专利摘要

本发明公开了一种氧化锆‑硅胶液相色谱填料。该填料在氧化锆‑硅胶基质表面修饰有D‑果糖‑1,6‑二磷酸。相比于现有的单磷酸腺苷修饰的氧化锆‑硅胶色谱填料，该填料在亲水作用模式下，具有更好的色谱分离性能。相比于现有的硅胶基质液相色谱填料，该材料具有良好的化学稳定性，可在pH值1‑14范围内稳定使用，具有更好的应用前景。

权利要求

1.一种氧化锆-硅胶液相色谱填料，其特征在于：多孔硅胶微球的内外表面修饰有氧化锆，形成氧化锆-硅胶基质；在氧化锆-硅胶基质表面修饰有D-果糖-1,6-二磷酸基团。

2.根据权利要求1所述的色谱填料，其特征在于：所述多孔硅胶微球的比表面积为100m²/g～500m²/g；所述氧化锆-硅胶基质的比表面积为50m²/g～400m²/g。

3.根据权利要求1所述的色谱填料，其特征在于：所述多孔硅胶微球的粒径为1～100微米，孔径3～100纳米。

4.根据权利要求1所述的色谱填料，其特征在于：所述氧化锆-硅胶基质中锆的质量分数为2％-50％。

5.根据权利要求1所述的色谱填料，其特征在于：色谱填料中D-果糖-1,6-二磷酸基团的质量分数为1.20％-30.00％。

6.一种权利要求1-5所述色谱填料的应用，其特征在于：该色谱填料可以用于苯甲酸类、苯酚类、核苷类以及碱性药类化合物的亲水色谱分离。

说明书

技术领域

本发明涉及液相色谱领域，具体地涉及一种D-果糖-1,6-二磷酸修饰的氧化锆-硅胶液相色谱填料及其应用。

背景技术

氧化锆-硅胶微球具有良好的热稳定性和化学稳定性，其在色谱分离及样品前处理方面具有重要的应用价值(H.Dun,et al.Anal.Chem.76(2004)5016；Q.Wu,etal.Anal.Chem.,86(2014)10122)。然而，氧化锆表面具有丰富的路易斯酸性位点，而导致一些酸性物质与其表面强吸附，这使其不适于苯甲酸、苯磺酸等酸性化合物的分离(Q.Wanget al.,Talanta,129(2014)438)。针对这类问题，有人发明了单磷酸腺苷修饰的氧化锆-硅胶液相色谱填料，但是该类液相色谱填料的色谱柱效较低，柱效约为10,000塔板数/米，不能满足现有的液相色谱分离需求(Q.Wang et al.,J.Chromatogr.A 1383(2015)58)。

现有的多糖修饰的硅胶基质液相色谱填料虽然具有较好的色谱分离性能，可满足现有的色谱分离需求。但是，其化学稳定性较差，仅适合在pH＝2～8范围内使用。所以，提供一种既具有良好的色谱分离性能，又具有较强的化学稳定性的液相色谱填料已成为本领域急需解决的技术问题。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种氧化锆-硅胶液相色谱填料，这种填料可以克服目前氧化锆-硅胶液相色谱填料分离性能差的弊端，同时具有较强的化学稳定性，可在pH＝1～14范围内使用。

本发明的采用的技术方案是：

一种氧化锆-硅胶液相色谱填料，其特征在于：多孔硅胶微球的内外表面修饰有氧化锆，形成氧化锆-硅胶基质；在氧化锆-硅胶基质表面修饰有D-果糖-1,6-二磷酸基团。

所述多孔硅胶微球的比表面积为100m²/g～500m²/g；所述氧化锆-硅胶基质的比表面积为50m²/g～400m²/g。

所述多孔硅胶微球的粒径为1～100微米，孔径3～100纳米。

所述氧化锆-硅胶基质中锆的质量分数为2％-50％。

所述色谱填料中D-果糖-1,6-二磷酸基团的质量分数为1.20％-30.00％。

所述色谱填料可以用于苯甲酸类、苯酚类、核苷类以及碱性药类化合物的亲水作用色谱分离。

本发明通过氧化锆-硅胶基质表面的氧化锆与磷酸基团的化学吸附作用，将D-果糖-1,6-二磷酸修饰于氧化锆-硅胶材料表面，与果糖等糖类化合物直接修饰的硅胶材料相比，由于氧化锆的存在，显著提高了材料的稳定性，使其可以耐受pH＝1～14的应用环境。

与现有技术采用的单磷酸腺苷修饰氧化锆-硅胶材料相比，本技术方案采用双磷酸化合物D-果糖-1,6-二磷酸修饰氧化锆-硅胶，所得色谱填料不仅对苯甲酸、苯磺酸等酸性化合物具有更好的色谱分离性能。同时，对碱性药物，苯酚以及核苷类化合物均有很好的色谱分离性能，柱效可达为28,000塔板数/米。

本发明公开的D-果糖-1,6-二磷酸修饰氧化锆-硅胶材料，其修饰方法简单可靠，可采用D-果糖-1,6-二磷酸三钠水溶液与氧化锆-硅胶基质混合，在50～60℃下反应8～12h即可。

本发明有如下优点：

1.本发明所得D-果糖-1,6-二磷酸-氧化锆-硅胶填料具有很好的热稳定性及化学稳定性，能在pH＝1～14环境下使用。

2.本发明所得D-果糖-1,6-二磷酸-氧化锆-硅胶填料相比于现有的单磷酸腺苷修饰的氧化锆-硅胶填料具有更好的色谱分离性能，柱效可达为28,000塔板数/米。

附图说明

图1为D-果糖-1,6-二磷酸-氧化锆-硅胶材料的热重分析图。其中，1为氧化锆-硅胶填料；2实施例1中所述的D-果糖-1,6-二磷酸-氧化锆-硅胶材料。

图2为应用例1中D-果糖-1,6-二磷酸-氧化锆-硅胶分离苯甲酸类化合物的色谱图。其中，a—以D-果糖-1,6-二磷酸-氧化锆-硅胶为填料；b—以氧化锆-硅胶为填料。图中1为苯甲酸，2为对羟基苯甲酸，3为阿司匹林，4为烟酸。

图3为应用例2中D-果糖-1,6-二磷酸-氧化锆-硅胶分离苯酚类化合物的色谱图。其中，a—以D-果糖-1,6-二磷酸-氧化锆-硅胶为填料；b—以氧化锆-硅胶为填料。图中1为苯，2为苯酚，3为间苯二酚，4为间苯三酚。

图4为应用例3中D-果糖-1,6-二磷酸-氧化锆-硅胶分离核苷类化合物的色谱图。其中，a—以D-果糖-1,6-二磷酸-氧化锆-硅胶为填料；b—以氧化锆-硅胶为填料。图中1为胸腺嘧啶，2为尿嘧啶，3为腺嘌呤，4为胞嘧啶。

图5为应用例4中D-果糖-1,6-二磷酸-氧化锆-硅胶分离碱性药物的色谱图。其中，a—以D-果糖-1,6-二磷酸-氧化锆-硅胶为填料；b—以氧化锆-硅胶为填料。图中1延胡索乙素，2为吉非替尼，3为粉防己碱，4为小檗碱，5为盐酸石蒜碱。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，通过实施例对本发明进行说明。本发明所列的这些具体实施例仅限于说明本发明，而非对本发明的限定。

实施例1：

一种D-果糖-1,6-二磷酸-氧化锆-硅胶材料。在多孔硅胶微球的内外表面修饰有氧化锆，形成氧化锆-硅胶基质，方法参考文件(中国发明专利，201510920926.7)，其中，锆的质量分数为2％，多孔硅胶微球的比表面积是150m²/g，粒径为5μm，孔径为10nm；氧化锆-硅胶基质的比表面积为140m²/g。在氧化锆-硅胶基质表面修饰有D-果糖-1,6-二磷酸基团，其修饰过程为氧化锆-硅胶基质在D-果糖-1,6-二磷酸三钠水溶液中浸泡搅拌10h，水温55℃，获得表面修饰D-果糖-1,6-二磷酸基团的氧化锆-硅胶色谱填料。该填料可以用于亲水作用色谱分离。

将该材料用于热重分析，所得热重分析结果如图1。由图1中可以看出200℃之前失重主要由表面水失重引起，而当温度高于200℃之后，材料失重为2.77％，此时主要由材料表面修饰D-果糖-1,6-二磷酸引起，而氧化锆-硅胶材料失重仅为1.31％，说明该材料被成功修饰。

应用例1：

所采用氧化锆-硅胶微球锆的质量分数为3％，其粒径为5μm，孔径为9nm,比表面积为300m²/g，在氧化锆-硅胶基质表面修饰D-果糖-1,6-二磷酸基团，其中，D-果糖-1,6-二磷酸基团的质量分数为1.31％。

将所得填料采用干法填充30cm×0.53mm i.d弹性石英毛细管柱，在亲水作用模式下分离对羟基苯甲酸、苯甲酸、阿司匹林、烟酸，色谱条件：流动相：乙腈/pH＝6.8的20mM醋酸铵水溶液＝85/15；流速：12.0μL/min；柱温：25℃；紫外检测波长：230nm。所得色谱图如图2所示，可以看出，苯甲酸类化合物的分离度均大于1.5，实现了基线分离。

将所得填料采用干法填充30cm×0.53mm i.d弹性石英毛细管柱，在亲水作用模式下分离苯、苯酚、间苯二酚、间苯三酚，色谱条件：流动相：乙腈/pH＝6.0的20mM醋酸铵水溶液＝97/3；流速：12.0μL/min；柱温：25℃；紫外检测波长：214nm。色谱图如图3所示，相比于氧化锆-硅胶基质，在D-果糖-1,6-二磷酸修饰的氧化锆硅胶固定相上，苯酚类化合物得到较好的色谱分离，并且，对于苯的色谱分离柱效可达约29,000塔板数/米，相比于单磷酸腺苷修饰的氧化锆-硅胶填料柱效(10,000塔板数/米)具有显著提高。

所得填料采用干法填充30cm×0.53mm i.d弹性石英毛细管柱，在亲水液相色谱模式下分离胸腺嘧啶、尿嘧啶、腺嘌呤、胞嘧啶，色谱条件：流动相：乙腈/pH＝6.0的50mM醋酸铵水溶液＝85/15；；流速：12.0μL/min；柱温：25℃；紫外检测波长：260nm。色谱图对应图4，核苷类化合物得到较好的色谱分离。并且，对于尿嘧啶的色谱分离柱效可达约21,000塔板数/米。

所得填料采用干法填充30cm×0.53mm i.d弹性石英毛细管柱，在亲水作用模式下分离延胡索乙素、吉非替尼、粉防己碱、小檗碱、盐酸石蒜碱，色谱条件：流动相：乙腈/pH＝9.0的20mM醋酸铵水溶液＝80/20；流速：12.0μL/min；柱温：25℃；紫外检测波长：280nm。色谱图对应图5，核苷类化合物得到较好的色谱分离。对于粉防己碱的色谱分离柱效可达约29,000塔板数/米，相比于单磷酸腺苷修饰的氧化锆-硅胶填料柱效(10,000塔板数/米)显著提高。

实施例2：

一种氧化锆-硅胶色谱填料，其中氧化锆-硅胶微球采用文献报道方法(AdvancedMaterial s，2008,20,2131–2136)，锆的质量分数为30％，其粒径为5μm，孔径为8nm，比表面积为350m²/g。氧化锆-硅胶基质在D-果糖-1,6-二磷酸三钠水溶液中浸泡搅拌10h，水温55℃，获得表面修饰D-果糖-1,6-二磷酸基团的氧化锆-硅胶色谱填料。该填料可以用于亲水色谱分离。

一种氧化锆-硅胶液相色谱填料及应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。