专利摘要

本发明涉及医药技术领域。目的是提供黄芪苷酸在制备抗血栓药物中的应用。本发明公开了黄芪甲苷的定向衍生物黄芪苷酸在制备抗血栓药物中的应用。黄芪苷酸能够明显延长血液的凝血时间，有效预防血栓的形成。药理实验表明，黄芪苷酸较黄芪甲苷对血栓的预防作用更加可靠、有效，且黄芪苷酸的成药性也较黄芪甲苷明显增强。同时，黄芪苷酸是由天然化合物黄芪甲苷加工得到的，其加工方法简单、收率高，理化性质稳定，储存条件简易，制剂方便，能够制成多种剂型，便于服用，黄芪苷酸作为一种抗血栓药物开发，应用前景广阔，具有巨大的市场潜力和社会价值。

权利要求

1.一种黄芪苷酸或其衍生物的药物新用途，其特征在于：黄芪苷酸或其衍生物用于制备抗血栓药物，所述黄芪苷酸或其衍生物的结构式为：

其中，R为氢离子或金属盐离子或饱和烷基或氨基中的一种。

2.根据权利要求1所述的黄芪苷酸或其衍生物的药物新用途，其特征在于：所述的抗血栓药物为抗凝血的药物。

3.根据权利要求1所述的黄芪苷酸或其衍生物的药物新用途，其特征在于：所述的抗血栓为抗静脉血栓。

4.根据权利要求1所述的黄芪苷酸或其衍生物的药物新用途，其特征在于：所述的黄芪苷酸或其衍生物配合药学可接受的载体、辅剂或媒介物。

5.根据权利要求1所述的黄芪苷酸或其衍生物的药物新用途，其特征在于：所述的饱和烷基为C₁～C₅的支链或支链烷基。

6.根据权利要求1所述的黄芪苷酸或其衍生物的药物新用途，其特征在于：所述衍生物是黄芪苷酸钠、黄芪苷酸甲酯、黄芪苷酰胺中的一种。

7.根据权利要求1-4中任意一项所述的黄芪苷酸或其衍生物的药物新用途，其特征在于：所述的药物为片剂、胶囊剂或注射剂。

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及黄芪苷酸及其衍生物在制备抗血栓药物中的应用。

背景技术

血栓是血液成分在人体局部血管内的异常聚集，随着人们生活水平的不断提高，血栓性疾病的发病率逐年增加。血栓形成的原因包括心、血管内膜损伤、血流改变和血液性质改变，其形成过程是由遗传因素和环境因素相互作用、相互影响的多因素变化过程。机体的正常凝血，主要依赖于完整的血管壁结构和功能、有效的血小板质量和数量、正常的血浆凝血因子活性。中老年人更容易形成血栓，这是因为随着人年龄的增长，体内纤溶系统功能逐渐降低，血液中凝血与抗凝血功能失去平衡而出现异常凝血，即血栓。

血栓性疾病的发病率、致死率和致残率非常高。动脉血栓形成是造成90％以上的心肌梗死、80％脑卒中的主要原因，是发达国家位列首位的死亡原因；静脉血栓栓塞病也是发达国家位列第三位的死亡原因。它是严重危害人类健康的疾病之一，也是世界各国医药学家研究的热点。随着对血栓形成机理的认识加深，用于预防和治疗血栓的药物也在不断研发，目前临床上主要分为3类，抗血小板的药物、抗凝血的药物和溶解血栓的药物，寻求一种有效、可靠的抗血栓药物仍具有重要意义。

黄芪苷酸是对黄芪甲苷分子进行化学改造，选择性地将黄芪甲苷分子中葡萄糖基上的C₆处羟甲基定向氧化为羧基后得到的产物。黄芪甲苷是中药黄芪的主要活性成分之一，也是《中国药典》中多种中药复方制剂的定性定量指标成分，具有改善心肺功能、增强机体免疫力等多种药理作用。而黄芪苷酸较黄芪甲苷水溶性明显增强，可以作为单方制剂开发，尤其是其盐特别适合作为注射液、大输液等水溶性剂型的开发。

发明内容

本发明的目的是提供黄芪苷酸及其衍生物在制备抗血栓药物中的应用。

为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：黄芪苷酸或其衍生物的药物新用途，其特征在于：黄芪苷酸或其衍生物用于制备抗血栓药物，所述黄芪苷酸或其衍生物的结构式为：

其中，R为氢离子或金属盐离子或饱和烷基或氨基中的一种。

优选的：所述的抗血栓药物为抗凝血的药物。

优选的：所述的抗血栓为抗静脉血栓。

优选的：所述的药物中还包括药学可接受的载体、辅剂或媒介物。

优选的：所述的饱和烷基为C₁～C₅的支链或支链烷基。

优选的：所述衍生物是黄芪苷酸钠、黄芪苷酸甲酯、黄芪苷酰胺中的一种。

上述的药物制成片剂、胶囊剂或注射剂。

本发明公开了黄芪甲苷的定向衍生物黄芪苷酸在制备抗血栓药物中的应用。黄芪苷酸能够明显延长血液的凝血时间，有效预防血栓的形成。药理学实验表明，黄芪苷酸对于普纳替尼和花生四烯酸诱导的血栓均有良好的预防作用，且预防作用较黄芪甲苷更加可靠、有效，且黄芪苷酸的成药性也较黄芪甲苷明显增强。同时，黄芪苷酸是由天然化合物黄芪甲苷加工得到的，其加工方法简单、收率高，理化性质稳定，储存条件简易，制剂方便，能够制成多种剂型、便于服用，黄芪苷酸作为一种抗血栓药物开发，应用前景广阔，具有巨大的市场潜力和社会价值。

附图说明

图1为各实验组对普纳替尼诱导斑马鱼形成血栓的心脏红细胞染色强度定量评价(n＝10)与模型对照组比较，***Ρ<0.001；

图2为各实验组对普纳替尼诱导斑马鱼形成血栓的预防作用，与模型对照组比较，***Ρ<0.001；

图3为各实验组对普纳替尼诱导斑马鱼形成血栓的心脏红细胞染色强度定量评价典型图片；

图4为各实验组对普纳替尼诱导斑马鱼形成血栓的预防作用典型图片；

图5为各实验组对花生四烯酸诱导斑马鱼血栓形成定性评价典型图片；

图6为各实验组对花生四烯酸诱导斑马鱼形成血栓的心脏红细胞染色强度定量评价典型图片；

图7为各实验组对花生四烯酸诱导斑马鱼形成血栓的心脏红细胞染色强度定量评价(n＝10)与模型对照组比较，***Ρ<0.001；

图8为图2为各实验组对花生四烯酸诱导斑马鱼形成血栓的预防作用，与模型对照组比较，***Ρ<0.001。

具体实施方式

下面结合实施例1-10和附图对本发明公开的技术方案作进一步的说明。但是这些具体实验以及附图是示例性的，不能将它们视为对本发明的限制。

实施例一：抗大鼠静脉血栓形成

材料准备：动物SD大鼠40只，雌雄各半，体重190～210g。

实验方法：将SD大鼠随机分为四组，每组10只，分别设置为高、中、低剂量组和空白对照组。其中，高剂量组的给药量为10mg/kg，中剂量组为5mg/kg，低剂量组为2.5mg/kg，空白对照组不给药。

用羧甲基纤维素混匀黄芪苷酸，给各组大鼠灌胃给药一次，空白对照组用同体积的羧甲基纤维素灌胃。给药30min后，用内径为1mm的玻璃毛细管插入鼠内眦静脉丛取血，至毛细血管柱达5cm，每隔30s折断毛细管，检查有无出现血凝丝，计算毛细管采血到出现血凝丝时间，即为凝血时间。

实验结果：见表1。

表1对大鼠静脉血栓形成的影响(X土S)

注：与空白对照组比较(单因素方差分析)，*Ρ<0..05，**Ρ<0.01。

根据表1可知：黄芪苷酸能够延长凝血时间，其中低剂量组的凝血时间较空白对照组略有延长，但效果不明显；高剂量组和中剂量组均与空白对照组存在显著性差异，可明显延长凝血时间。

实施例二：对普纳替尼诱导血栓形成的预防作用

评价黄芪苷酸钠对普纳替尼诱导血栓形成的预防作用，方法如下：

1)、材料准备：选择以自然成对交配繁殖方式进行、年龄为受精后5天的野生型AB品系斑马鱼，共270尾，将其随机分为九组，每组30尾；将黄芪苷酸钠粉末用二甲基亚砜配制成250mg/ml的母液备用，4℃储存。

2)、实验方法：将九组斑马鱼分别设置为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、对照供试品组、低剂量组、中低剂量组、中剂量组、中高剂量组和高剂量组。其中，正常对照组不给药；模型对照组用普纳替尼处理建立血栓模型；阳性对照组用45μg/mL的阿司匹林(购自上海晶纯实业有限公司，用二甲基亚砜配制成规定浓度的溶液)和普纳替尼共同处理斑马鱼；对照供试品组用50μg/mL的黄芪甲苷(用二甲基亚砜配制成规定浓度的溶液)和普纳替尼共同处理斑马鱼；各剂量组由低到高分别用15.6、31.3、62.5、125和250μg/mL的黄芪苷酸钠和普纳替尼共同处理斑马鱼。

18h后，用邻联茴香胺进行染色，从各个组中随机选取10尾，在解剖显微镜(SZX7,OLYMPUS,Japan)下拍摄，用NIS-Elements D^TM图像处理软件进行图像分析，分析统计心脏红细胞染色强度(S)，以心脏红细胞染色强度的统计学意义评价“黄芪苷酸钠”对普纳替尼诱导的血栓形成预防作用。统计学处理结果用Mean±SE表示，“黄芪苷酸钠”预防血栓的作用计算公式如下：

评价结果：见表2。

表2对普纳替尼诱导斑马鱼血栓模型的预防作用

注：阳性対照药为阿司匹林；与模型对照组比较，***Ρ<0.001。

结合附图1～4及表2可知，模型对照组斑马鱼心脏红细胞染色强度(1018)与对照组(1748)比较P<0.001，该模型建立成功。阳性对照药在45μg/mL浓度有预防血栓形成作用。而黄芪甲苷在50μg/mL时，没有预防血栓形成的作用，在实际加药过程中，较高浓度的黄芪甲苷对斑马鱼有较强刺激，100μg/mL会引起6.6％的斑马鱼死亡。故黄芪甲苷在最大耐受量范围内难以对血栓形成产生有效预防作用。对黄芪苷酸钠采用的五种浓度中，250μg/mL对普纳替尼诱发的斑马鱼血栓形成有预防作用。

实施例三：对花生四烯酸诱导血栓形成的预防作用

评价黄芪苷酸甲酯对花生四烯酸诱导血栓形成的预防作用，评价方法：

1)、材料准备：选择以自然成对交配繁殖方式进行、年龄为受精后3天的黑色素等位基因突变型半透明Albino品系斑马鱼，共270尾，将其随机分为九组，每组30尾；将黄芪苷酸甲酯粉末用二甲基亚砜溶解配制成100mg/mL的母液备用，-20℃避光保存；

2)、实验方法：将九组斑马鱼分别设置为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、对照供试品组、低剂量组、中低剂量组、中剂量组、中高剂量组和高剂量组。其中，正常对照组不给药；模型对照组水溶给予花生四烯酸1.5h建立血栓模型；阳性对照组用25μg/mL的阿司匹林(购自上海晶纯实业有限公司，用二甲基亚砜配制成规定浓度的溶液)处理3h后，水溶给予花生四烯酸诱发斑马鱼血栓模型；对照供试品组用100μg/mL的黄芪甲苷(用二甲基亚砜配制成规定浓度的溶液)处理3h后，水溶给予花生四烯酸诱发斑马鱼血栓模型；各剂量组由低到高分别用6.25、12.5、25、50和100μg/mL的黄芪苷酸甲酯处理3h后，水溶给予花生四烯酸诱发斑马鱼血栓模型。

1.5h后，用邻联茴香胺进行染色，从各个组中随机选取10尾，在解剖显微镜(SZX7,OLYMPUS)下拍摄并采集数据，定性评价斑马鱼血栓形成，用NIS-Elements D3.10高级图像处理软件进行图像分析，分析统计心脏红细胞染色强度(S)，并进行分析统计，根据统计学意义评价“黄芪苷酸甲酯”和“黄芪甲苷”对斑马鱼血栓形成的预防作用。统计学处理结果用mean±SE表示，“黄芪苷酸甲酯”和“黄芪甲苷”与阿司匹林对斑马鱼血栓形成预防作用计算公式如下：

评价结果：见表将3。

表3对花生四烯酸诱导斑马鱼血栓模型的预防作用

注：阳性对照药为阿司匹林；与模型对照组比较，***Ρ<0.001。

结合附图5～8表2可知，模型对照组斑马鱼心脏红细胞染色强度(1397)与对照组(2305)比较P<0.001，该模型建立成功。阳性对照药在25μg/mL浓度有预防血栓形成作用。而黄芪甲苷在100μg/mL时，没有预防血栓形成的作用。对黄芪苷酸甲酯采用的五种浓度中，50μg/mL和100μg/mL浓度条件下对花生四烯酸诱发的斑马鱼血栓形成有预防作用。

实施例四：

评价黄芪苷酰胺抗大鼠静脉血栓形成，方法如下：

材料准备：动物SD大鼠40只，雌雄各半，体重190～210g。

实验方法：将SD大鼠随机分为四组，每组10只，分别设置为高、中、低剂量组和空白对照组。其中，高剂量组的给药量为10mg/kg，中剂量组为5mg/kg，低剂量组为2.5mg/kg，空白对照组不给药。

用羧甲基纤维素配制黄芪苷酰胺，给各组大鼠灌胃给药一次，空白对照组用同体积的羧甲基纤维素灌胃。给药30min后，用内径为1mm的玻璃毛细管插入鼠内眦静脉丛取血，至毛细血管柱达5cm，每隔30s折断毛细管，检查有无出现血凝丝，计算毛细管采血到出现血凝丝时间，即为凝血时间。

实验结果：见表4。

表4黄芪苷酰胺对大鼠静脉血栓形成的影响(X土S)

注：与空白对照组比较(单因素方差分析)，*Ρ<0..05，**Ρ<0.01。

根据表1可知：黄芪苷酰胺能够延长凝血时间，其中低剂量组的凝血时间较空白对照组略有延长，但效果不明显；高剂量组和中剂量组均与空白对照组存在显著性差异，可明显延长凝血时间。

实施例五：

含有黄芪苷酸的抗血栓片剂的制备：

将质量为0.5g的黄芪苷酸与10g的预胶化淀粉、0.3g的羧甲基纤维素钠混合均匀，制粒；向颗粒中加入0.05g的微粉硅胶，然后将干颗粒压片，即得。

实施例六：

含有黄芪苷酸的抗血栓片剂的制备：

将质量为6g的黄芪苷酸与100g的乳糖、2g的羧甲基纤维素钠混合均匀，制粒；向颗粒中加入0.4g的滑石粉，然后将干颗粒压片，即得。

实施例七：

含有黄芪苷酸的抗血栓片剂的制备：

将质量为20g的黄芪苷酸与440g的糊精、4g的4％的聚乙烯吡咯烷酮和3g的羧甲基淀粉钠混合均匀，制粒；向颗粒中加入1.4g的硬脂酸镁，然后将干颗粒压片，即得。

实施例八：

含有黄芪苷酸甲酯的抗血栓胶囊剂的制备：

将质量为2g黄芪苷酸甲酯与42g的淀粉、0.8g的羧甲基纤维素钠混合均匀，制粒；所得颗粒在55～70℃温度下干燥，过筛整粒，装入胶囊，即得。

实施例九：

含有黄芪苷酸的抗血栓胶囊剂的制备：

将质量为30g黄芪苷酸与550g的淀粉、4g的交联羧甲基纤维素钠混合均匀，然后加入50g70％的乙醇制粒；所得颗粒在55～70℃温度下干燥，过筛整粒，装入胶囊，即得。

实施例十：

含有黄芪苷酸钠的抗血栓注射剂的制备：

将质量为1g黄芪苷酸钠加入120mL的注射用水中，用0.65μm的微孔滤膜过滤，检查澄明度合格后，灌装，即得。

黄芪苷酸及其衍生物在制备抗血栓药物中的应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。