加上至约3％，而不对维生素E的功能产生不利影响。还对L1中不同浓度的Additol TPO(其具有较长波长吸收以匹配选择的UV源)进行测试。当Additol TPO以1％浓度并且L1、I1和维生素E以200-300mM浓度测试时，固化时间在某种程度上优于比A1以1％浓度并且L1、I1和维生素E以200-300mM浓度测试时。
测试的稳定剂是0.1wt％浓度的吩噻嗪。该稳定剂存在于所有样品中。然而，考虑可以使用任何适当浓度的任何适当稳定剂，包括例如在抽空(低O2)气氛中发挥作用的适当稳定剂。
测试的抗氧化剂包括α-生育酚——2mM-500mM、胡萝卜素、胆红素、BHT、BHA、tempo和4-OH-tempo。虽然生育酚、tempo和4-OH-tempo都在15kGy以上剂量下的辐射期间保持流动性(胡萝卜素、胆红素、BHT和BHA未能)，但tempo和4-OH-tempo导致溶血和实验室干扰。然而，Tempo能够在上至37kGy剂量下的辐射期间保持流动性，并且不需要加热步骤。发现生育酚有最佳性能。
测试的密度调节剂包括来自CYTEC的Ebecryl 113。命名为LARID(D＝Ebecryl113，来自Cytec)的物理凝胶制剂被测试，并且显示其具有良好的固化时间，和对大多数实验室测试具有极少或没有干扰。LARID包括：
a.30％L＝EBECRYL 230和70％D
b.其中：
i.1％的(L+D)A1(Additol BDK)；
ii.8.19％的(L+D)R，烟雾硅胶R1(来自Degussa的AEROSIL R805)；和
iii.0.1％的(L+D)I(来自Sigma的吩噻嗪)。
发现LAIRD制剂，因不存在抗氧化剂，不可通过辐射灭菌(同时保持流动性)。
测试的胶凝剂包括烟雾硅胶和DBS(1,3:2,4-二亚苄基山梨糖醇)以及助溶剂NMP(N-甲基吡咯烷酮)。就通过辐射灭菌同时保持流动性而言，DBS表现劣于二氧化硅。在0.6％DBS和1.8％NMP的情况下，L1A1I1体系胶凝。其剪切稀化，并且密度低于BD凝胶。UV固化时间与L1A1I1R1大致相同，并且固化的凝胶能够耐受一轮液氮-热水测试，这意味着固化的凝胶可以耐受多轮冷冻-解冻循环。
实施例
提供以下实验数据以示例性地说明本文所呈现的本发明主题的不同方面。更具体地，该数据说明了指定浓度的生育酚和Additol BDK在指定辐射剂量下的辐射灭菌后保持组合物流动性(允许离心后沉降在全血的两相之间)中的惊人效果。如示，包含低聚物(EBECRYL 230)、光引发剂、Additol BDK——浓度小于2wt％和自由基清除剂(生育酚，浓度为至少75mM)的组合物在剂量小于20kGy的辐射灭菌(γ或电子束)后意想不到地保持流动性。当较低浓度的生育酚或光引发剂存在的情况下，可以调整辐射方案(例如，以需要较高的剂量率(电子束)、灭菌后的热、和较低的剂量(kGy)、较长的固化时间)。在存在量低于约60mM生育酚的情况下，总体上观察到可递送的总剂量较低，使得灭菌方案不可行。相比之下，缺少自由基清除剂的组合物、和光引发剂浓度大于3wt％(例如，大于5wt％)的组合物在辐射灭菌后不能保持流动性。
如本文所示，本发明主题的一些方面的技术效果是，密封剂组合物中包括的适当浓度范围内(例如，75-200mM之间、75-150mM之间、100-150mM之间、100-250mM之间、125-350mM之间)的生育酚可以(1)清除或干扰辐射(例如，电子束或γ)灭菌过程中产生的自由基，和(2)不清除或干扰UV引起的聚合过程中产生的自由基。从不同的角度来看，生育酚必须以一定数量存在，该数量在电子束或γ灭菌过程中产生自由基时有效防止失控聚合(runaway polymerization)，但不在UV或其它适当能源存在时有效防止聚合。
在本发明主题的一些实施方式中，分离剂组合物中包括两种类型的自由基清除剂。第一种自由基清除剂(例如E)可以对通过电子束或γ辐射产生的、触发聚合的自由基敏感。第二种自由基清除剂(例如I)可以对通过光引发剂产生的、触发聚合的自由基敏感。因此，尽管不希望受任何具体理论约束或限制本发明主题的范围，但本发明主题一些方面的技术效果是，E(例如，生育酚)可以用于在辐射诱导的自由基形成存在时保持L(低聚物)硬化所需的A(光引发剂)和I(稳定剂)之间的适宜平衡。换言之，如果I量的增加适于在辐射灭菌(3kG以上)期间清除自由基，则组合物中的I将压制(overwhelm)A，并且组合物将不在暴露于UV能源后固化。本发明主题的组合物可以包含较低量的I，其允许组合物在暴露于UV能源后由于E的存在而固化/硬化。从另一个角度来看，E可以被认为是牺牲性抗氧化剂，其可以被A引起的聚合反应摒弃，并且不干扰A引起的聚合反应。
尽管不希望受任何具体理论约束，但也考虑在一些实施方式中，稳定剂I可以不是实现辐射灭菌和单独的UV固化所必需的。实验表明，LAI在通过辐射灭菌时不保持流动性。然而，考虑LAE组合物可以在辐射灭菌期间保持流动性，以允许随后的UV固化——在包含的E浓度不有效消耗A生成的自由基，但有效消耗辐射灭菌期间产生的自由基时。
虽然上述数据基于L为L1，但应理解，预期其它低聚物(例如，含丙烯酸酯的低聚物和含甲基丙烯酸酯的低聚物)由于其相似化学组成和在自由基聚合中的用途会代替L1发挥作用。类似地，虽然上述数据基于A为A1(Additol BDK)，但预期其它光引发剂由于其在暴露于光时分解成自由基的能力以及促进聚合反应的能力会代替A1发挥作用(例如，氧化膦光引发剂，酮系光引发剂和苯偶姻醚光引发剂)。
另外或可选地，可以使用其它稳定剂来代替吩噻嗪(例如氢醌)，因为预期其会类似地延长组合物的储存和保质期。预期其它自由基清除剂也会代替生育酚发挥作用；然而，测试的其它自由基清除剂(例如，BHA、BHT、胡萝卜素、抗坏血酸、胆红素，没食子酸和tempo硝基氧(tempo nitroxide))显示干扰一些实验室测试。尽管如此，如果所用测试类型限于具体临床实验室测试，则可以使用这些清除剂。例如，发现某些抗氧化剂干扰一些免疫测验的测量，但不干扰分子测试。
基于本文提供的信息，考虑本领域技术人员将能够调整辐射或其它参数，使得具有不同组分及其浓度的分离剂物质的流动性在辐射灭菌期间可以被保持，并使得该物质可以随后被UV固化。例如，PHOSITA应理解，给定组合物在剂量迅速递送(例如，电子束vsγ)的辐射灭菌期间更可能保持流动性。此外，PHOSITA应理解，增加抗氧化剂浓度(例如，500m以上)延长固化时间，并且为抵消这种效果而增加光引发剂浓度(例如，3％以上)在通过灭菌辐射保存分离剂物质时对于抗氧化剂的功能有不利影响。
除非上下文相反限定，本文所述的所有范围都应被解释为包括其端点，并且开放式范围应被解释为仅包括商业上可实践的值。类似地，所有数值列举都应被认为包含中间值，除非上下文相反限定。本文描述的所有方法都可以以任何适当的顺序进行，除非本文另有说明或者上下文明显冲突。关于本文某些实施方式提供的任何和所有实例或者示例性语言(例如“如”)的使用仅仅旨在更好地示例本发明，而不表示对其它主张的发明的范围的限制。说明书中的语言不应被理解为表示任何未要求的要素对于本发明实践是必需的。
如本说明书和贯穿所附权利要求书所用，“一个”、“一种”和“该/所述”的含义包括复数指代，除非上下文明确另有规定。此外，如本说明书中所用，“在……中”的含义包括“在……中”和“在……上”，除非上下文明确另有规定。
本公开的发明的可选要素或实施方式的分组不应被解释为限制。各组成员可以被单独涉及和主张，或与组中的其它成员或本文中找到的其它要素的任意组合被涉及和主张。出于方便和/或专利性的原因，组中的一个或多个成员可以被纳入组中或从组中删除。当任何这种纳入或删除发生时，认为说明书包含改动后的组，从而满足所附权利要求中采用的所有马库什群组的书面描述。
对于本领域的技术人员来说应该显而易见的是，除了已经描述的那些改动之外可能有远远更多的改动，而没有背离本发明思路。因此，在所附权利要求的精神之内，本发明的主题不受限制。而且，在解释说明书和权利要求时，所有术语都应以符合上下文的尽可能最宽泛的方式做出解释。具体来说，术语“包括”和“包含”应被解释为以非排除式方式谈及要素、组分、或步骤，表明谈及的要素、组分、或步骤可与未明确谈及的其它要素、组分、或步骤一起存在、应用或组合。在说明书、权利要求书谈及选自A、B、C……和N的事物中的至少一种的情况下，该内容应被解释为只要求该组中的一个要素，而非A加N，或者B加N等。
用于血液收集管的分离剂专利购买费用说明
Q：办理专利转让的流程及所需资料
A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。
1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。
2：按规定缴纳著录项目变更手续费。
3：同时提交相关证明文件原件。
4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。
Q:专利著录项目变更费用如何缴交
A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式
Q：专利转让变更，多久能出结果
A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。
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