专利摘要

本发明提供了具有下面通式I所示结构的蟾毒配基衍生物或其药学上可接受的盐、其制备方法、包含该衍生物的药物组合物、以及它们的用途。所述蟾毒配基衍生物对多种人源肿瘤细胞株具有抑制活性，可作为治疗恶性肿瘤的药物。

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2011年6月30日向中国国家知识产权局提交的发明专利申请第201110180620.4号的优先权权益，该申请的全部内容在此通过引用全部并入本文，如同完全记载在本文中一样。

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体地，本发明涉及一类新的蟾毒配基衍生物(bufotalins)、其制备方法、包括该衍生物的药物组合物、及其用途。所述蟾毒配基衍生物对肿瘤细胞株具有抑制活性，可用作治疗恶性肿瘤的药物。

背景技术

肿瘤是威胁人类生命的恶性疾病之一，全世界因患肿瘤死亡人数每年在500万以上，在中国每年新发现肿瘤患者有160多万，死亡130多万，因而世界各国都特别关注抗肿瘤药物的研究。

长期以来，强心苷主要作为钠泵抑制剂用于治疗充血性心力衰竭及心率不齐等心脏疾患。除此之外，强心苷还具有选择性抑制肿瘤细胞增殖的作用。早在1964年就有文献报道了强心苷在体外具有很强的抗鼻咽癌活性【Kupchan S.M.，Hemingway R.J.，Doskotch R.W.Tumor inhibitors.IV.Apocannoside and cymarin，the cytotoxic principles of apocynum cannabinum L.J.Med.Chem.7，803-804(1964).】。后来研究证实，强心苷在低于治疗心力衰竭的有效血药浓度就对多种恶性肿瘤具有选择性地诱导肿瘤细胞坏死的活性【Yeh J.Y.，Huang W.J.，Kan S.F.，Wang P.S.Inhibitory effects of digitalis on the proliferation of androgen dependent and independent prostate cancer cells.J.Urology，166，1937-1942(2001)；Lopez-Lazaro M.，Pastor N.，Azrak S.S.，Ayuso M.J.，Austin C.A.，Cortes F.Digitoxin inhibits the growth of cancer cell lines at concentrations commonly found in cardiac patients.J.Nat.Prod.68，1642-1645(2005).】。这一重要发现使我们看到强心苷的新药用前景—新型抗肿瘤药物。因此，近二十年来，世界各国学者纷纷转向对强心苷抗肿瘤的作用机制、提取分离、全合成、结构改造与构效关系以及临床试验等相关研究。至今已有大量的相关研究及综述被报道【Melero，C.P.；Medarde，M.；Feliciano，A.S.，A short review on cardiotonic steroids and their aminoguanidine analogues.Molecules 2000，5(1)，51-81.；Chen，J.Q.；Contreras，R.G.；Wang，R.；Fernandez，S.V.；Shoshani，L.；Russo，I.H.；Cereijido，M.；Russo，J.，Sodium/potasium ATPase(Na⁺，K⁺-ATPase)and ouabain/related cardiac glycosides：a new paradigm for development of anti-breast cancer drugs.Breast Cancer Res Tr 2006，96(1)，1-15.；Mijatovic，T.；Lefranc，F.；Quaquebeke，E.V.；Vynckt，F.V.；Darro，F.；Kiss，R.，UNBS1450：A new hemi-synthetic cardenolide with promising anti-cancer activity.Drug Develop Res 2007，68，164-173.】。

蟾酥是中国传统的名贵中药，药用历史悠久，现已有多种中药制剂用于肿瘤的辅助治疗，其抗肿瘤的主要有效成分为一类强心甾核上连有双不饱和六元内酯环的蟾毒配基类化合物，结构式如下所示。

因此，合成蟾毒配基新类似物，进行抗肿瘤构效关系研究，发现新的具有高效、低毒的蟾毒配基类衍生物具有重要意义。WO 2007081835A2公开了一类下式所示的强心内酯和蟾蜍二烯烃酸内酯化合物及其调节局部和全身缺氧事件作用的用途，具体涉及如下化合物：

WO 2011085641A1公开了一类蟾毒灵衍生物及其治疗癌症的用途，并具体公开了下列化合物：

但是，上述化合物的药理活性尚不能令人满意，且提供给患者的选择仍然不足。因此，有必要进一步开发蟾毒灵衍生物来满足患者的需求。

发明内容

本发明的一个目的是提供一类通式I所示的蟾毒配基衍生物或其药学上可接受的盐。所述蟾毒配基衍生物对人源肿瘤细胞株具有抑制活性，可用作治疗恶性肿瘤的药物。

本发明的再一目的为提供制备上述蟾毒配基衍生物的方法。

本发明的再一目的为提供包含治疗有效量的选自根据本发明的蟾毒配基衍生物和其药学上可接受的盐中的一种或多种作为活性成分的药物组合物。所述药物组合物任选可以进一步包含药学上可接受的载体、佐剂或辅料。

本发明的再一目的为提供上述蟾毒配基衍生物或其药学上可接受的盐、和包含该衍生物的药物组合物在制备用于治疗恶性肿瘤的药物中的用途。

本发明的再一目的为提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的选自根据本发明的蟾毒配基衍生物和其药学上可接受的盐中的一种或多种作为活性成分以及其他药学上可接受的治疗剂，特别是其他抗肿瘤药物。所述药物组合物任选可以进一步包含药学上可接受的载体、佐剂或辅料。

本发明的再一目的为提供一种治疗恶性肿瘤的方法，所述方法包括给具有该需要的患者给药治疗有效量的选自根据本发明的蟾毒配基衍生物和其药学上可接受的盐中的一种或多种，或根据本发明的包含治疗有效量的选自根据本发明的蟾毒配基衍生物和其药学上可接受的盐中的一种或多种作为活性成分的药物组合物。

在本发明的第一方面，提供了一类具有下面通式I所示结构的蟾毒配基衍生物，或其药学上可接受的盐，

式中：

X为O或NH；

R₁为选自以下任一结构基团中的一个基团：

其中：

n₅为0、1、2或3；

n₆为0、1、2、3或4；

n₇为0、1、2、3或4；且n₆和n₇不同时为0；

W为CH；

V为R₁₅-N；

R₁₅为H、C₁-C₆烷基、-C(＝O)R₁₁、-SO₂-R₁₂或者氨基酸残基；优选为H、C₁-C₄烷基、-C(＝O)R₁₁、或-SO₂-R₁₂；最优选为H、甲基、乙基；

n₁为1、2或3；

Y为N；

R₅为H或C₁-C₆烷基；优选为H或C₁-C₄烷基；最优选为H、甲基或乙基；

R₆和R₇各自独立地为H或C₁-C₆烷基；优选为H或C₁-C₄烷基；最优选为H、甲基或乙基；

n₃为0、1、2或3；

n₄为0、1、2或3；且n₃和n₄不同时为0；

U为O、R₁₃-N或R₁₄-CH；

R₁₃为H、C₁-C₆烷基、-C(＝O)R₁₁、-SO₂-R₁₂或者氨基酸残基；优选为H或C₁-C₄烷基；最优选为H、甲基或乙基；

R₁₁和R₁₂各自独立地为H、C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基、C₁-C₆烷氧基羰基、苄基、芳基、氨基(NH₂)、C₁-C₆烷氧基羰基C₁-C₄烷基、C₃-C₇环烷基取代的氨基、苄基或苯基取代的氨基、C₁-C₆烷氧基或者5-7元芳香杂环基；优选为H、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷氧基羰基、苄基、芳基、氨基(NH₂)、C₁-C₄烷氧基羰基C₁-C₂烷基、C₅-C₇环烷基取代的氨基、苄基或苯基取代的氨基、C₁-C₄烷氧基或者吡啶基；最优选为H、甲基、乙基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、苄基、苯基、吡啶基，用甲基、硝基或甲氧基羰基取代的苯基、氨基(NH₂)、用乙氧基羰基乙基、环己基或苄基取代的氨基、甲氧基、乙氧基或吡啶基；

R₁₄为H、C₁-C₆烷基、羟基、C₃-C₇环烷基、苄基、芳基、氨基(NH₂)、用C₁-C₄烷基或羟基C₁-C₄烷基取代的氨基、C₁-C₆烷氧基或者5-7元芳香杂环基；优选为H、C₁-C₄烷基、羟基、C₃-C₇环烷基、氨基(NH₂)、用C₁-C₄烷基或羟基C₁-C₄烷基取代的氨基或C₁-C₄烷氧基；更优选为H、甲基、羟基、羟甲基氨基、羟乙基氨基或二甲氨基；

所述芳基可以是苯基、萘基或联苯基，或者用选自卤素、C₁-C₆烷基、氰基、硝基、氨基(NH₂)、羟基、羟基C₁-C₄烷基、卤代C₁-C₄烷基、羧基、C₁-C₄烷氧基、卤代C₁-C₄烷氧基、巯基和C₁-C₄烷氧基羰基中的1-4个取代基取代的苯基，优选为苯基，或者用选自C₁-C₄烷基、硝基、氨基(NH₂)、羟基、羟基C₁-C₄烷基、卤代C₁-C₄烷基、羧基、C₁-C₄烷氧基和C₁-C₄烷氧基羰基中的1个取代基取代的苯基；

R₂为-OH；

R₃为-H；

R₄为-H，

上述化合物中不包括如下化合物：

在本发明中，术语“芳基”是指芳香族环基，优选是碳原子数为6～14个的芳基，更优选为碳原子数为6～12个的芳基，如：苯基、萘基、联苯基，用选自卤素、C₁-C₆烷基、氰基、硝基、氨基(NH₂)、羟基、羟基C₁-C₄烷基、卤代C₁-C₄烷基、羧基、C₁-C₄烷氧基、卤代C₁-C₄烷氧基、巯基、C₁-C₄烷氧基羰基中的1-4个取代基取代的苯基，如：4-甲基苯基、4-羟基苯基、2，3-二羟基苯基、3-羟基苯基、4-甲氧基苯基、3-甲氧基-4-羟基苯基、3，4-二甲氧基苯基，更优选是苯基、4-羟基苯基、4-甲氧基苯基、3-甲氧基-4-羟基苯基。

在本发明中，术语“C₁-C₆烷基”是指主链上具有1至6个碳原子的直链或支链烷基，非限制性地包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等；优选异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基。

在本发明中，术语“C₁-C₆烷氧基”是指主链上具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基，非限制性地包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基等；优选甲氧基、乙氧基。

在本发明中，术语“C₃-C₇环烷基”是指在环上具有3至7个碳原子的环状烷基，非限制性地包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；优选环戊基、环己基和环庚基。

在本发明中，术语“5-7元芳香杂环基”是指在环上具有至少一个选自N、O和S中的杂原子的5-7元芳香环基，非限制性地包括呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、咪唑基、吡唑基和吡啶基；优选吡咯基、咪唑基和吡啶基。

在本发明中，所述氨基酸残基是指将氨基酸通过缩合反应连接到本发明的化合物结构上后形成的氨基酸部分，所述氨基酸是本领域中公知的，非限制性地包括甘氨酸、苏氨酸、脯氨酸、酪氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等，优选为甘氨酸、脯氨酸、酪氨酸、色氨酸。

本发明中的术语“药学上可接受的盐”是指与磷酸、硫酸、盐酸等无机酸，或醋酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸等有机酸，或天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸形成的盐，或与上述酸成酯或酰胺后再与无机碱形成的盐，如钠、钾、钙、铝盐和铵盐。

在本发明一个优选的实施方案中，提供了一种下面通式II表示的蟾毒配基衍生物，或其药学上可接受的盐，

其中，R₁、R₂、R₃和R₄如通式I中所定义，

上述化合物中不包括如下化合物：

在本发明一个更优选的实施方案中，上述通式II中，

R₁为

n₅为0、1或2；

n₆为0、1、2、3或4；

n₇为0、1、2、3或4；且n₆和n₇不同时为0；

W为CH；

V为R₁₅-N；

R₁₅为H或C₁-C₆烷基。

在本发明另一个优选的实施方案中，提供了一种由下面通式III表示的蟾毒配基衍生物，或其药学上可接受的盐，

其中，R₁、R₂、R₃和R₄如通式I中所定义。

本发明中，具体优选的化合物为：

在本发明的第二方面，还提供了一种制备根据本发明的蟾毒配基衍生物的方法，所述方法为以下方法：

方法A：对于X为O的情况

(1)如反应式1所示，将化合物1与氯甲酸对硝基苯酯经酯化反应得到中间体化合物A，其中，所述酯化反应的具体条件是本领域技术人员的常规选择，例如，可以在例如三乙胺、二异丙基乙基胺、吡啶(Py)或4-(N，N-二甲基)氨基吡啶(DMAP)等的碱的存在下，在例如二氯甲烷(DCM)等的有机溶剂中进行；

(2)将中间体化合物A与最终产物相应的氨 经取代反应得到通式I化合物中的氨基甲酸酯化合物，其中，所述取代反应的具体条件是本领域技术人员的常规选择，例如，可在室温条件下在例如三乙胺、碳酸钾、吡啶等的碱存在下进行；

(3)将步骤(2)中合成的氨基甲酸酯与最终产物相对应的酰氯、异氰酸酯或磺酰氯(R₁₂SO₃Cl，其中R₁₂如通式I所定义)反应得到哌嗪氨基甲酸酯的酰化产物；所述酰化反应的具体条件是本领域技术人员的常规选择，例如，可在室温在例如二氯甲烷等的溶剂中在例如三乙胺、碳酸钾、吡啶等的碱存在下进行；

方法B：对于X为N的情况，如下面反应式2所示进行

(1)将化合物1经氧化反应得到中间体化合物D，所述氧化反应的具体条件是本领域技术人员的常规选择，例如，可在例如二氯甲烷(DCM)等的有机溶剂中用例如三氧化铬吡啶(PDC)等的氧化剂进行；

(2)将化合物D经还原反应得到中间体化合物E，所述还原反应的具体条件是本领域技术人员的常规选择，例如，可在例如甲醇(MeOH)-四氢呋喃(THF)的混合溶剂等的有机溶剂中在例如三氯化铈(CeCl₃)的催化剂存在下用例如NaBH₄等的还原剂进行；

(3)将化合物E经叠氮化反应得到中间体化合物F，所述叠氮化反应的具体条件是本领域技术人员的常规选择，例如，可在例如四氢呋喃等的有机溶剂中用例如偶氮二甲酸二乙酯-叠氮化磷酸二苯酯-三苯基膦等的叠氮化试剂进行；

(4)将化合物F经还原反应得到中间体化合物G，所述还原反应的具体条件是本领域技术人员的常规选择，例如，可在例如四氢呋喃-水的混合溶剂等的有机溶剂中用例如三苯基膦的还原剂进行；

其中，各取代基的定义如通式I中所定义。

利用本发明所得的蟾毒配基衍生物或其药学上可接受的盐可给药于人，可以口服、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、局部给药(粉剂、软膏剂或滴剂)。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，上述组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

因此，在本发明的第三方面，还提供了一种药物组合物，它含有治疗有效量的选自根据本发明蟾毒配基衍生物和其药学上可接受的盐中的一种或多种作为活性成分，以及任选的药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂、辅料和/或稀释剂。

在本发明第四方面，提供了根据本发明的蟾毒配基衍生物或其药学上可接受的盐、和包含该衍生物的药物组合物在制备用于治疗恶性肿瘤的药物中的用途，其包括给具有该需要的患者给药治疗有效量的选自根据本发明的蟾毒配基衍生物和其药学上可接受的盐中的一种或多种，或根据本发明的包含治疗有效量的选自根据本发明的蟾毒配基衍生物和其药学上可接受的盐中的一种或多种作为活性成分的药物组合物。本发明所述的化合物或其药学上可接受的盐可以单独给药，或者与其他药学上可接受的治疗剂联合给药，特别是与其他抗肿瘤病药物组合。所述治疗剂包括但不限于：作用于DNA化学结构的药物抗肿瘤药如顺铂，影响核酸合成的抗肿瘤药物如甲氨蝶呤(MTX)、5-氟尿嘧啶(5FU)等，影响核酸转录的抗肿瘤药物如阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素、光辉霉素等，作用于微管蛋白合成的抗肿瘤药物如紫杉醇、长春瑞滨等，芳香化酶抑制剂如氨鲁米特、兰特隆、来曲唑、瑞宁德等，细胞信号通路抑制剂如表皮生长因子受体抑制剂伊马替尼(Imatinib)、吉非替尼(Gefitinib)、埃罗替尼(Erlotinib)、拉帕替尼(Lapatinib)等。待组合的各成分可同时或顺序地给予，以单一制剂形式或以不同制剂的形式给予。所述组合不仅包括本发明的化合物和一种其它活性剂的组合，而且包括本发明的化合物和两种或更多种其它活性剂的组合。

因此，在本发明的第五方面，提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的选自根据本发明的蟾毒配基衍生物和其药学上可接受的盐中的一种或多种作为活性成分以及其他药学上可接受的治疗剂，特别是其他抗肿瘤药物。所述药物组合物任选可以进一步包含药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂、辅料和/或稀释剂。

在本发明的第六方面，提供了一种治疗恶性肿瘤的方法，所述方法包括给具有该需要的患者给药治疗有效量的选自根据本发明的蟾毒配基衍生物和其药学上可接受的盐中的一种或多种，或根据本发明的包含治疗有效量的选自根据本发明的蟾毒配基衍生物和其药学上可接受的盐中的一种或多种作为活性成分的药物组合物。

在本发明中，所述恶性肿瘤非限制性地包括肝癌、肺癌、乳腺癌、胃癌、食道癌、结肠癌、白血病、淋巴癌、前列腺癌、肾癌、皮肤癌、胰腺癌、卵巢癌、脑癌、骨髓癌和纤维肉瘤等；优选为肝癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌、胃癌、白血病等。

本发明设计与合成了一类新型的蟾毒配基衍生物，其对对肿瘤细胞株具有抑制活性，可用作治疗恶性肿瘤的药物。本发明化合物合成简单，易于制备，且合成原料丰富。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。本发明的实验操作具有通用性，不限于发明中提到的化合物。

下述制备例中，¹H-NMR用Varian Mercury AMX300型仪测定。MS用VG ZAB-HS或VG-7070型以及Esquire 3000 plus-01005测定。所有溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用的无水溶剂均是按标准方法干燥处理获得。除说明外，所有反应均是在氩气保护下进行并用TLC跟踪，后处理时均经饱和食盐水洗和无水硫酸镁干燥过程。产品的纯化除说明外均使用硅胶(200-300目)的柱色谱法，所使用的硅胶包括200-300目，GF₂₅₄为青岛海洋化工厂或烟台缘博硅胶公司生产。蟾酥用95％乙醇提取，浓缩后经两次柱层析得到蟾毒灵粗品，粗品经乙醇重结晶得到蟾毒灵。

实施例1化合物II1B-01的制备

在50mL圆底烧瓶中，将氯甲酸对硝基苯酯(1.206g，6mmol)溶于10mL无水二氯甲烷中，加入干燥吡啶(0.67mL)，立刻出现白色沉淀，氮气保护条件下滴加蟾毒灵(2mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)，在室温下搅拌6小时，反应完毕后用水洗涤两次，无水硫酸钠干燥后，减压浓缩经硅胶柱层析(90∶10，石油醚/丙酮)得到中间体A。

在10mL圆底烧瓶中，将中间体A溶于3mL二氯甲烷中，加入三乙胺(35μL)，加入N，N-二甲基乙二胺(6mmol)，在室温下搅拌2小时(以下类似反应的反应时间由薄层层析检测确定)，反应完毕后用饱和碳酸钠溶液洗涤一次，反复用水洗涤直至溶液澄清，无水硫酸钠干燥后，减压浓缩经硅胶柱层析(石油醚/丙酮/氨水，50∶50∶0.5)，得到产物II1B-01，产率为91％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.4Hz)，7.23(d，1H，J＝2.4Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，5.00(br s，1H)，3.40(s，2H)，2.94(s，3H)，2.77(t，2H，J＝6.3Hz)，2.46(s，3H)，1.08-2.21(m，22H)，0.95(s，3H)，0.70(s，3H)；¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)δ16.7，21.5，21.6，24.1，25.5，26.7，28.9，29.8，30.9，32.9，35.4，36.0，36.4，37.4，37.4，41.0，42.5，48.5，48.6，49.8，51.4，71.4，85.4，115.4，122.9，147.0，148.7，155.5，162.6；ESI-MS(m/z)501.4[M+1]⁺。

实施例2化合物II1B-02的制备

反应操作如化合物II1B-01的制备，原料用N，N-二乙基乙二胺代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率为78％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.84(dd，1H，J＝9.6，2.4Hz)，7.22(d，1H，J＝2.4Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，5.21(br s，1H)，3.23(d，2H，J＝5.4Hz)，2.55(m，6H)，1.02(t，6H，J＝7.2Hz)，1.09-2.26(m，22H)，0.94(s，3H)，0.69(s，3H)；¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)δ11.8，11.8，16.7，21.5，21.6，23.9，25.5，26.6，28.9，29.9，30.9，32.9，35.3，36.0，36.9，38.7，41.0，42.5，47.1，47.1，48.5，51.4，52.1，70.7，85.5，115.4，122.9，147.1，148.7，156.6，162.6；ESI-MS(m/z)529.5[M+1]⁺。

实施例3化合物II1B-03的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用N，N，N′-三甲基乙二胺代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/三乙胺(60∶40∶0.5)，产率为90％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.4Hz)，7.22(d，1H，J＝2.4Hz)，6.24(d，1H，J＝9.6Hz)，4.99(brs，1H)，3.36(t，2H，J＝7.2Hz)，3.36(s，3H)，2.44(t，2H，J＝7.2Hz)，2.26(s，6H)，1.20-2.20(m，22H)，0.94(s，3H)，0.69(s，3H)；¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)δ16.7，21.5，21.6，24.1，25.5，26.6，28.9，29.8，30.9，32.9，34.6，35.3，36.0，37.4，41.0，42.5，47.1，45.9，48.5，51.4，57.0，57.4，71.2，85.4，115.4，122.9，147.1，148.7，156.1，162.6；ESI-MS(m/z)515.3[M+1]⁺。

实施例4化合物II1B-04的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用N，N-二甲基-N′-乙基乙二胺代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/三乙胺(60∶40∶0.5)，产率为73％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.4Hz)，7.23(d，1H，J＝2.4Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，5.01(brs，1H)，3.31(m，4H)，2.46(t，2H，J＝6.9Hz)，2.27(s，6H)，1.21-2.20(m，22H)，1.13(t，3H，J＝7.2Hz)，0.94(s，3H)，0.69(s，3H)；ESI-MS(m/z)529.4[M+1]⁺。

实施例5化合物II1B-05的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用N-乙基乙二胺代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率为72％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.4Hz)，7.22(d，1H，J＝2.4Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，4.98(br s，1H)，3.27(q，2H，J＝6.0Hz)，2.75(t，2H，J＝6.0Hz)，2.65(t，2H，J＝6.0Hz)，1.12-2.45(m，22H)，1.10(t，3H，J＝7.2Hz)，0.93(s，3H)，0.69(s，3H)；ESI-MS(m/z)501.4[M+1]⁺。

实施例6化合物II1B-06的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用N，N′-二乙基乙二胺代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率为91％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.4Hz)，7.23(d，1H，J＝2.4Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，5.01(br s，1H)，3.34(m，4H)，2.67(t，2H，J＝7.2Hz)，1.16-2.24(m，22H)，1.11(t，6H，J＝7.2Hz)，0.95(s，3H)，0.70(s，3H)；¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)δ14.0，15.4，16.7，21.5，21.6，24.1，25.6，26.7，28.9，29.8，31.0，32.9，35.4，36.0，37.5，41.0，42.5，42.7，44.2，47.0，48.1，48.5，51.4，71.1，85.4，115.4，122.9，147.1，148.7，156.1，162.6；ESI-MS(m/z)529.5[M+1]⁺。

实施例7化合物II1B-09的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用1，2-乙二胺代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率为85％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(d，1H，J＝9.7Hz)，7.22(s，1H)，6.24(d，1H，J＝9.7Hz)，4.98(s，1H)，3.40(t，2H，J＝6.6Hz)，3.21(t，2H，J＝6.6Hz)，2.44(m，1H)，1.13-2.50(m，21H)，0.90(s，3H)，0.67(s，3H)；ESI-MS(m/z)473.3[M+1]⁺。

实施例8化合物II1B-10的制备

反应反应操作如II1B-01的制备，原料用1，3-丙二胺代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率为85％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.84(d，1H，J＝9.7Hz)，7.23(s，1H)，6.26(d，1H，J＝9.7Hz)，5.03(s，1H)，4.98(s，1H)，3.27(m，2H)，2.78(t，2H，J＝6.6Hz)，2.45(m，1H)，1.13-2.48(m，23H)，0.94(s，3H)，0.70(s，3H)；ESI-MS(m/z)487.3[M+1]⁺。

实施例9化合物II1B-07的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用N，N’-二甲基丙二胺代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率为91％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(d，1H，J＝9.6Hz)，7.22(s，1H)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，4.99(br s，1H)，3.32(t，2H，J＝6.0Hz)，2.89(s，3H)，2.58(t，2H，J＝6.3Hz)，2.42(s，3H)，1.16-2.41(m，24H)，0.94(s，3H)，0.69(s，3H)；ESI-MS(m/z)515.3[M+1]⁺。

实施例10化合物II1B-08的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用N，N-二乙基N’-甲基丙二胺代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率为86％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.4)，7.22(d，1H，J＝2.4Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，4.96(br s，1H)，3.23(m，2H)，2.52(m，6H)，1.16-2.24(m，24H)，1.05(t，6H，J＝7.2Hz)，0.93(s，3H)，0.69(s，3H)；ESI-MS(m/z)557.4[M+1]⁺。

实施例11化合物II1D-01的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用哌啶代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮(80∶20)，产率为74％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.7Hz)，7.23(d，1H，J＝2.7Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，5.01(br s，1H)，3.41(m，4H)，1.17-2.49(m，28H)，0.95(s，3H)，0.70(s，3H)；ESI-MS(m/z)520.4[M+23]⁺。

实施例12化合物II1D-04的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用4-羟基哌啶代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮(70∶30)，产率为97％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.4Hz)，7.23(d，1H，J＝2.4Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，5.00(br s，1H)，3.88(m，3H)，3.09(m，2H)，1.17-2.49(m，26H)，0.95(s，3H)，0.70(s，3H)；¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)δ16.7，21.5，21.6，24.1，25.5，26.7，28.9，29.9，31.0，33.0，34.3，34.3，35.4，36.0，37.4，41.0，41.4，41.4，42.5，48.6，51.4，67.7，71.3，85.5，115.5，122.9，147.1，148.8，155.5，162.7；ESI-MS(m/z)514.4[M+1]⁺。

实施例13化合物II1D-05的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用哌嗪代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率87％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.4Hz)，7.23(d，1H，J＝2.4Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，5.02(br s，1H)，3.45(t，4H，J＝5.1Hz)，2.84(t，4H，J＝5.1Hz)，1.06-2.49(m，22H)，0.95(s，3H)，0.70(s，3H)；¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)δ16.7，21.5，21.6，24.1，25.5，26.6，28.9，29.8，31.0，32.9，35.4，36.0，37.4，41.0，42.5，44.8，44.8，45.9，45.9，48.5，51.4，71.3，85.4，115.4，122.9，147.1，148.7，155.2，162.6；ESI-MS(m/z)499.3[M+1]⁺。

实施例14化合物II1D-03的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用N-甲基哌嗪代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(80∶20∶0.5)，产率83％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.7Hz)，7.23(d，1H，J＝2.7Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，5.02(br s，1H)，3.49(t，4H，J＝4.8Hz)，2.39(t，4H，J＝4.8Hz)，2.30(s，3H)，1.10-2.48(m，22H)，0.95(s，3H)，0.70(s，3H)；ESI-MS(m/z)513.3[M+1]⁺。

实施例15化合物II1E-01的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用4-氨基哌啶代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率81％。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.85(dd，1H，J＝9.6，2.5Hz)，7.22(d，1H，J＝2.5Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，5.60(br s，1H)，5.00(br s，1H)，4.09(br s，2H)，2.83(m，5H)，1.04-2.48(m，26H)，0.95(s，3H)，0.69(s，3H)；¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)δ16.7，21.6，21.6，24.1，25.5，26.7，28.9，29.9，30.9，33.0，35.4，35.6，35.6，36.1，37.4，41.1，42.6，42.9，42.9，48.6，48.9，51.4，71.2，85.5，115.5，122.9，147.0，148.7，155.2，162.6；ESI-MS(m/z)513.3[M+1]⁺。

实施例16化合物II1E-02的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用4-氨甲基哌啶代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率86％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.4Hz)，7.23(d，1H，J＝2.4Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，5.00(br s，1H)，4.14(br s，2H)，2.74(t，2H，J＝4.2Hz)，2.59(d，1H，J＝6.6Hz)，1.05-2.48(m，27H)，0.95(s，3H)，0.70(s，3H)；ESI-MS(m/z)527.4[M+1]⁺。

实施例17化合物II1E-03的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用2-氨甲基哌啶代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率94％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.4Hz)，7.23(d，1H，J＝2.4Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，4.98(br s，1H)，3.10(m，1H)，3.08(m，2H)，2.63(m，2H)，1.05-2.46(m，26H)，0.94(s，3H)，0.70(s，3H)；ESI-MS(m/z)527.5[M+1]⁺。

实施例18化合物II1E-04的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用4-氨基-N-甲基哌啶代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率83％。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.83(d，1H，J＝9.7Hz)，7.23(s，1H)，6.26(d，1H，J＝9.7Hz)，4.98(br s，1H)，3.74(m，1H)，3.54(d，2H，J＝11.2Hz)，2.80(m，5H)，1.06-2.45(m，26H)，0.94(s，3H)，0.69(s，3H)；ESI-MS(m/z)527.3[M+1]⁺。

实施例19化合物II1E-05的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用4-氨基-1-乙酰哌啶代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮(50∶50)，产率81％。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.84(d，1H，J＝9.7Hz)，7.22(s，1H)，6.23(d，1H，J＝9.7Hz)，5.67(d，1H，J＝7.8Hz)，4.97(br s，1H)，4.08(d，2H，J＝13.8Hz)，3.91(m，1H)，2.88(m，4H)，2.45(m，1H)，1.20-2.40(m，25H)，0.93(s，3H)，0.68(s，3H)；ESI-MS(m/z)555.2[M+1]⁺。

实施例20化合物II1D-06的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用高哌嗪代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率86％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.4Hz)，7.23(d，1H，J＝2.4Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，5.03(br s，1H)，3.52(m，4H)，2.93(t，2H，J＝5.1Hz)，2.87(m，2H)，1.17-2.46(m，24H)，0.95(s，3H)，0.70(s，3H)；¹³C NMR(CDCl₃，75MHz)δ16.7，21.6，21.7，24.2，25.6，26.7，28.9，29.9，30.6，31.1，33.0，35.4，36.1，37.5，41.1，42.6，46.0，48.2，48.6，49.5，49.7，51.5，71.1，85.5，115.5，122.9，147.1，148.8，156.0，162.6；ESI-MS(m/z)513.3[M+1]⁺。

实施例21化合物II1D-19的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用咪唑啉代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率43％。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.84(dd，1H，J＝9.7，3.0Hz)，7.23(d，1H，J＝3.0Hz)，6.27(d，1H，J＝9.7Hz)，5.03(br s，1H)，4.15(s，1H)，4.12(s，1H)，3.47(m，2H)，3.29(s，1H)，2.98(m，2H)，2.46(m，1H)，1.18-2.22(m，21H)，0.95(s，3H)，0.70(s，3H)；ESI-MS(m/z)485.3[M+1]⁺。

实施例22化合物II1D-20的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用六氢嘧啶代替N，N-二甲基乙二胺；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率36％。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.84(d，1H，J＝9.6Hz)，7.22(s，1H)，6.26(d，1H，J＝9.6Hz)，5.02(br s，1H)，4.28(s，2H)，3.61(t，1H，J＝3.0Hz)，3.52(m，1H)，3.25(s，1H)，2.98(t，1H，J＝3.0Hz)，2.82(m，1H)，2.45(m，1H)，1.24-2.24(m，23H)，0.95(s，3H)，0.70(s，3H)；ESI-MS(m/z)485.3[M+1]⁺。

实施例23化合物II1D-22的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用哌啶-4-酮代替N，N-二甲基乙二胺，得中间体，中间体与甲胺反应经氰基硼氢化钠还原，硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率45％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.84(dd，1H，J＝9.6，2.7Hz)，7.22(d，1H，J＝2.7Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，4.99(br s，1H)，4.07(br s，2H)，2.86(t，2H，J＝10.5Hz)，2.52(m，3H)，2.44(s，3H)，2.20(m，1H)，1.30-2.20(m，26H)，0.94(s，3H)，0.69(s，3H)；ESI-MS(m/z)527.7[M+1]⁺。

实施例24化合物II1D-23的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用哌啶-4-酮代替N，N-二甲基乙二胺，得中间体，中间体与乙胺反应经氰基硼氢化钠还原，硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率47％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.7Hz)，7.25(d，1H，J＝2.7Hz)，6.26(d，1H，J＝9.6Hz)，5.00(br s，1H)，4.10(br s，2H)，2.84(t，2H，J＝10.5Hz)，2.69(q，2H，J＝6.00Hz)，1.25-2.48(m，26H)，1.20(t，3H，J＝6.00Hz)，0.95(s，3H)，0.70(s，3H)；ESI-MS(m/z)541.4[M+1]⁺。

实施例25化合物II1D-24的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用哌啶-4-酮代替N，N-二甲基乙二胺，得中间体，中间体与2-羟基乙胺反应经氰基硼氢化钠还原，硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率46％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.7Hz)，7.22(d，1H，J＝2.7Hz)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，4.99(br s，1H)，3.66(t，2H，J＝6.0Hz)，2.82(t，2H，J＝6.0Hz)，2.65(m，1H)，2.44(m，1H)，2.20(m，1H)，1.02-2.50(m，25H)，0.93(s，3H)，0.69(s，3H)；ESI-MS(m/z)557.4[M+1]⁺。

实施例26化合物II1D-25的制备

反应操作如II1B-01的制备，原料用哌啶-4-酮代替N，N-二甲基乙二胺，得中间体，中间体与二甲胺反应经氰基硼氢化钠还原，硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率46％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.7Hz)，7.25(d，1H，J＝2.7Hz)，6.26(d，1H，J＝9.6Hz)，5.01(br s，1H)，4.18(br s，2H)，2.78(t，2H，J＝10.5Hz)，2.45(m，1H)，2,29(s，6H)，1.15-2.50(m，25H)，0.96(s，3H)，0.70(s，3H)；ESI-MS(m/z)541.4[M+1]⁺。

实施例27化合物II1D-07的制备

在10mL圆底烧瓶中，将化合物II1D-05(30mg，0.06mmol)溶于2mL无水二氯甲烷中，加入3-异氰酰丙酸乙酯(0.18mmol)，在室温下搅拌2小时，反应完毕后用水洗涤两次，无水硫酸钠干燥后，减压浓缩经硅胶柱层析(氯仿/丙酮，85∶15)，得到产物II1D-07，产率98％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(d，1H，J＝9.6Hz)，7.22(s，1H)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，5.26(t，1H-N，J＝5.4Hz)，5.03(br s，1H)，4.14(q，2H，J＝6.9Hz)，3.50(m，6H)，3.36(m，4H)，2.54(t，2H，J＝5.7Hz)，1.26(t，3H，J＝6.9Hz)，1.16-2.47(m，22H)，0.95(s，3H)，0.69(s，3H)；ESI-MS(m/z)642.4[M+1]⁺。

实施例28化合物II1D-08的制备

反应操作如II1D-07的制备，原料用异氰酸环己酯代替3-异氰酰丙酸乙酯；硅胶柱层析洗脱液：氯仿/丙酮(85∶15)，产率83％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.9，2.4Hz)，7.22(d，1H，J＝2.4Hz)，6.25(d，1H，J＝9.9Hz)，5.03(br s，1H)，4.26(d，1H-N，J＝7.2Hz)，3.63(m，1H)，3.47(m，4H)，3.35(m，4H)，1.02-2.48(m，32H)，0.95(s，3H)，0.69(s，3H)；ESI-MS(m/z)624.3[M+1]⁺。

实施例29化合物II1D-09的制备

反应操作如II1D-07的制备，原料用苄基异氰酸酯代替3-异氰酰丙酸乙酯；硅胶柱层析洗脱液：氯仿/丙酮(85∶15)，产率92％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(d，1H，J＝9.9Hz)，7.32(m，5H)，7.22(s，1H)，6.24(d，1H，J＝9.9Hz)，5.03(br s，1H)，4.76(br s，1H-N)，4.22(d，2H，J＝5.4Hz)，3.49(m，4H)，3.40(m，4H)，1.16-2.48(m，22H)，0.94(s，3H)，0.69(s，3H)；ESI-MS(m/z)632.5[M+1]⁺。

实施例30化合物II1D-10的制备

在10mL圆底烧瓶中，将化合物II1D-05(30mg，0.06mmol)溶于2mL无水二氯甲烷中，依次加入三乙胺(25μL)和甲磺酰氯(0.18mmol)，在室温下搅拌2小时，反应完毕后用水洗涤两次，无水硫酸钠干燥后，减压浓缩经硅胶柱层析(石油醚/丙酮，80∶20)，得到化合物II1D-10，产率95％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(d，1H，J＝9.9Hz)，7.23(s，1H)，6.26(d，1H，J＝9.9Hz)，5.05(br s，1H)，3.60(t，4H，J＝4.5Hz)，3.22(t，4H，J＝4.5Hz)，2.80(s，3H)，1.20-2.49(m，22H)，0.94(s，3H)，0.69(s，3H)；ESI-MS(m/z)577.2[M+1]⁺。

实施例31化合物II1D-11的制备

反应操作如II1D-10的制备，原料用对甲苯磺酰氯代替甲磺酰氯；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮(80∶20)，产率92％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.82(d，1H，J＝9.6Hz)，7.62(d，2H，J＝8.1Hz)，7.33(d，2H，J＝8.1Hz)，7.22(s，1H)，6.24(d，1H，J＝9.6Hz)，4.95(br s，1H)，3.55(t，4H，J＝5.1Hz)，2.97(t，4H，J＝5.1Hz)，2.43(s，3H)，1.20-2.49(m，22H)，0.92(s，3H)，0.68(s，3H)；ESI-MS(m/z)653.4[M+1]⁺。

实施例32化合物II1D-12的制备

反应操作如II1D-10的制备，原料用2-(磺酰氯)苯甲酸甲酯代替甲磺酰氯；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮(70∶30)，产率93％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(m，2H)，7.62(m，2H)，7.49(d，1H，J＝9.6Hz)，7.22(s，1H)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，4.98(br s，1H)，3.94(s，3H)，3.55(t，4H，J＝5.1Hz)，3.19(t，4H，J＝5.1Hz)，1.20-2.49(m，22H)，0.94(s，3H)，0.69(s，3H)；ESI-MS(m/z)697.3[M+1]⁺。

实施例33化合物II1D-13的制备

反应操作如II1D-10的制备，原料用邻硝基苯磺酰氯代替甲磺酰氯；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮(70∶30)，产率90％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.99(dd，1H，J＝7.2，1.8Hz)，7.83(d，1H，J＝9.6Hz)，7.74(m，2H)，7.63(dd，1H，J＝7.2，1.8Hz)，7.26(s，1H)，6.25(d，1H，J＝9.6Hz)，5.01(br s，1H)，3.57(t，4H，J＝5.1Hz)，3.30(t，4H，J＝5.1Hz)，1.20-2.49(m，22H)，0.95(s，3H)，0.69(s，3H)；ESI-MS(m/z)684.7[M+1]⁺。

实施例34化合物II1D-14的制备

在10mL圆底烧瓶中，将化合物II1D-05(30mg，0.06mmol)溶于2mL无水二氯甲烷中，依次加入吡啶(15μL)和相应乙酸酐(0.18mmol)，在室温下搅拌2小时，反应完毕后用水洗涤两次，无水硫酸钠干燥后，减压浓缩经硅胶柱层析(石油醚/丙酮70∶30)，得到化合物II1D-14，产率83％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(d，1H，J＝9.9Hz)，7.23(s，1H)，6.25(d，1H，J＝9.9Hz)，5.04(br s，1H)，3.60(t，2H，J＝5.1Hz)，3.47(t，6H，J＝5.1Hz)，2.11(s，3H)，1.20-2.49(m，22H)，0.95(s，3H)，0.69(s，3H)；ESI-MS(m/z)541.2[M+1]⁺。

实施例35化合物II1D-15的制备

反应操作如II1D-14的制备，原料用草酰氯单乙酯代替乙酸酐；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮(70∶30)，产率89％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(d，1H，J＝9.6Hz)，7.23(s，1H)，6.26(d，1H，J＝9.6Hz)，5.05(br s，1H)，4.35(q，2H，J＝7.2Hz)，3.63(t，2H，J＝5.1Hz)，3.54(t，4H，J＝5.1Hz)，3.45(t，2H，J＝5.1Hz)，1.37(t，3H，J＝7.2Hz)，1.20-2.49(m，22H)，0.96(s，3H)，0.70(s，3H)；ESI-MS(m/z)599.3[M+1]⁺。

实施例36化合物II1D-16的制备

反应操作如II1D-14的制备，原料用苯甲酰氯代替乙酸酐；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮(70∶30)，产率86％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ8.08(d，1H，J＝9.9Hz)，7.58(m，5H)，7.23(s，1H)，6.26(d，1H，J＝9.9Hz)，5.05(br s，1H)，3.76(m，2H)，3.50(m，6H)，1.20-2.49(m，22H)，0.94(s，3H)，0.69(s，3H)；ESI-MS(m/z)603.4[M+1]⁺。

实施例37化合物III1A-01的制备

室温条件下，蟾毒灵(1mmol)用二氯甲烷(DCM)溶解于25mL的圆底烧瓶中，缓慢加入三氧化铬吡啶PDC(4mmol)，反应过夜，反应液过滤得红棕色液体，减压蒸馏除去溶剂，经硅胶柱层析(石油醚∶丙酮＝5∶1)得白色固体D。

0℃条件下，七水合三氯化铈(1.3mmol)用甲醇溶于25mL的圆底烧瓶中，缓慢加入硼氢化钠(NaBH₄)(1.2mmol)，将反应体系温度降至-78℃，缓慢加入上述化合物D(1mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液，反应1小时，滴加1mL水，然后将溶液升至室温，减压蒸馏除去溶剂，再用二氯甲烷溶解，分别用水、饱和食盐水洗涤，有机相减压蒸馏除去溶剂得白色固体E，直接投下一步反应。

冰浴条件，氮气保护下，上述产物白色固体E(1mmol)和三苯基膦(TPP，2mmol)用无水四氢呋喃溶解(10mL)，加入叠氮磷酸二苯酯(DPPA)，然后缓慢加入偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)，溶液颜色逐渐变黄，将反应体系温度升至室温，搅拌过夜，减压蒸馏除去溶剂，用二氯甲烷溶解，分别用水、饱和食盐水洗涤，收集有机相，减压蒸馏得黄色油状物，经硅胶柱层析(石油醚∶丙酮＝6∶1)得白色固体F。

上述固体F(1mmol)和三苯基膦(1.2mmol)用四氢呋喃10mL溶解，加入1mL水，在70℃回流过夜，减压蒸馏除去溶剂，用二氯甲烷溶解，分别用水、饱和食盐水洗涤，收集有机相，减压蒸馏除去溶剂得黄色油状物，经硅胶柱层析，先用石油醚∶丙酮＝4∶1洗脱，然后用石油醚/丙酮/氨水(20∶10∶0.1)洗脱得白色固体III1A-01。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.85(dd，1H，J＝9.6，2.7Hz)，7.23(d，1H，J＝2.7Hz)，6.27(d，1H，J＝9.6Hz)，5.30(br s，1H)，3.48(br s，1H)，3.27(br s，1H)，2.45(d，1H，J＝2.7Hz)，1.20-2.49(m，21H)，0.95(s，3H)，0.70(s，3H)；ESI-MS(m/z)386.4[M+1]⁺。

实施例38化合物III1D-02的制备

室温条件下，化合物III1A-01(1mmol)用二氯甲烷溶解于10mL的圆底烧瓶中，氮气保护下加入碳酰二咪唑(3mmol)，三乙胺(3mmol)反应2小时，反应液经水洗干燥后加入哌嗪(3mmol)和三乙胺(3mmol)，反应3小时，反应结束后，反应液经水洗干燥后经硅胶柱层析(石油醚/丙酮/氨水，50∶50∶0.5)得产物，产率60％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.83(dd，1H，J＝9.6，2.4Hz)，7.23(d，1H，J＝2.4Hz)，6.26(d，1H，J＝9.6Hz)，4.65(d，1H，J＝6.0Hz)，4.12(s，1H)，3.34(t，4H，J＝5.1Hz)，2.88(t，4H，J＝5.1Hz)，2.46(m，1H)，1.04-2.40(m，21H)，0.95(s，3H)，0.70(s，3H)；ESI-MS(m/z)498.3[M+1]⁺。

实施例39化合物III1D-03的制备

反应操作如III1D-02的制备，原料用N-甲基哌嗪代替哌嗪；硅胶柱层析洗脱液：石油醚/丙酮/氨水(50∶50∶0.5)，产率53％。1H NM

蟾毒配基衍生物及其制备方法、包含该衍生物的组合物、及其用途专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。