专利摘要

本发明公开了一种酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法，该方法以酸枣仁为原料，原料经低级醇提取浓缩，提取后液油水分离；水液非极性大比表面积大孔树脂选择性吸附酸枣仁总皂苷，洗脱收集酸枣仁总皂苷；在酸枣仁总皂苷中加入β‑葡萄糖甙酶进行酶转化结构修饰，半合成酸枣仁皂苷B，提高总皂苷中酸枣仁皂苷B含量；所得转化产物经正相硅胶层析或反向柱层析得到高纯度酸枣仁皂苷B；取酸枣仁皂苷B、辅料卵磷脂、肉豆蔻酸异丙酯、正丙醇混合制成酸枣仁皂苷B脂质体微乳，本方法克服现有酸枣仁皂苷B提取分离技术收率低、纯度低等弊端；提高了酸枣仁皂苷B的得率，微乳制剂的使用更有利于人体充分吸收，提高生物利用度。

权利要求

1.一种酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）以酸枣仁为原料，粉碎后采用质量浓度50-70%的甲醇溶液或乙醇溶液热回流提取2-3次，提取温度80-85℃，每次提取时间1-2h，过滤，合并提取液，减压浓缩回收有机溶剂，得酸枣仁提取物；

（2）在步骤（1）酸枣仁提取物中加入其体积2-3倍的水，得到提取物混悬液，再加入提取物混悬液质量5-10%的氯化钠，加热搅拌溶解后，将溶液置于1-3℃下静置24h，弃油层得到澄清水层液；

（3）将步骤（3）中水层液经过大孔吸附树脂柱吸附酸枣仁总皂苷，上样流出液为盐类和杂质，水洗树脂柱到流出液为无色，然后用体积浓度70-75%的乙醇溶液解析酸枣仁总皂苷，解析流速1-1.5柱体积/小时，收集洗脱液，回收乙醇浓缩干燥得酸枣仁总皂苷；

（4）将步骤（3）中酸枣仁总皂苷10-12g、N-乙酰葡萄糖胺10-15g、β-葡萄糖甙酶20-50μg放入反应釜中，加纯水200mL，混匀后用冰乙酸调节pH值为5.5-6；然后在氮气保护、50-60℃下密闭反应6-10h，进行酸枣仁皂苷B的半合成，反应结束后升高温度到100℃，灭酶10min，倒出反应液；

（5）用步骤（4）反应液体积1-2倍的正丁醇萃取反应液2-3次，收集合并正丁醇层，旋蒸回收正丁醇，得酶转化反应产物；

（6）采用200-400目硅胶和氯仿湿法装柱，取步骤（5）中酶转化反应产物干法上样，采用氯仿-甲醇-水溶液洗脱，氯仿-甲醇-水溶液是氯仿:甲醇:水按体积比7-5:1.2-1:0.2-0.1的比例混合制得，收集含酸枣仁皂苷B的洗脱液，浓缩回收有机溶剂，浓缩物用丙酮-甲醇溶液结晶，干燥得酸枣仁皂苷B；

（7）将步骤（6）酸枣仁皂苷B制备成质量浓度为15%-25%的酸枣仁皂苷B水溶液，按以下质量比称取：酸枣仁皂苷水溶液10%-15%、肉豆蔻酸异丙酯34-38%、正丙醇22-26%、卵磷脂27-31%；先将卵磷脂用正丙醇溶解，再加入肉豆蔻酸异丙酯，搅拌均匀后，加入酸枣仁皂苷B水溶液，边滴加边搅拌，添加完后再搅拌1小时，制得酸枣仁皂苷B脂质体微乳；

所述大孔吸附树脂型号为ADS-1600。

2.根据权利要求1所述的酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法，其特征在于：β-葡萄糖甙酶酶活300U/g。

3.根据权利要求1所述的酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法，其特征在于，步骤（6）替换为：将步骤（5）中酶转化反应产物用水溶解成上样液，采用填料SMB MCI GEL湿法装柱，纯水平衡后上样，梯度洗脱反相层析，洗脱剂为甲醇水溶液，第一梯度洗脱剂甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为30-40:70-60，洗脱杂质，第二梯度甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为50-60:50-40，收集洗脱液，浓缩，浓缩物用丙酮-甲醇溶液结晶，干燥得酸枣仁皂苷B。

4.根据权利要求1或3所述的酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法，其特征在于：丙酮-甲醇溶液是丙酮和甲醇按体积比5-8:1-1.5的比例混合制得。

说明书

技术领域

本发明涉及一种酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法。

背景技术

酸枣仁（Semen Ziziphi Spinosae）是鼠李科（Rhamnaceae）植物酸枣（Ziziphous jujuba）的干燥成熟种子，秋末冬初采收成熟果实，除去果肉及核壳，收集种子，晒干制得，主产于西北、东北、华北许多省区及南方的一些地区，是中医医学中常用的镇静催眠药物，在我国具有悠久的使用历史。酸枣仁功能主治为养肝，宁心，安神，敛汗；治虚烦不眠，惊悸怔忡，烦渴，虚汗。

酸枣仁主要化学成分为酸枣仁皂苷，是其镇静催眠的主要成分，酸枣仁皂苷药代动力学研究表明酸枣仁在体内代谢，首先酸枣仁皂苷A转化为酸枣仁皂苷B、酸枣仁皂苷B进一步转化为甙元而发挥镇静安神作用。酸枣仁皂苷 B，英文名是Jujuboside B，是一种达玛烷型三萜皂苷类化合物，化学式为C52H84O21，分子量1045.22；酸枣仁皂苷B对中枢神经系统及其递质、调质、受体和电生理等有着明确的作用。

酸枣仁皂苷B具有中枢神经系统镇静安神、降低血压、抗心肌缺血、降血脂和防治动脉粥样硬化、抗脂质过氧化、保护脑组织等作用；酸枣仁皂苷B能明显抑制正常小鼠的活动次数,抑制苯丙胺的中枢兴奋作用,降低大鼠的协调运动,明显延长戊巴比妥钠阈剂量的小鼠睡眠时间,显著降低戊四氮引起的惊厥率。

酸枣仁皂苷B血脑屏障透过率高于酸枣仁皂苷A，酸枣仁皂苷A不仅在体内不能通过血脑屏障（BBB），且在体外很难与GABAA受体有相应的结合位点。酸枣仁皂苷A水解后，水解成酸枣仁皂苷B,再水解成酸枣仁皂苷甙元，其水解产物酸枣仁皂苷元可以透过BBB并与GABAA受体结合而发挥镇静催眠的作用，酸枣仁皂苷A有较多的糖配体，其配糖多余酸枣仁皂苷B,血脑屏障透过率低于酸枣仁皂苷B，因此酸枣仁皂苷B生物利用度更高。

本申请前期研究了酸枣仁皂苷B微乳制剂透过血脑屏障的作用。方法采用高效液相色谱法测定酸枣仁皂苷B微乳、和酸枣仁皂苷B胶囊同等含药量给药后主要活性成分酸枣仁皂苷B在脑组织中的含量,对比酸枣仁皂苷B胶囊和酸枣仁皂苷微乳制剂小鼠脑组织中该成分的含量变化。结果微乳制剂中,小鼠脑组织中酸枣仁皂苷B含量有显著的提高，为胶囊剂的2-3倍。结论酸皂苷仁皂苷B微乳制剂大大提高其亲脂溶性能降低酸枣仁皂苷在肝脏、胃肠代谢中的首过效应，亲脂性更高更易透过血脑屏障,增强健脑、宁心安神的功效。

酸枣仁皂苷A含量在0.09%左右，酸枣仁皂苷B含量在0.04%左右，从药材酸枣仁中提取酸枣仁皂苷B分离纯化研究文献较少，酸枣仁总皂苷提取方法偏多，酸枣仁皂苷B提取方法主要为硅胶柱层析法结合反相柱层析法分离制备酸枣仁皂苷B；或者通过化学合成或半合成、酶转化合成酸枣仁皂苷B；或者通过超声回流提取，这些方法存在提取率低、纯度低的问题。

发明内容

本发明目的在于提供一种酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法，该方法采用β-葡萄糖甙酶定向水解酸枣仁总皂苷中部分糖甙，使之转化为酸枣仁皂苷B，提高酸枣仁皂苷B得率，该方法比原生药中提取得率提高1-2倍。

本发明方法的步骤如下：

（1）以酸枣仁为原料，粉碎后采用质量浓度50-70%的甲醇溶液或乙醇溶液热回流提取2-3次，提取温度80-85℃，每次提取时间1-2h，过滤，合并提取液，减压浓缩回收有机溶剂，得酸枣仁提取物；

（2）在步骤（1）酸枣仁提取物中加入其体积2-3倍的水，得到提取物混悬液，再加入提取物混悬液质量5-10%的氯化钠，加热搅拌溶解后，将溶液置于1-3℃下静置24h，弃油层得到澄清水层液；

（3）将步骤（3）中水层液经过大孔吸附树脂柱吸附酸枣仁总皂苷，上样流出液为盐类和杂质，水洗树脂柱到流出液为无色，然后用体积浓度70-75%的乙醇溶液解析酸枣仁总皂苷，解析流速1-1.5柱体积/小时，洗脱体积约3-4个柱体积，收集洗脱液，回收乙醇浓缩干燥得酸枣仁总皂苷；

（4）将步骤（3）中酸枣仁总皂苷10-12g、N-乙酰葡萄糖胺10-15g、β-葡萄糖甙酶20-50μg放入反应釜中，加纯水200mL，混匀后用冰乙酸调节pH值为5.5-6；然后在氮气保护、50-60℃下密闭反应6-10h，进行酸枣仁皂苷B的半合成，反应结束后升高温度到100℃，灭酶10min，倒出反应液；

（5）用步骤（4）反应液体积1-2倍的正丁醇萃取反应液2-3次，收集合并正丁醇层，正丁醇层主含酸枣仁皂苷B，旋蒸回收正丁醇，得酶转化反应产物；

（6）采用200-400目硅胶和氯仿湿法装柱，取步骤（5）中酶转化反应产物干法上样，采用氯仿-甲醇-水溶液洗脱，氯仿-甲醇-水溶液是氯仿:甲醇:水按体积比7-5:1.2-1:0.2-0.1的比例混合制得，收集含酸枣仁皂苷B的洗脱液，浓缩回收有机溶剂，浓缩物用丙酮-甲醇溶液结晶，干燥得酸枣仁皂苷B；

（7）将步骤（6）酸枣仁皂苷B制备成质量浓度为15%-25%的酸枣仁皂苷B水溶液，按以下质量比称取：酸枣仁皂苷水溶液10%-15%、肉豆蔻酸异丙酯34-38%、正丙醇22-26%、卵磷脂27-31%；先将卵磷脂用正丙醇溶解，再加入肉豆蔻酸异丙酯，搅拌均匀后，加入酸枣仁皂苷B水溶液，边滴加边搅拌，添加完后再搅拌1小时，制得酸枣仁皂苷B脂质体微乳。

所述大孔吸附树脂型号为ADS-1600，孔径为80-100μm，比表面积大于1000。

所述β-葡萄糖甙酶酶活300U/g。

上述步骤（6）替换为：将步骤（5）中酶转化反应产物用水溶解成上样液，采用填料SMB MCI GEL湿法装柱，纯水平衡后上样，梯度洗脱反相层析，洗脱剂为甲醇水溶液，第一梯度洗脱剂甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为30-40:70-60，洗脱杂质，第二梯度甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为50-60:50-40，收集洗脱液，浓缩，浓缩物用丙酮-甲醇溶液结晶，干燥得酸枣仁皂苷B。

所述丙酮-甲醇溶液是丙酮和甲醇按体积比5-8:1-1.5的比例混合制得。

本发明优点和技术效果如下：

本发明克服现有酸枣仁皂苷B提取分离技术收率低、纯度低等弊端；采用盐析法使得提取液不再因为油性成分较高而乳化，冷藏后能达到较好的油水分离效果，采用非极性大比表面积大孔树脂选择性吸附酸枣仁皂苷，吸附量为传统D101树脂2倍，同时脱去盐类和杂质，通过树脂纯化洗脱收集酸枣仁总皂苷，β-葡萄糖甙酶定向水解酸枣仁总皂苷中部分糖甙，例如酸枣仁皂苷A定位水解糖甙链上葡萄糖基转化成酸枣仁皂苷B,水解法半合成酸枣仁皂苷B，使之转化为酸枣仁皂苷B，提高酸枣仁皂苷B得率2-3倍；通过正相硅胶层析或反向柱层析进一步纯化得到高纯度酸枣仁皂苷B；酸枣仁总皂苷、酸枣仁皂苷A含量较高，然在人体药代学中，酸枣仁皂苷A需经肠道代谢水解后才能发挥更好疗效，在单体皂苷中，酸枣仁皂苷A易转化为皂苷B,皂苷B分子量小于皂苷A，更容易透过血脑屏障，在制剂学方法上以单体为原料药制备所得微乳制备成注射剂比成分复杂的酸枣仁总皂苷所制备得注射剂药效安全可靠且更易透血脑屏障，提高生物利用度，制备所得微乳制剂则更便于人体充分吸收利用，能提高药品生物利用度2-4倍。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围不局限于所述内容。

实施例1：本酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法步骤如下：

（1）以酸枣仁为原料，粉碎后采用质量浓度50%的甲醇溶液热回流提取2次，提取温度80℃，每次提取时间2h，过滤，合并提取液，减压浓缩回收有机溶剂，得酸枣仁提取物；

（2）在步骤（1）酸枣仁提取物中加入其体积2倍的水，得到提取物混悬液，再加入提取物混悬液质量5%的氯化钠，加热搅拌溶解后，将溶液置于1℃下静置24h，弃油层得到澄清水层液；

（3）将步骤（3）中水层液经过大孔吸附树脂ADS-1600（孔径为80-100μm）柱吸附酸枣仁总皂苷，上样流出液为盐类和杂质，水洗树脂柱到流出液为无色，然后用体积浓度70%的乙醇溶液解析酸枣仁总皂苷，解析流速1柱体积/小时，洗脱体积约4个柱体积，收集洗脱液，回收乙醇浓缩干燥得酸枣仁总皂苷；

（4）将步骤（3）中酸枣仁总皂苷10g、N-乙酰葡萄糖胺15g、β-葡萄糖甙酶（酶活300U/g）20μg放入反应釜中，加纯水200mL，混匀后用冰乙酸调节pH值为5.5；然后在氮气保护、60℃下密闭反应6h，进行酸枣仁皂苷B的合成，反应结束后升高温度到100℃，灭酶10min，倒出反应液；

（5）用步骤（4）反应液体积1倍的正丁醇萃取反应液3次，收集合并正丁醇层，正丁醇层主含酸枣仁皂苷B，旋蒸回收正丁醇，得酶转化反应产物；

（6）采用200目硅胶和氯仿湿法装柱，取步骤（5）中酶转化反应产物干法上样，其中酶转化反应产物与硅胶的质量比为1:15；采用氯仿-甲醇-水溶液洗脱，氯仿-甲醇-水溶液是氯仿:甲醇:水按体积比7:1: 0.1的比例混合制得，收集含酸枣仁皂苷B部分的洗脱液，浓缩回收有机溶剂，浓缩物用丙酮-甲醇溶液结晶，干燥得酸枣仁皂苷B，含量为92%，其中丙酮-甲醇溶液是丙酮和甲醇按体积比5:1的比例混合制得，酸枣仁皂苷B含量94.3%，得率0.11%（按原生药计）；

（7）将步骤（6）酸枣仁皂苷B制备成质量浓度为15%的酸枣仁皂苷B水溶液，按以下质量比称取：酸枣仁皂苷水溶液10%、肉豆蔻酸异丙酯38%、正丙醇22%、卵磷脂30%；先将卵磷脂用正丙醇溶解，再加入肉豆蔻酸异丙酯，搅拌均匀后，加入酸枣仁皂苷B水溶液，边滴加边搅拌，添加完后再搅拌1小时，制得酸枣仁皂苷B脂质体微乳。

实施例2：本酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法步骤如下：

（1）以酸枣仁为原料，粉碎后采用质量百分比浓度60%的乙醇溶液热回流提取3次，提取温度85℃，每次提取时间1h，过滤，合并提取液，减压浓缩回收有机溶剂，得酸枣仁提取物；

（2）在步骤（1）酸枣仁提取物中加入其体积3倍的水，得到提取物混悬液，再加入提取物混悬液质量8%的氯化钠，加热搅拌溶解后，将溶液置于2℃下静置24h，弃油层得到澄清水层液；

（3）将步骤（3）中水层液经过大孔吸附树脂ADS-1600（孔径为80-100μm）柱吸附酸枣仁总皂苷，上样流出液为盐类和杂质，水洗树脂柱到流出液为无色，然后用体积浓度75%的乙醇溶液解析酸枣仁总皂苷，解析流速1.2柱体积/小时，洗脱体积约3个柱体积，收集洗脱液，回收乙醇浓缩干燥得酸枣仁总皂苷；

（4）将步骤（3）中酸枣仁总皂苷12g、N-乙酰葡萄糖胺12g、β-葡萄糖甙酶（酶活300U/g）30μg放入反应釜中，加纯水200mL，混匀后用冰乙酸调节pH值为6；然后在氮气保护、55℃下密闭反应8h，进行酸枣仁皂苷B的合成，反应结束后升高温度到100℃，灭酶10min，倒出反应液；

（5）用步骤（4）反应液体积2倍的正丁醇萃取反应液2次，收集合并正丁醇层，正丁醇层主含酸枣仁皂苷B，旋蒸回收正丁醇，得酶转化反应产物；

（6）采用300目硅胶和氯仿湿法装柱，取步骤（5）中酶转化反应产物干法上样，其中酶转化反应产物与硅胶的质量比为1:20；采用氯仿-甲醇-水溶液洗脱，氯仿-甲醇-水溶液是氯仿:甲醇:水按体积比5:1.2: 0.2的比例混合制得，收集含酸枣仁皂苷B部分的洗脱液，浓缩回收有机溶剂，浓缩物用丙酮-甲醇溶液结晶，干燥得酸枣仁皂苷B，含量为93%，其中丙酮-甲醇溶液是丙酮和甲醇按体积比6:1.2的比例混合制得，酸枣仁皂苷B含量96.3%，得率0.11%（按原生药计）；

（7）将步骤（6）酸枣仁皂苷B制备成质量浓度为25%的酸枣仁皂苷B水溶液，按以下质量比称取：酸枣仁皂苷水溶液12%、肉豆蔻酸异丙酯34%、正丙醇26%、卵磷脂28%；先将卵磷脂用正丙醇溶解，再加入肉豆蔻酸异丙酯，搅拌均匀后，加入酸枣仁皂苷B水溶液，边滴加边搅拌，添加完后再搅拌1小时，制得酸枣仁皂苷B脂质体微乳。

实施例3：本酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法步骤如下：

（1）以酸枣仁为原料，粉碎后采用质量百分比浓度70%的甲醇溶液热回流提取2次，提取温度83℃，每次提取时间2h，过滤，合并提取液，减压浓缩回收有机溶剂，得酸枣仁提取物；

（2）在步骤（1）酸枣仁提取物中加入其体积2.5倍的水，得到提取物混悬液，再加入提取物混悬液质量10%的氯化钠，加热搅拌溶解后，将溶液置于3℃下静置24h，弃油层得到澄清水层液；

（3）将步骤（3）中水层液经过大孔吸附树脂ADS-1600（孔径为80-100μm）柱吸附酸枣仁总皂苷，上样流出液为盐类和杂质，水洗树脂柱到流出液为无色，然后用体积浓度72%的乙醇溶液解析酸枣仁总皂苷，解析流速1.5柱体积/小时，洗脱体积约3个柱体积，收集洗脱液，回收乙醇浓缩干燥得酸枣仁总皂苷；

（4）将步骤（3）中酸枣仁总皂苷11g、N-乙酰葡萄糖胺10g、β-葡萄糖甙酶（酶活300U/g）45μg放入反应釜中，加纯水200mL，混匀后用冰乙酸调节pH值为5.5；然后在氮气保护、50℃下密闭反应10h，进行酸枣仁皂苷B的半合成，反应结束后升高温度到100℃，灭酶10min，倒出反应液；

（5）用步骤（4）反应液体积1倍的正丁醇萃取反应液2次，收集合并正丁醇层，正丁醇层主含酸枣仁皂苷B，旋蒸回收正丁醇，得酶转化反应产物；

（6）采用400目硅胶和氯仿湿法装柱，取步骤（5）中酶转化反应产物干法上样，其中酶转化反应产物与硅胶的质量比为1:15；采用氯仿-甲醇-水溶液洗脱，氯仿-甲醇-水溶液是氯仿:甲醇:水按体积比6:1: 0.1的比例混合制得，收集含酸枣仁皂苷B部分的洗脱液，浓缩回收有机溶剂，浓缩物用丙酮-甲醇溶液结晶，干燥得酸枣仁皂苷B，含量为92%，其中丙酮-甲醇溶液是丙酮和甲醇按体积比8:1.5的比例混合制得，酸枣仁皂苷B含量96.5%，得率0.10%；

（7）将步骤（6）酸枣仁皂苷B制备成质量浓度为25%的酸枣仁皂苷B水溶液，按以下质量比称取：酸枣仁皂苷水溶液15%、肉豆蔻酸异丙酯34%、正丙醇23%、卵磷脂28%；先将卵磷脂用正丙醇溶解，再加入肉豆蔻酸异丙酯，搅拌均匀后，加入酸枣仁皂苷B水溶液，边滴加边搅拌，添加完后再搅拌1小时，制得酸枣仁皂苷B脂质体微乳。

实施例4：本酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法步骤如下：

（1）以酸枣仁为原料，粉碎后采用质量百分比浓度55%的乙醇溶液热回流提取2次，提取温度82℃，每次提取时间2h，过滤，合并提取液，减压浓缩回收有机溶剂，得酸枣仁提取物；

（2）在步骤（1）酸枣仁提取物中加入其体积2倍的水，得到提取物混悬液，再加入提取物混悬液质量6%的氯化钠，加热搅拌溶解后，将溶液置于1.5℃下静置24h，弃油层得到澄清水层液；

（3）将步骤（3）中水层液经过大孔吸附树脂ADS-1600（孔径为80-100μm）柱吸附酸枣仁总皂苷，上样流出液为盐类和杂质，水洗树脂柱到流出液为无色，然后用体积浓度70%的乙醇溶液解析酸枣仁总皂苷，解析流速1.2柱体积/小时，收集洗脱液，回收乙醇浓缩干燥得酸枣仁总皂苷；

（4）将步骤（3）中酸枣仁总皂苷10g、N-乙酰葡萄糖胺15g、β-葡萄糖甙酶（酶活300U/g）30μg放入反应釜中，加纯水200mL，混匀后用冰乙酸调节pH值为6；然后在氮气保护、60℃下密闭反应6h，进行酸枣仁皂苷B的半合成，反应结束后升高温度到100℃，灭酶10min，倒出反应液；

（5）用步骤（4）反应液体积1倍的正丁醇萃取反应液3次，收集合并正丁醇层，正丁醇层主含酸枣仁皂苷B，旋蒸回收正丁醇，得酶转化反应产物；

（6）将步骤（5）中酶转化反应产物用水溶解成上样液，采用填料SMB MCI GEL（日本三菱）湿法装柱，纯水平衡后上样，梯度洗脱反相层析，洗脱剂为甲醇水溶液，第一梯度洗脱剂甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为30:70，洗脱杂质，第二梯度甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为50:50，收集洗脱液，浓缩，浓缩物用丙酮-甲醇溶液结晶，其中丙酮-甲醇溶液是丙酮和甲醇按体积比6:1.1的比例混合制得，干燥得酸枣仁皂苷B，含量为98.9%，得率0.14%；

（7）将步骤（6）酸枣仁皂苷B制备成质量浓度为21%的酸枣仁皂苷B水溶液，按以下质量比称取：酸枣仁皂苷水溶液10%、肉豆蔻酸异丙酯34%、正丙醇25%、卵磷脂31%；先将卵磷脂用正丙醇溶解，再加入肉豆蔻酸异丙酯，搅拌均匀后，加入酸枣仁皂苷B水溶液，边滴加边搅拌，添加完后再搅拌1小时，制得酸枣仁皂苷B脂质体微乳。

一种酸枣仁皂苷B脂质体微乳的制备方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。