专利摘要

本公开属于花生壳提取技术领域，具体涉及一种花生壳提取物、制备方法及应用。花生壳作为一种经济作物副产物具有良好的使用价值，现有技术针对花生壳中有益成分的提取多采用溶剂法或溶剂微波法等。本公开提供了一种将花生壳与复合菌剂进行共培养从而对花生壳中有益成分进行提取的方法，通过筛选得到一种可食品添加的复合菌剂，制备方法简便，制取的花生壳提取物对多种菌株具有良好的抑制效果且具有特殊的坚果香气，可作为食品防腐剂、抑菌剂进行使用。

权利要求

1.一种花生壳提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：向花生壳粉中加入复合菌剂，发酵得到花生壳提取物；

所述复合菌剂包括以下菌种：菌种编号为CICC10023的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、菌种编号为CICC 2650的冠突散囊菌(Eurotium cristatum)、菌种编号为CICC10036的解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)及菌种编号为CICC 10798的白色食藻菌(Agarivorans albus)；所述菌株的种子液以2％的接种量接种至MRS培养基中，37℃恒温培养36h得到菌液，将所述菌液按照体积比为1.8～2.2:0.8～1.2:0.8～1.2:0.4～0.6混合。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述复合菌剂的接种量为107～109cfu/g。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述花生壳粉中加入复合菌剂后恒温培养26～30d得到花生壳提取物。

4.权利要求1-3任一项所述制备方法得到的花生壳提取物。

5.权利要求4所述的花生壳提取物作为食品抑菌剂、防腐剂或风味剂的应用。

说明书

技术领域

本公开涉及花生壳提取技术领域，具体涉及一种具有抗菌防腐并且具有良好气味的花生壳提取物及其作为食品防腐剂的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本公开的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

花生是我国产量丰富、食用广泛的一种坚果，可用于提取食用油、制备工业润滑剂及淬火剂，具有良好的经济价值。花生壳作为花生的副产品，同样具有广泛的应用：花生壳中具有较多的碳水化合物及纤维，还可用于生产酱油、酿造白酒、加工饲料，制作复合板材等。

花生壳在烘焙之后能够产生明显的坚果香味，因此花生壳提取物还可以用于制备香料。朱巍等人的研究提供了一种烟用香原料的花生壳提取物，通过超声提取花生壳中呋喃类及酮类增香成分，用于卷烟的添加具有柔和烟气、改善余味的作用。另外，花生壳的主要成分为以木樨草素为主的黄酮类化合物，具有良好的抑菌抗氧化效果，可用于防腐剂、抑菌剂的制备。周建新等人的研究对花生壳乙醇提取物的抗菌性能进行了研究，研究表明花生壳提取物对细菌、真菌均具有一定的抑制效果，且具有良好的热稳定性。发明人认为，提供一种更为安全、高效的方法提取花生壳中的抗氧化及抗菌成分等作为食品防腐剂具有良好的经济效益。目前，本领域针对花生壳提取的方法主要为溶剂提取法、超声波提取法、微波提取法或上述方法的复合提取法。发明人认为，上述提取方法往往需要添加有机试剂进行提取，难免造成有机试剂残留，增加了后续纯化难度。

发明内容

针对上述研究背景，本公开提供了一种花生壳提取物及制备方法，通过微生物发酵作用对花生壳进行降解，制备得到的提取物中富含黄酮、酚类等物质，具有良好杀菌及抗氧化作用，同时还具有良好的坚果香气，可以作为风味剂及防腐剂进行添加。

为了实现以上技术效果，本公开提供以下技术方案：

本公开第一方面，提供一种复合菌剂，所述复合菌剂包括以下菌种：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、冠突散囊菌(Eurotium cristatum)、解淀粉芽胞杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)及白色食藻菌(Agarivorans albus)。

该复合菌剂中的菌种均为可添加至食品的安全菌种，本公开通过筛选获得上述菌株的组合，能够以花生壳作为底物进行发酵。复合菌剂的制备方法简单经济，制备得到的花生壳提取物具有良好的抑菌作用及特殊的坚果香气，可用于食品的添加，在起到防腐抑菌效果的同时，还能够改善食品的风味。

本公开第二方面，提供一种花生壳提取物制备方法，所述制备方法包括以下步骤：向花生壳粉中加入第一方面所述复合菌剂，发酵得到花生壳提取物。

本公开第三方面，提供第二方面所述制备方法提供的花生壳提取物。

本公开第四方面，提供第三方面所述花生壳提取物作为食品或药品的防腐剂和/或风味剂的应用。

与现有技术相比，本公开的有益效果是：

1.本公开提供了一种复合菌剂，该复合菌剂可采用花生壳作为培养底物，经过一定的发酵过程，该复合菌剂能够有效降解花生壳中的纤维部分，使具有抗氧化、抗菌活性的黄酮及酚类物质充分的暴露。

2.本公开还提供了一种通过与微生物共培养的方法制备生壳提取物，该花生壳提取物具有良好的抗菌功效，并且具有特殊的坚果香气。该提取物可用于制作食品防腐剂，甚至直接添加至食品中，同时还能够改善食物的风味；也可以添加至烟叶中，实现烟叶防腐的同时，还能够改善香烟的风味。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本公开提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本公开的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

正如背景技术所介绍的，现有技术中针对花生壳中有益物质的提取方法主要为溶剂法或超声法，需要加入有机试剂进行提取，易造成有机试剂残留，不宜添加至食品中。为了解决如上的技术问题，本公开提出了一种采用微生物与花生壳共培养的方式对花生壳中的有益成分进行提取制备的方法，制备过程中无需引入有机试剂，并且采用微生物发酵安全性良好。

本公开第一方面，提供一种复合菌剂，所述复合菌剂包括以下菌种：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、冠突散囊菌(Eurotium cristatum)、解淀粉芽胞杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)及白色食藻菌(Agarivorans albus)。

在一些实施例中，所述枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)为菌种编号为CICC10023的菌株。

在一些实施例中，所述冠突散囊菌(Eurotium cristatum)为菌种编号为CICC2650的菌株。

在一些实施例中，所述解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)为菌种编号为CICC10036的菌株。

在一些实施例中，所述白色食藻菌(Agarivorans albus)为菌种编号为CICC10798的菌株。

在一些实施例中，所述复合菌剂采用MRS培养基通过2～3次培养进行活化。

在一些实施例中，所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、冠突散囊菌(Eurotium cristatum)、解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)及白色食藻菌(Agarivorans albus)混合体积比为1.8～2.2:0.8～1.2:0.8～1.2:0.4～0.6。

本公开第二方面，提供一种花生壳提取物制备方法，所述制备方法包括以下步骤：向花生壳粉中加入第一方面所述复合菌剂，发酵得到花生壳提取物。

在一些实施例中，所述复合菌剂的接种量为107～109cfu/g。

在一些实施例中，所述花生壳粉中加入复合菌剂后恒温培养26～30d得到花生壳提取物。

本公开第三方面，提供第二方面所述制备方法提供的花生壳提取物。

本公开第四方面，提供第三面所述花生壳提取物作为食品抑菌剂、防腐剂和/或风味剂的应用。

在一些实施例中，所述花生壳提取物作为烟草的风味剂进行应用。

在一些实施例中，所述花生壳提取物作为食用油的防腐剂进行应用。

以下实施例中所使用的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、冠突散囊菌(Eurotium cristatum)、解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)及白色食藻菌(Agarivorans albus)为《关于印发<可用于食品的菌种名单>的通知》附录中所规定允许使用的生产菌种，枯草芽胞杆菌菌种编号为CICC10023，冠突散囊菌菌种编号为CICC 2650，解淀粉芽胞杆菌菌种编号为CICC 10036，白色食藻菌菌种编号为CICC 10798，均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。

为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本公开的技术方案，以下将结合具体的实施例与对比例详细说明本公开的技术方案。

实施例1复合菌剂的制备

将菌种编号为CICC10023的枯草芽胞杆菌，菌种编号为CICC2650的冠突散囊菌，菌种编号为CICC 10036的解淀粉芽胞杆菌，菌种编号为CICC 10798的白色食藻菌分别置于MRS培养基中，37℃有氧状态下活化培养36h，得到一次活化菌株。挑选活化单菌落，接种于新的MRS平板培养基中，同样37℃有氧状态下活化培养36h，获得二次活化菌种。

挑选二次活化的单菌落置于液体MRS培养基中，37℃恒温24h进行扩大培养，得到各菌种的种子液。将菌种的种子液以2％的接种量接种至MRS培养基中，37℃恒温培养36h得到各菌种的菌液。混合各菌种的菌液，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、冠突散囊菌(Eurotium cristatum)、解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)及白色食藻菌(Agarivorans albus)混合比例为2:1:1:0.5(体积比)，得到复合菌剂1。

实施例2

将实施例1中活化好的枯草芽胞杆菌、冠突散囊菌及解淀粉芽胞杆菌菌液以体积比2:1:1进行混合，获得复合菌剂2。

实施例3

将实施例1中活化好的冠突散囊菌、解淀粉芽胞杆菌及白色食藻菌菌液按体积比1:1:10.5进行混合，获得复合菌剂3。

实施例4花生壳提取物的制备

挑选没有霉变的花生壳，清洗表面的淤泥后置于45℃烘箱中烘干3h，干燥后经粉碎机粉碎，粉碎后的花生壳粉过40目筛网备用。

称取1kg花生壳粉加入1.5倍体积的水，混合均匀后分别加入制备好的复合菌剂1-3，三种复合菌剂的接种量均为108cfu/g。搅拌花生壳粉混合溶液，使菌株与花生壳混合均匀。将混均的混合溶液置于37℃恒温培养28d，获得花生壳发酵液。经过滤除去发酵液中的固体部分，所得液体部分过0.5μm滤膜后通过减压浓缩将液体部分体积浓缩至1/3，分别得到该花生壳提取物1-3。其中，花生壳提取物1具有良好的坚果香气。

实施例5花生壳提取物抗菌活性

本实施例中，分别选取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及黄曲霉作为抑制对象，考察该花生壳提取物对上述菌种的抑制作用。将上述三种菌株接入LB培养基中，37℃培养24h进行活化，向培养体系中加入LB培养基使活化后的菌液浓度为107cfu/mL，加入无菌水进行稀释，得到10-1、10-2、10-3、10-4、10-5五个梯度的菌悬液，用于抑菌活性测定。

采用滤纸片法对该花生壳提取物的抑菌活性进行测定，将灭菌后直径为6mm的滤纸片分别浸泡于花生壳提取物溶液1-3中30min，每组提取物平行制备五个滤纸片，取出后沥干。取0.1ml上述菌种的菌悬液均匀涂布于牛肉膏蛋白胨平板上，37℃培养18h后测量滤纸片的抑菌圈直径，计算每组五个滤纸片的平均抑菌效果如下表1所示：

表1花生壳提取物1-3对不同菌种的抑制作用

由表1可知，采用实施例1中复合菌剂与花生壳发酵得到提取物对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及黄曲霉三种菌都有良好的抑制效果，与对照组差异显著，具有统计学意义(p<0.01)。采用实施例2中复合菌剂制备的花生壳提取物对黄曲霉同样具有显著的抑制作用，但是对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抑制作用不如提取物1。同样的，提取物3对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌同样具有抑制作用，但效果不显著。

实施例6

本实施例中，针对该花生壳提取物作为食用油防腐剂的应用效果进行考察。量取一级花生油、茶籽油及玉米油成品油1L，分别加入实施例1中的花生壳提取物5mL搅拌混合均匀。分别取同等体积的上述三种食用油及加入混合提取物后的食用油样品置于同一环境中接受阳光曝晒7d，通过食用油酸败测速卡对曝晒前后的上述样品进行检测，检测结果如下表所示：

表2不同组食用油酸败程度检测结果

如表2所示，加入花生壳提取物组的食用油经曝晒后，其酸价显著低于未加提取物组，证明该提取物加入食用油中可以有效的降低食用油的酸败程度，作为食品防腐剂具有良好的效果。

以上所述仅为本公开的优选实施例而已，并不用于限制本公开，对于本领域的技术人员来说，本公开可以有各种更改和变化。凡在本公开的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本公开的保护范围之内。

一种花生壳提取物、制备方法及应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。