专利摘要

本发明公开了一种用于检测细菌的电化学阻抗电极的制备方法，以聚六亚甲基胍和3,4,9,10‑苝四甲酸二酐为原料，通过简单的酸酐氨解反应，合成一类新型高分子杀菌消毒剂——聚六亚甲基胍基苝。该产物不仅提高了聚六亚甲基胍的抗菌活性，而且显著改善了苝系衍生物水溶性较差的缺点。针对合成的七种苝含量不同的聚六亚甲基胍基苝，研究其抗菌活性和聚合物接苝量之间的关系。最后，将聚六亚甲基胍基苝与氧化石墨烯材料结合制备出一种可以用于细菌检测的电极。通过测试交流阻抗值的变化，观察到该电极能够有效地捕捉并杀灭细菌，而且灵敏度较高，可以很好的探测到较低浓度的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌悬浮液。

权利要求

1.一种用于检测细菌的电化学阻抗电极的制备方法，其特征在于：电极结构的特征在于：以泡沫镍为支架，引入了石墨烯结构，再通过∏-∏共轭作用负载高效抗菌剂聚六亚甲基胍基苝；

聚六亚甲基胍基苝由原料1和原料2合成，其中原料1具有反应所必需的酸酐结构，同时具有较大的平面环状共轭体系；原料2具有反应所必需的伯胺结构，同时具有较好的抗菌活性；整个合成过程运用了酸酐氨解的反应机理；

起始投料时，加入聚六亚甲基胍2g，加入不同量的3,4,9,10-苝四甲酸二酐，正丁醇8mL置于50mL的单口烧瓶中，该反应体系在氮气保护下，120℃，搅拌反应16h，经乙醇溶解、离心、旋蒸、异丙醇沉淀处理后得粗产物，再将其于70℃真空干燥24h，所得产物聚六亚甲基胍基苝为：

加入3,4,9,10-苝四甲酸二酐20mg，得终产物PBI20-PHMG；

加入3,4,9,10-苝四甲酸二酐30mg，得终产物PBI30-PHMG；

加入3,4,9,10-苝四甲酸二酐40mg，得终产物PBI40-PHMG；

加入3,4,9,10-苝四甲酸二酐50mg，得终产物PBI50-PHMG；

加入3,4,9,10-苝四甲酸二酐100mg，得终产物PBI100-PHMG；

加入3,4,9,10-苝四甲酸二酐200mg，得终产物PBI200-PHMG；

加入3,4,9,10-苝四甲酸二酐300mg，得终产物PBI300-PHMG；

得到一系列具有不同苝含量的从而表现出不同抗菌活性的聚六亚甲基胍基苝。

2.根据权利要求1所述的用于检测细菌的电化学阻抗电极的制备方法，其特征在于步骤如下：

第1步、Ni-GO的制备：首先，将400mg虫胶溶解在20mL乙醇中，配制成20mg/mL的虫胶溶液；然后将泡沫镍片浸在虫胶溶液中10min，充分浸泡后取出，自然晾干；最后，将晾干的涂层有虫胶的泡沫镍片放进管式炉中，置换气三次，氮气氛围下，进行600℃煅烧30min，从而得到泡沫Ni-GO；

第2步、Ni-GO-PBI-PHMG的制备：首先，配制一定量的浓度为1.5mg/mL的聚六亚甲基胍基苝PBI300-PHMG水溶液；然后，将第1步得到的Ni-GO充分放入上述水溶液中24h；最后，从PBI300-PHMG水溶液中取出Ni-GO，用蒸馏水冲洗三遍即得Ni-GO-PBI-PHMG。

3.根据权利要求2所述的用于检测细菌的电化学阻抗电极的制备方法，其特征在于：第2步中的聚六亚甲基胍基苝由权利要求1所得任一种聚六亚甲基胍基苝产物替代。

说明书

技术领域

本发明涉及高分子和电化学领域，合成了一种新型高效抗菌剂聚六亚甲基胍基苝，并将其与氧化石墨烯材料结合应用于电化学领域，设计出一种有效检测细菌且灵敏度较高的阻抗电极传感器。

背景技术

消毒剂是一类具有抑制和杀灭微生物作用的化学品，广泛应用在医院、家庭、工厂等领域。环保型高分子聚合物——聚六亚甲基胍(PHMG)具有优越的杀菌活性，在水溶液中能产生电离，亲水基部分含有强烈的正电性，吸附通常呈负电性的各类细菌、病毒，进入细胞膜，抑制膜内脂质体合成，造成菌体凋亡，达到最佳的杀菌效果。

苝类衍生物是一类特殊的稠环结构化合物，有研究表明，这类衍生物可以渗透细胞膜有效地进入细胞。此外，苝类衍生物具有优异的耐热、耐溶剂性能和染色性能，使得对苝类衍生物的研究得到广泛关注。本发明使用的原料之一3,4,9,10-苝四甲酸二酐(PDA)，由于具有较大的平面环状共轭体系和良好的分子平面性，使得分子间大Π键相互作用增强，具有较大的晶格能，其溶解性能很差，在大多数有机溶剂中几乎不溶，这给苝类衍生物的合成和研究造成很大的不便。为此，对PDA加以化学修饰，以提高其溶解性成为热点课题。

本发明以PHMG和PDA为原料，通过简单的酸酐酰胺化反应合成一系列不同含苝量的聚六亚甲基胍基苝(PBI-PHMG)。PBI-PHMG不仅提高了PHMG的抗菌活性，而且显著改善了原料PDA水溶性较差的缺点。

细菌污染和感染一直是公共健康和人类生活的主要威胁。及时检测致病菌和抑制细菌生长对于预防感染和提高存活率具有重要意义。目前，用于检测病原体的传统方法包括标准平板菌落计数，聚合酶链反应(PCR)和酶联免疫吸附测定(ELISA)。菌落计数方法涉及分离，鉴定，培养和计数，并且是劳动密集型且耗时的(通常为几天)。相比之下，PCR和ELISA方法要快得多。然而，除了昂贵的仪器或试剂之外，这些方法还需要样品预处理，例如细胞裂解和DNA提取，这使测试过程复杂化。因此，这些传统方法仍然留有很大的改进空间，特别是对于实际使用中的病原菌的快速诊断和原位抑制。

分析仪器，材料工程和纳米科学的最新进展为开发快速细菌检测的新策略创造了机会，生物传感器被认为是这方面的理想平台。目前，已经开发了基于电化学，荧光，微流体，核磁共振(NMR)，石英晶体微天平(QCM)，表面等离子体共振(SPR)和表面增强拉曼散射(SERS)技术的用于细菌测试的生物传感器。其中，电化学方法由于其实时检测，高灵敏度和化学信号快速转换成电信号等优点，在特定细菌检测方面具有重要的前景。

基于阻抗的细菌检测因其速度和易用性优于传统的细菌检测方法而成为过去半个世纪的关键技术。该类细菌传感器通过监测电极的阻抗变化或由细菌结合或生长引起的培养基的电导率变化来工作。目前致力于提高传感效率主要涉及制造微电极阵列以增强信号或者动员细菌特异性生物分子(例如，肽，DNA或抗体)以增强细菌结合。然而，微电极阵列的复杂性，生物分子的不稳定性和两者的高成本极大地限制了这种类型的生物传感器的广泛应用。因此，开发一种简单，快速，高效且具有成本效益的阻抗传感器具有重要意义。另外值得注意的是，这些传感器可以同时在食品安全和医学科学领域中用于捕获，检测和抑制病原菌。

在这里，我们提供了一种基于电化学阻抗的多功能电极传感器。将合成的高效抗菌剂PBI-PHMG与氧化石墨烯材料创新性结合，设计出一种有效检测、杀灭细菌且灵敏度较高的阻抗电极传感器。

发明内容

本发明的内容包括两部分。一是合成一种新型的高分子抗菌剂PBI-PHMG；二是将PBI-PHMG与氧化石墨烯材料结合，设计出一种简单易行，能有效捕捉、杀死细菌且灵敏度较高(对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的LOD值分别为5CFU/mL和20CFU/mL)的多功能阻抗电极传感器。

本发明的技术方案：

一种用于检测细菌的电化学阻抗电极的制备方法，电极结构的特征在于：以泡沫镍为支架，引入了氧化石墨烯结构，再通过∏-∏共轭作用负载高效抗菌剂聚六亚甲基胍基苝。

进一步的，电化学阻抗电极的制备方法，步骤如下：

第1步、Ni-GO的制备：首先，将400mg虫胶溶解在20mL乙醇中，配制成20mg/mL的虫胶溶液；然后将泡沫镍片(6.0*50*1.0mm)浸在虫胶溶液中10min，充分浸泡后取出，自然晾干；最后，将晾干的涂层有虫胶的泡沫镍片放进管式炉中，置换气三次，氮气氛围下，进行600℃煅烧30min，从而得到泡沫Ni-GO；

第2步、Ni-GO-PBI-PHMG的制备：首先，配制一定量的浓度为1.5mg/mL的聚六亚甲基胍基苝PBI300-PHMG水溶液；然后，将第1步得到的Ni-GO充分放入上述溶液中24h；最后，从PBI300-PHMG水溶液中取出Ni-GO，用蒸馏水冲洗三遍即得Ni-GO-PBI-PHMG。

进一步的，聚六亚甲基胍基苝由原料1和原料2合成，其中原料1具有反应所必需的酸酐结构，同时具有较大的平面环状共轭体系；原料2具有反应所必需的伯胺结构，同时具有较好的抗菌活性；整个合成过程运用了酸酐氨解的反应机理。起始投料时，固定聚六亚甲基胍的量，加入不同量的3,4,9,10-苝四甲酸二酐，得到一系列具有不同苝含量的从而表现出不同抗菌活性的聚六亚甲基胍基苝。

所得电化学阻抗电极，用于对低浓度的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行探测。

本发明的技术分析：

产物PBI-PHMG的合成是运用了比较熟悉的酸酐氨解的反应。原料PHMG含有抗菌基团—胍基结构，端位胍基中的伯胺为反应提供了关键的反应基团。反应是否成功进行，主要通过产物是否具有荧光性质来确定。

电极的制备过程主要包括Ni-GO和Ni-GO-PBI-PHMG的制备。对于前者石墨烯的制备，本发明采用的是Sunita Panda等人报道的一种方法，即以生物聚合物虫胶为碳源，通过CVD法得到氧化石墨烯。实验中，我们将泡沫镍片(6.0*50*1.0mm)浸泡在虫胶的乙醇溶液中，10min后取出，自然晾干，然后放进管式炉中，置换气三次，氮气氛围下，进行600℃煅烧30min，从而得到Ni-GO，其结构可以通过扫描电子显微镜(SEM)进行表征。对于Ni-GO-PBI-PHMG的制备是利用PBI-PHMG结构中苝酰亚胺部分具有较大的平面环状共轭体系和良好的分子平面性的特点，它能与石墨烯通过∏-∏共轭作用结合起来。

整个电极材料Ni-GO-PBI-PHMG中，PBI-PHMG亲水基部分含有强烈的正电性，吸附通常呈负电性的各类细菌、病毒，进入细胞膜，抑制膜内脂质体合成，造成菌体凋亡，从而改变了电极阻抗的变化；另一方面Ni-GO，基底泡沫镍片具有良好的导电性，此外，具有一定抗菌活性的氧化石墨烯组分的渗入，更是大大改进了电极的结构。

综上所述，本发明提供了一种新的聚合物杀菌消毒剂，并创新性地将其与石墨烯材料结合应用于电化学领域，设计出一种有效检测、杀灭细菌且灵敏度较高的阻抗电极。

本发明的优点和有益效果：

1)合成聚合物部分所涉及的反应机理较为简单成熟，即酸酐的氨解反应，而且反应后处理过程简单易行，所得产物收率较高。

2)本发明所得到的一系列不同含苝量的聚六亚甲基胍基苝PBI-PHMG，不仅提高了原料PHMG的抗菌活性，而且显著改善了PDA水溶性较差的缺点。提供了一种新型高效抗菌剂，同时拓宽了苝系衍生物在电化学等领域的应用范围。

3)本发明设计的电极Ni-GO-PBI-PHMG制备过程简单，石墨烯材料的渗入，大大改进了传统电极的结构。更重要的是，该电极对较低浓度的大肠杆菌(5-40CFU/mL)和金黄色葡萄球菌(20-160CFU/mL)可以进行有效地鉴别、捕捉和杀灭。

附图说明

图1为PBI-PHMG的合成路线图；

图2为PBI-PHMG的傅里叶红外光谱图；

图3为PBI-PHMG的核磁共振氢谱图；

图4为不同含苝量的聚六亚甲基胍基苝的紫外-可见吸收光谱图；

图5为PHMG与不同含苝量的PBI-PHMG抗大肠杆菌对比图；

图6为PHMG与不同含苝量的PBI-PHMG抗金黄色葡萄球菌对比图；

图7为PBI-PHMG杀菌率与含苝量的关系图；

图8为不同浓度PHMG与PBI300-PHMG抗大肠杆菌对比图(a)和相应的杀菌对数值与浓度关系图(b)；

图9为不同浓度PHMG与PBI300-PHMG抗金黄色葡萄球菌对比图(a)和相应的杀菌对数值与浓度关系图(b)；

图10为空白泡沫Ni与Ni-GO的SEM表征图；

图11为电极抗菌的SEM图；

图12为电极在不同时间间隔的盐水中对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的阻抗谱图(a-b)以及相应的电荷转移电阻Rct随时间变化图(c-d)；

图13为改进的Randles等效电路图；

图14为电极对不同浓度大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的阻抗谱图(a-b)以及相应的Rct值变化(ΔRct)和细菌浓度的线性关系图(c-d)。

具体实施方式

不同含苝量PBI-PHMG的合成：

实施例1：

将聚六亚甲基胍2g、3,4,9,10-苝四甲酸二酐20mg，正丁醇8mL置于50mL的单口烧瓶中。该反应体系在氮气保护下，120℃，搅拌反应16h。经乙醇溶解、离心、旋蒸、异丙醇沉淀等处理后得粗产物，再将其于70℃真空干燥24h，即得最终产物PBI20-PHMG(PDA起始投料量为20mg)。具体合成路线见附图1。

产物结构通过红外(见附图2)、核磁(见附图3)进行表征。

实施例2：

将聚六亚甲基胍2g、3,4,9,10-苝四甲酸二酐30mg，正丁醇8mL置于50mL的单口烧瓶中。该反应体系在氮气保护下，120℃，搅拌反应16h。经乙醇溶解、离心、旋蒸、异丙醇沉淀等处理后得粗产物，再将其于70℃真空干燥24h，即得最终产物PBI30-PHMG(PDA起始投料量为30mg)。

实施例3：

将聚六亚甲基胍2g、3,4,9,10-苝四甲酸二酐40mg，正丁醇8mL置于50mL的单口烧瓶中。该反应体系在氮气保护下，120℃，搅拌反应16h。经乙醇溶解、离心、旋蒸、异丙醇沉淀等处理后得粗产物，再将其于70℃真空干燥24h，即得最终产物PBI40-PHMG(PDA起始投料量为40mg)。

实施例4：

将聚六亚甲基胍2g、3,4,9,10-苝四甲酸二酐50mg，正丁醇8mL置于50mL的单口烧瓶中。该反应体系在氮气保护下，120℃，搅拌反应16h。经乙醇溶解、离心、旋蒸、异丙醇沉淀等处理后得粗产物，再将其于70℃真空干燥24h，即得最终产物PBI50-PHMG(PDA起始投料量为50mg)。

实施例5：

将聚六亚甲基胍2g、3,4,9,10-苝四甲酸二酐100mg，正丁醇8mL置于50mL的单口烧瓶中。该反应体系在氮气保护下，120℃，搅拌反应16h。经乙醇溶解、离心、旋蒸、异丙醇沉淀等处理后得粗产物，再将其于70℃真空干燥24h，即得最终产物PBI100-PHMG(PDA起始投料量为100mg)。

实施例6：

将聚六亚甲基胍2g、3,4,9,10-苝四甲酸二酐200mg，正丁醇8mL置于50mL的单口烧瓶中。该反应体系在氮气保护下，120℃，搅拌反应16h。经乙醇溶解、离心、旋蒸、异丙醇沉淀等处理后得粗产物，再将其于70℃真空干燥24h，即得最终产物PBI200-PHMG(PDA起始投料量为200mg)。

实施例7：

将聚六亚甲基胍2g、3,4,9,10-苝四甲酸二酐300mg，正丁醇8mL置于50mL的单口烧瓶中。该反应体系在氮气保护下，120℃，搅拌反应16h。经乙醇溶解、离心、旋蒸、异丙醇沉淀等处理后得粗产物，再将其于70℃真空干燥24h，即得最终产物PBI300-PHMG(PDA起始投料量为300mg)。

将上述合成的PBI20-PHMG、PBI30-PHMG、PBI40-PHMG、PBI50-PHMG、PBI100-PHMG、PBI200-PHMG、PBI300-PHMG配成相同浓度的水溶液，通过测试它们的紫外吸收值比较含苝量的多少，测试结果见附图4。

PHMG和PBI-PHMG抗菌活性对比测试：

将PHMG和七种不同含苝量的PBI-PHMG配制成25μg/mL的水溶液，然后将其和大肠杆菌(或者金黄色葡萄球菌)悬浮液在37℃摇床中振荡作用15min后涂布平皿，放置在37℃培养箱中培养16h。通过数菌落法比较出PHMG和PBI-PHMG的抗菌活性大小以及不同含苝量PBI-PHMG之间的抗菌活性大小。在此基础上，选出抗菌活性最佳的聚六亚甲基胍基苝作为后期实验的研究对象，将其和PHMG分别配制成6.25μg/mL、12.5μg/mL、25μg/mL、37.5μg/mL以及50μg/mL的水溶液，比较他们的浓度和杀菌率之间的关系。

抗菌结果显示，PBI-PHMG的抗菌活性大小与其苝含量的高低有关。当聚合物中苝含量较低时，其抗菌活性与原料PHMG相差不大。但是随着聚合物接苝量的明显增高，其抗菌活性也显著提高，见附图5和附图6(图5和图6中，A为PHMG，B—H为PBI-PHMG，其中苝含量依次增加)。聚合物的抗菌率和苝含量之间表现出一定的正相关性，见附图7。在此结果上得出，所合成的样品中，PBI300-PHMG的杀菌率最好，在后续实验中作为主要的研究对象。在研究PBI300-PHMG和PHMG不同浓度的水溶液和杀菌率之间的关系时，结果显示，同一浓度，PBI300-PHMG对大肠杆菌(附图8，图8a中第一行为PHMG第二行为PBI300-PHMG)和金黄色葡萄球菌(附图9，图9a中第一行为PHMG第二行为PBI300-PHMG)的抗菌效果均好于PHMG的抗菌活性。

电极的制备：

电极的制备方法包含两个步骤：

第1步、Ni-GO的制备：首先，将400mg虫胶溶解在20mL乙醇中，配制成20mg/mL的虫胶溶液；然后将泡沫镍片(6.0*50*1.0mm)浸在虫胶溶液中10min，充分浸泡后取出，自然晾干；最后，将晾干的涂层有虫胶的泡沫镍片放进管式炉中，置换气三次，氮气氛围下，进行600℃煅烧30min，从而得到泡沫Ni-GO。

通过扫描透射电镜SEM观察到泡沫Ni以及Ni-GO的结构，见附图10(图10中第一行为空白泡沫镍，第二行为煅烧之后得到的Ni-GO)。

第2步、Ni-GO-PBI-PHMG的制备：首先，配制一定量的浓度为1.5mg/mL的PBI300-PHMG水溶液；然后，将第1步得到的Ni-GO充分放入上述溶液中24h；最后，从PBI300-PHMG水溶液中取出Ni-GO，用蒸馏水冲洗三遍即得Ni-GO-PBI-PHMG。

电极的抗菌测试：

将复苏好的细菌(10^8-10^9CFU/mL)4℃，10000rpm离心，再用PBS洗涤两次。然后，将电极和细菌悬浮液放在37℃摇床中振荡培养3h。振荡结束，取100μ菌液，稀释到适宜的浓度后进行平皿涂布。最后，将涂布好的培养皿放置在37℃生物培养箱16h。通过菌落计数法可以测定电极的抗菌效果。

电极上细菌形态的观察：

电极与高浓度细菌悬浮液(10^8-10^9CFU/mL)在37℃生物培养箱培养1h后，将其浸入2.5％戊二醛溶液中以固定附着的细菌，然后用一系列浓度梯度的乙醇水溶液进行洗脱，最后进行冷冻干燥。通过SEM观察细菌在电极上的形态，见附图11(图11中左列为电极对大肠杆菌的作用；右列为电极对金黄色葡萄球菌的作用)。SEM图像表明，制备的电极不仅可以有效地捕获细菌，而且还具有灭活细菌的潜力。

电化学阻抗谱法检测细菌：

制备出电极Ni-GO-PBI-PHMG后，接下来研究时间和细菌浓度对电极的电化学阻抗谱的影响，以测试其细菌感应特性。实验中以Ag/AgCl作为参比电极、Pt片作为辅助电极、Ni-GO-PBI-PHMG作为工作电极，整个体系在0.9％的NaCl溶液，室温，频率0.1Hz-10kHz条件下进行。

1.时间依赖性电化学交流阻抗测试

将制备好的电极放置在含有一定浓度大肠杆菌(金黄色葡萄球菌)的生理盐水中，每隔一段时间测一次交流阻抗，观察电极和菌液作用不同时间对电极阻抗的影响，结果见附图12。实验中我们选择改进的Randles等效电路(见附图13)来表示电极处的电化学过程。它由溶液相电阻(Rs)，电荷转移电阻(Rct)，双层电容(Q)和由质量转移引起的Warburg阻抗(Zw)组成。奈奎斯特图的半圆直径对应于电荷转移电阻Rct。细菌捕获或细胞质渗漏引起电极表面上的分子相互作用可导致Rct值的变化。图12a-b结果显示，电极在细菌悬浮液孵育后，半圆直径经历显着降低的过程，这意味着在细菌附着后电荷转移Rct变得更容易。根据抗菌机制，降低的Rct值可能归因于膜损伤诱导的细菌裂解，这导致高度流动的离子成分(如蛋白质，DNA，RNA，K+和Na+)的释放，并立即增加了电极和电极表面附近的介质的电导率。

图12c-d分别是电极的Rct值与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作用时间的关系图。结果显示，大肠杆菌悬浮液中的Rct值在前25分钟内从809Ω显着降低至520Ω，然后在700Ω处略微增加至平衡值。这种现象可解释为：电极快速吸附并杀死细菌，导致细菌的细胞质渗漏，释放的导电组分发生相对缓慢的扩散速率。与大肠杆菌不同的是，金黄色葡萄球菌悬浮液中的Rct值在前10分钟内从809Ω上升至916Ω，此后Rct值才逐渐降低，约在450Ω处降至平衡值。此现象可解释为，作用前期，电极可以快速的吸附金黄色葡萄球菌，但是裂解细菌的速率比较慢，这就导致Rct值起初出现了上升的过程。作用后期，电极裂解细菌的速率较快，导致Rct值逐渐下降。由图可以清晰地发现，大肠杆菌的Rct值在45分钟左右显示平衡，金黄色葡萄球菌的Rct值在90分钟左右显示平衡。这种平衡与上面讨论的有效细菌捕获和杀灭过程密切相关。此外值得注意的是，在相同浓度下，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的Rct值的变化是不同的(分别为105Ω和375Ω)。这些特征充分表明了我们制备的电极不仅可以捕获并杀死细菌，而且可以用于鉴别不同的细菌菌种。

2.浓度依赖性电化学交流阻抗测试

将制备好的电极放置在含有不同浓度大肠杆菌(金黄色葡萄球菌)的生理盐水中，为了获得稳定的阻抗信号，在与大肠杆菌孵育60分钟(与金黄色葡萄球菌作用100分钟)后拍摄奈奎斯特图(根据图12中的结果)，测试结果见附图14a-b。显然，对于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，随着细菌浓度的增加，半圆直径逐渐减小。这可能是由于电极捕获更多的细菌导致从细胞质释放更多导电组分从而降低Rct值。然而，当细菌超过一定浓度时，Rct值的变化对细菌浓度的变化相对不敏感，可能是由于细菌附着的表面发生饱和。此外，在一定范围内Rct值的相应变化(ΔRct＝Rct(对照)-Rct(细菌))和细菌浓度显示出良好的线性相关性(图14c-d)。对于大肠杆菌，电极的检测限LOD值为5CFU/mL，线性范围为5-40CFU/mL；而对于金黄色葡萄球菌，电极的检测限LOD值为20CFU/mL，线性范围为20-160CFU/mL。这为低浓度细菌的检测提供了重要的测试方法。

一种用于检测细菌的电化学阻抗电极的制备方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

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