专利摘要

本发明涉及抗生素的制备方法，更具体地说，涉及采用酶催化“一锅法”制备β－内酰胺抗生素(即头孢菌素和青霉素)的方法。在水或水与醇混合物介质中，在游离或/和固定化的青霉素酰化酶存在下，通式(III)化合物与通式(VA)的酯或通式(VB)的酰胺反应，得到通式(I)的头孢菌素；或通式(IV)化合物与通式(VA)的酯或通式(VB)的酰胺反应，得到通式(II)的青霉素。

权利要求

1.一种酶催化“一锅法”制备β-内酰胺抗生素的方法，其特征是，该方法包括：在水或水与醇混合物反应介质中，在游离或/和固定化的青霉素酰化酶存在下，控制pH为5.0～9.0，通式(III)化合物与通式(VA)的酯或通式(VB)的酰胺反应，得到通式(I)的头孢菌素；或通式(IV)化合物与通式(VA)的酯或通式(VB)的酰胺反应，得到通式(II)的青霉素；

或

其中，A表示硫原子或氧原子；

Z表示氢原子、卤素原子、羟基、低级烷氧基、取代或非取代低级烷基、C₂-C₄链烯基、杂环硫亚甲基或杂环亚甲基；

R₁为取代或非取代的6元环基或杂环基；

R₂表示氨基或氢原子；

R₃表示芳基亚甲基或芳氧基亚甲基；

R₄为氢、CH₂X或CHXY，R₅为氢、CH₂Y或CHXY，其中X和Y各自独立地代表氢、羟基、低级烷基或羟基-低级烷基。

2.根据权利要求1所述的制备β-内酰胺抗生素的方法，其特征是，所述的R₁为苯基、对羟基苯基、双氢苯基或1H-四氮唑基。

3.根据权利要求1所述的制备β-内酰胺抗生素的方法，其特征是，所述的通式(III)或(IV)化合物与通式(VA)的酯或通式(VB)的酰胺的摩尔比为1∶1～10。

4.根据权利要求3所述的制备β-内酰胺抗生素的方法，其特征是，所述的通式(III)或(IV)化合物与通式(VA)的酯或通式(VB)的酰胺的摩尔比为1∶1.5～3。

5.根据权利要求1所述的制备β-内酰胺抗生素的方法，其特征是，所述的水或水与醇混合物介质与通式(III)或(IV)化合物，按重量比为5～200∶1。

6.根据权利要求1所述的制备β-内酰胺抗生素的方法，其特征是，所述的水与醇混合物，其中所述的醇为甲醇、乙醇、乙二醇或丙三醇，醇在水与醇混合物中含量为0～50wt.％。

7.根据权利要求1所述的制备β-内酰胺抗生素的方法，其特征是，所述的青霉素酰化酶的用量为通式(III)或(IV)化合物的0.1～100倍，以重量计。

8.根据权利要求1所述的制备β-内酰胺抗生素的方法，其特征是，所述的青霉素酰化酶是固定化的青霉素酰化酶。

9.根据权利要求1所述的制备β-内酰胺抗生素的方法，其特征是，该方法在-5℃～40℃的温度下进行。

10.根据权利要求1所述的制备β-内酰胺抗生素的方法，其特征是，所述的pH为6.5～7.5。

说明书

技术领域

本发明涉及抗生素的制备方法，更具体地说，涉及采用酶催化“一锅法”制备β-内酰胺抗生素(即头孢菌素和青霉素)的方法。

背景技术

β-内酰胺抗生素，即头孢菌素和青霉素，是临床上广泛使用的抗生素。头孢菌素的结构式如通式(I)所示，青霉素的结构式如通式(II)所示：

其中，A表示硫原子或氧原子；

Z表示氢原子、卤素原子、羟基、低级烷氧基、取代或非取代低级烷基、C₂-C₄链烯基、杂环硫亚甲基或杂环亚甲基；

R₁为取代或非取代的6元环基或杂环基；例如苯基、对羟基苯基、双氢苯基或1H-四氮唑基；

R₂表示氨基或氢原子。

在临床上应用的头孢克洛，即通式(I)中，Z为氯原子，R₁为苯基，R₂为氨基；在临床上应用的头孢丙烯或E-型头孢丙烯，即通式(I)中，Z为丙烯基，R₁为对羟基苯基，R₂为氨基；在临床上应用的头孢氨苄，即通式(I)中，Z为甲基，R₁为苯基，R₂为氨基；在临床上应用的头孢拉定，即通式(I)中，Z为甲基，R₁为双氢苯基，R₂为氨基；在临床上应用的头孢羟氨苄，即通式(I)中，Z为甲基，R₁为对羟基苯基，R₂为氨基；在临床上应用的头孢唑啉，即通式(I)中，Z为(2-甲基-1，3，4-噻二唑-5-基)硫亚甲基，R₁为1H-四氮唑基，R₂为氢原子。

在临床上应用的氨苄西林，即通式(II)中，R₁为苯基，R₂为氨基；在临床上应用的阿莫西林，即通式(II)中，R₁为对羟基苯基，R₂为氨基。

已有很多文献报道采用酶法来制备β-内酰胺抗生素。采用酶法制备β-内酰胺抗生素的优点是，避免使用有机溶剂，环境污染小，而且反应条件比较温和，操作简便，成本低。

WO9920786公开了一种酶法合成β-内酰胺抗生素的方法，6-氨基青霉烷酸(即下面通式(VII)化合物)或7-氨基头孢烷酸(即下面通式(VI)化合物)与酰化试剂进行酶酰化反应，得到相应的青霉素或头孢菌素。在该方法中，其特征在于，6-氨基青霉烷酸或7-氨基头孢烷酸和酰化试剂处于过饱和浓度。

WO9804732公开了一种合成β-内酰胺抗生素的方法。该方法是在酰化酶存在下，6-氨基青霉烷酸或7-氨基头孢烷酸与酯反应，得到相应的青霉素或头孢菌素。在该方法中，采用酯作为酰化试剂。

在上述方法中，作为起始原料的7-氨基头孢烷酸(即通式(VI)化合物)，可以由下述通式(III)化合物通过7位处侧链的酰氨基水解脱去R₃CO-，分离后得到；6-氨基青霉烷酸(即通式(VII)化合物)，可以由下述通式(IV)化合物通过6位处侧链的酰氨基水解脱去R₃CO-，分离后得到。在分离得到7-氨基头孢烷酸或6-氨基青霉烷酸后，按照WO9920786或WO9804732所述的方法制备各种头孢菌素或青霉素。如果能将这两步反应合并在同一反应体系中，连续进行，即在“一锅”中，在水解脱去R₃CO-的同时酶酰化结合上头孢菌素或青霉素所需的活性基团R₁R₂CO-，这样简化了反应步骤，避免了7-氨基头孢烷酸或6-氨基青霉烷酸中间产物的分离，大大缩短了反应流程，降低成本。

发明内容

因此，本发明的目的在于，提供一种在同一反应体系中、在酶作用下水解和酰化缩合同时进行的酶催化“一锅法”制备β-内酰胺抗生素的方法。

本发明提供的酶催化“一锅法”制备β-内酰胺抗生素的方法，该方法包括：在水或水与醇混合物反应介质中，在游离或/和固定化的青霉素酰化酶存在下，通式(III)化合物与通式(VA)的酯或通式(VB)的酰胺反应，得到通式(I)的头孢菌素；或通式(IV)化合物与通式(VA)的酯或通式(VB)的酰胺反应，得到通式(II)的青霉素；

或

其中，A表示硫原子或氧原子；

Z表示氢原子、卤素原子、羟基、低级烷氧基、取代或非取代低级烷基、C₂-C₄链烯基、杂环硫亚甲基或杂环亚甲基；

R₁为取代或非取代的6元环基或杂环基；例如苯基、对羟基苯基、双氢苯基

或1H-四氮唑基；

R₂表示氨基或氢原子；

R₃表示芳基亚甲基或芳氧基亚甲基；

R₄为氢、CH₂X或CHXY，R₅为氢、CH₂Y或CHXY，其中X和Y各自独立地代表氢、羟基、低级烷基或羟基-低级烷基。

本说明书中所示各基团分别具体如下所述。卤素原子是指氟、氯、溴或碘。低级烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基等。取代或非取代低级烷基，低级烷基是指例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基等直链或支链状的C₁～C₄烷基；卤代的低级烷基，例如氯甲基、溴甲基、碘甲基等；烷氧基取代的低级烷基，例如甲氧基甲基、乙氧基甲基等；以及乙酰氧基甲基、氨基甲酰氧基甲基等。C₂-C₄链烯基，例如乙烯基、丙烯基、2，2-二溴乙烯基等。杂环硫亚甲基例如1，2，3-三唑-4-基硫亚甲基、5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基硫亚甲基、3-甲基-1，3，4-三嗪-5，6-二酮-2-硫亚甲基、1-甲基四唑-5-基硫亚甲基、1-(2-二甲氨基乙基)四唑-5-基硫亚甲基、1，3，4-噻二唑-5-基硫亚甲基、1-(2-羟基乙基)四唑-5-基硫亚甲基等；杂环亚甲基例如1-甲基吡咯烷基亚甲基、吡啶亚甲基、1，2，3-三唑基、1，5-环戊二烯基-吡啶亚甲基等。

R₃所述的芳基亚甲基或芳氧基亚甲基，其中，芳基是指苯基、茴香基、萘基等。R₃，例如为苄基、甲苯基亚甲基、二甲苯基亚甲基、萘基亚甲基或对甲氧基苄基等。

在本发明所提供的制备方法中，在R₂为氢原子时，R₁优选为6元杂环基，例如1H-四氮唑基。

在本发明中，用作起始原料的通式(III)所示的β-内酰胺化合物，为已知化合物，可以按照Torii等在四面体快报，Tetrahedron Lett，23，2187～2188(1982)叙述的方法来制备3-卤代头孢烯化合物；在制备了3-卤代头孢烯化合物之后，可按照CN1257508A或中国专利申请03146092.5所述的方法，通过亲核取代反应或Wittig等反应，在3位C上引入所需要的取代基；然后，按照J.O.C.1991，56，3638所述方法在酚类化合物作用下，断4位上的羧基保护基，来制得通式(III)所示的β-内酰胺化合物。

用作起始原料的通式(IV)所示的β-内酰胺化合物，可市购得到。

通式(VA)的酯或通式(VB)的酰胺，可市购得到，或者按WO9804732所述方法来制备。

所述的青霉素酰化酶，可以是游离的或固定化的青霉素酰化酶，优选固定化的青霉素酰化酶，例如可购买到的德国Bringer公司PGA-450，中国长沙福来格公司IPA-750等，酶菌来源，例如Acetobacter pasterurianum、Alcaligenes faecalis、Bacillus megaterium、Escherichia coli、Fusariumoxysporum或Xanthomonas citrii。

在本发明所提供的方法中，在-5℃～40℃的温度下，在水或水与醇混合物介质中，通过滴加碱使通式(III)或(IV)化合物溶解，加入通式(VA)的酯或通式(VB)的酰胺，采用酸或碱使该反应体系的pH为5.0～9.0，再向该体系中加入游离或固定化的青霉素酰化酶。在反应过程中，用酸或碱维持该反应体系的pH为5.0～9.0，优选6.0～8.0，更优选6.5～7.5。

本发明方法中，采用水或水与醇混合物为反应介质，其中醇可以为一元醇、二元醇或三元醇。一元醇，例如甲醇或乙醇；二元醇，例如乙二醇；三元醇，例如丙三醇。醇的用量为，醇在水与醇混合物中含量为0～50wt.％。

在本发明中，用来调节体系pH的酸可以为无机酸或有机酸，其中所述的无机酸包括盐酸、磷酸或硫酸，优选盐酸；所述的有机酸包括甲酸或乙酸。用来调节体系pH的碱包括无机碱或有机碱，其中所述的无机碱包括氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液或氨水等；所述的有机碱包括三乙胺或正丁胺等。在本发明方法中，优选氢氧化钠溶液、氨水或三乙胺。

在该方法中，通式(III)或(IV)化合物与通式(VA)的酯或通式(VB)的酰胺的摩尔比为1∶1～10，优选1∶1.5～3；水或水与醇的混合物反应介质与通式(III)或(IV)化合物，按重量比为5～200∶1的量，更优选10～20∶1；所述的青霉素酰化酶的用量通常根据酶的活性而定，一般为通式(III)或(IV)化合物的0.1～100倍，以重量计。

在本发明所提供的方法中，通常在-5℃～40℃的温度下进行，优选5℃～20℃；整个反应时间通常为2～18小时。

在反应完成后，可以采用常规已知方法分离通式(I)的头孢菌素或通式(II)的青霉素，例如采用与β-萘酚形成复合物的方法。

在水或水与醇混合物介质中，在青霉素酰化酶存在下，通式(III)化合物在7位酰胺基水解脱去R₃CO-，生成通式(VI)的7-氨基头孢烷酸(高效液相色谱检测出)，而同时通式(VA)的酯或通式(VB)的酰胺在酶的作用下与生成的7-氨基头孢烷酸缩合，生成通式(I)的头孢菌素。而通式(IV)化合物在6位酰胺基水解脱去R₃CO-，生成通式(VII)的6-氨基青霉烷酸(高效液相色谱检测出)，而同时通式(VA)的酯或通式(VB)的酰胺在酶的作用下与生成的6-氨基青霉烷酸缩合，生成通式(II)的青霉素。

因此，本发明提供的酶催化“一锅法”制备β-内酰胺抗生素的方法，在同一反应体系中水解和缩合同时进行，避免了7-氨基头孢烷酸或6-氨基青霉烷酸中间产物的分离，这样简化了反应步骤，大大缩短了反应流程，降低成本。而且反应体系不形成粘稠物，产品溶液与固定化酰胺化酶易于分离。

具体实施方式

下面提供的实施例是用来具体地说明本发明的实施方案，这些实施例不限制本发明的范围。

在本发明中，根据《美国药典》(25版，第351页至352页)规定的测定方法，采用高效液相色谱法测定头孢丙烯的生成量；根据《中国药典》(2000版，第175页至176页)规定的测定方法，采用高效液相色谱法测定头孢克洛的生成量；根据《中国药典》(2000版，第190页至191页)规定的测定方法，采用高效液相色谱法测定头孢氨苄的生成量；根据《中国药典》(2000版，第182页至183页)规定的测定方法，采用高效液相色谱法测定头孢拉啶的生成量；根据《中国药典》(2000版，第193页至194页)规定的测定方法，采用高效液相色谱法测定头孢羟氨苄生成量；根据《中国药典》(2000版，第189页)规定的测定方法，采用高效液相色谱法测定头孢唑啉生成量；根据《中国药典》(2000版，第717页)规定的测定方法，采用高效液相色谱法测定氨苄西林的生成量；根据《中国药典》(2000版，第338页至339页)规定的测定方法，采用高效液相色谱法测定阿莫西林的生成量。

实施例1  Z型头孢丙烯的制备

在100mL的三口反应瓶中，加入30mL水，而后再加入7-苯乙酰氨基-3-丙烯基(Z型)-3-头孢菌素-4-羧酸(通式(III)，R₃为苄基，Z为丙烯基(Z型))0.5g，同时进行搅拌，滴加3M氨水调pH至6.5并使其溶解；然后向反应器中加入对羟基苯甘氨酸乙二醇酯2.1g，再加入PGA-450固定化酰化酶0.5g；使整个反应体系恒温在15～20℃，并用Metron自动滴加仪滴加4M盐酸，使整个反应体系pH保持在6.5～7.0；反应4小时后，取反应液进行HPLC测试(外标法)，生成Z型头孢丙烯0.49g，总转化率为85.0％。

实施例2  E型头孢丙烯的制备

在100mL的三口反应瓶中，加入50mL水，而后再加入7-苯乙酰氨基-3-丙烯基(E型)-3-头孢菌素-4-羧酸(通式(III)，R₃为苄基，Z为丙烯基(E型))0.5g，同时进行搅拌，滴加3M氨水调pH至7.5并使其溶解；然后向反应器中加入对羟基苯甘氨酸乙二醇酯2.5g，再加入PGA-450固定化酰化酶0.5g；使整个反应体系恒温在15～20℃，并用Metron自动滴加仪滴加4M盐酸，使整个反应体系pH保持在7.0～7.5；反应5小时后，取反应液进行HPLC测试(外标法)，生成E型头孢丙烯0.45g，总转化率为78.1％。

实施例3  头孢氨苄的制备

在100mL的三口反应瓶中，加入25mL水，而后再加入7-苯乙酰氨基-3-甲基-3-头孢菌素-4-羧酸(通式(III)，R₃为苄基，Z为甲基)0.5g，同时进行搅拌，滴加3M氨水调pH至8.0并使其溶解；然后向反应器中加入苯甘氨酸甲酯0.8g，再加入PGA-450固定化酰化酶0.5g；使整个反应体系恒温在10～15℃，并用Metron自动滴加仪滴加4M盐酸，使整个反应体系pH保持在5.5～6.0；反应8小时后，取反应液进行HPLC测试(外标法)，生成头孢氨苄0.467g，总转化率为90.1％。

实施例4  头孢羟氨苄的制备

在100mL的三口反应瓶中，加入35mL水，而后再加入7-苯乙酰氨基-3-甲基-3-头孢菌素-4-羧酸(通式(III)，R₃为苄基，Z为甲基)0.5g，同时进行搅拌，滴加三乙胺调pH至7.5并使其溶解；然后向反应器中加入对羟基苯甘氨酸甲酰胺0.9g，再加入PGA-450固定化酰化酶0.8g；使整个反应体系恒温在8～10℃，并用Metron自动滴加仪滴加4M盐酸，使整个反应体系pH保持在7.8～8.0；反应3小时后，取反应液进行HPLC测试(外标法)，生成头孢羟氨苄0.48g，总转化率为92.2％。

实施例5  头孢克洛的制备

在100mL的三口反应瓶中，加入50mL水，而后再加入7-苯乙酰氨基-3-氯-3-头孢菌素-4-羧酸(通式(III)，R₃为苄基，Z为氯原子)0.5g，同时进行搅拌，滴加20wt.％氢氧化钠调pH至8.0并使其溶解；然后向反应器中加入对羟基苯甘氨酸乙二醇酯2.6g，再加入IPA-750固定化酰化酶1.0g；使整个反应体系恒温在25～30℃，并用Metron自动滴加仪滴加15wt％硫酸，使整个反应体系pH保持在6.0～6.5；反应6小时后，取反应液进行HPLC测试(外标法)，生成头孢克洛0.44g，总转化率为83.5％。

实施例6  头孢拉啶的制备

在100mL的三口反应瓶中，加入30mL水和10mL乙二醇，而后再加入7-苯乙酰氨基-3-甲基-3-头孢菌素-4-羧酸(通式(III)，R₃为苄基，Z为甲基)0.5g，同时进行搅拌，滴加3M氨水调pH至6.5并使其溶解；然后向反应器中加入双氢苯甘氨酸乙二醇酯1.0g，再加入IPA-750固定化酰化酶0.5g；使整个反应体系恒温在15～20℃，并用Metron自动滴加仪滴加10wt％磷酸，使整个反应体系pH保持在5.5～6.0；反应7小时后，取反应液进行HPLC测试(外标法)，生成头孢拉啶0.486g，总转化率为93.1％。

实施例7  Z型头孢丙烯的制备

在100mL的三口反应瓶中，加入10mL水，而后再加入7-苯氧乙酰氨基-3-丙烯基(Z型)-3-头孢菌素-4-羧酸(通式(III)，R₃为苯氧亚甲基，Z为丙烯基(Z型))0.5g，同时进行搅拌，滴加3M氨水调pH至7.5并使其溶解；然后向反应器中加入对羟基苯甘氨酸乙二醇酯1.9g，再加入IPA-450固定化酰化酶0.6g；使整个反应体系恒温在25～30℃，并用Metron自动滴加仪滴加4M盐酸，使整个反应体系pH保持在6.0～6.5；反应4小时后，取反应液进行HPLC测试(外标法)，生成Z型头孢丙烯0.51g，总转化率为88.5％。

实施例8  头孢唑啉的制备

在100mL的三口反应瓶中，加入30mL水，而后再加入7-苯乙酰氨基-3-(2-甲基-1，3，4-噻二唑-5-基)硫亚甲基-3-头孢菌素-4-羧酸(通式(III)，R₃为苄基，Z为(2-甲基-1，3，4-噻二唑-5-基)硫亚甲基))0.5g，同时进行搅拌，滴加3M氨水调pH至7.5并使其溶解；然后向反应器中加入1H-四氮唑乙酸乙二醇酯1.8g，再加入PGA-450固定化酰化酶2.0g；使整个反应体系恒温在5～10℃，并用Metron自动滴加仪滴加4M盐酸，使整个反应体系pH保持在6.5～7.0；反应7小时后，取反应液进行HPLC测试(外标法)，生成头孢唑啉0.41g，总转化率为77.4％。

实施例9  Z型头孢丙烯的制备

在250mL的三口反应瓶中，加入100mL水，而后再加入7-苯乙酰氨基-3-丙烯基(Z型)-3-头孢菌素-4-羧酸(通式(III)，R₃为苄基，Z为丙烯基(Z型))0.5g，同时进行搅拌，滴加5％氢氧化钠调pH至6.5并使其溶解；然后向反应器中加入对羟基苯甘氨酸乙二醇酯4.2g，再加入IPA-750固定化酰化酶3.5g；使整个反应体系恒温在15～20℃，并用Metron自动滴加仪滴加3M盐酸，使整个反应体系pH保持在5.0～5.5；反应16小时后，取反应液进行HPLC测试(外标法)，生成Z型头孢丙烯0.41g，总转化率为71.1％。

实施例10  Z型头孢丙烯的制备

在150mL的三口反应瓶中，加入40mL水，而后再加入7-苯乙酰氨基-3-丙烯基(Z型)-3-头孢菌素-4-羧酸(通式(III)，R₃为苄基，Z为丙烯基(Z型))0.5g，同时进行搅拌，滴加3M氨水调pH至6.5并使其溶解；然后向反应器中加入对羟基苯甘氨酸乙二醇酯1.8g，再加入PGA-450固定化酰化酶0.5g；使整个反应体系恒温在15～20℃，并用Metron自动滴加仪滴加3M盐酸，使整个反应体系pH保持在8.0～8.5；反应3小时后，取反应液进行HPLC测试(外标法)，生成Z型头孢丙烯0.48g，总转化率为83.3％。

实施例11Z型头孢丙烯的制备

在100mL的三口反应瓶中，加入20mL水，而后再加入7-苯乙酰氨基-3-丙烯基(Z型)-3-头孢菌素-4-羧酸(通式(III)，R₃为苄基，Z为丙烯基(Z型))0.5g，同时进行搅拌，滴加4M氨水调pH至6.0并使其溶解；然后向反应器中加入对羟基苯甘氨酸乙二醇酯6.2g，再加入PGA-450固定化酰化酶4.5g；使整个反应体系恒温在15～20℃，并用Metron自动滴加仪滴加4M盐酸，使整个反应体系pH保持在7.0～7.5；反应2小时后，取反应液进行HPLC测试(外标法)，生成Z型头孢丙烯0.53g，总转化率为91.9％。

实施例12  氨苄西林的制备

在150mL的三口反应瓶中，加入40mL水，而后再加入青霉素G钾(通式(IV)，R₃为苄基，)0.5g，同时进行搅拌，滴加5wt％氢氧化钠调pH至6.5并使其溶解；然后向反应器中加入苯甘氨酸甲酯3.5g，再加入IPA-750固定化酰化酶2.5g；使整个反应体系恒温在35～40℃，并用Metron自动滴加仪滴加4M盐酸使整个反应体系pH保持在6.0～6.2；反应6小时后，取反应液进行HPLC测试(外标法)，生成氨苄西林0.45g，总转化率为90.0％。

实施例13  阿莫西林的制备

在150mL的三口反应瓶中，加入60mL水，而后再加入青霉素G钾(通式(IV)，R₃为苄基，)0.5g，同时进行搅拌，滴加4M氨水调pH至5.5并使其溶解；然后向反应器中加入羟基苯甘氨酸乙二醇酯2.2g，再加入PGA-450固定化酰化酶1.5g；使整个反应体系恒温在5～10℃，并用Metron自动滴加仪滴加4M盐酸使整个反应体系pH保持在5.5～6.0；反应8小时后，取反应液进行HPLC测试(外标法)，生成阿莫西林0.41g，总转化率为82.0％。

实施例14  阿莫西林的制备

在150mL的三口反应瓶中，加入60mL水，而后再加入青霉素G钾(通式(IV)，R₃为苄基，)0.5g，同时进行搅拌，滴加4M氨水调pH至7.5并使其溶解；然后向反应器中加入对羟基苯甘氨酸乙二醇酯2.2g，再加入PGA-450固定化酰化酶1.5g；使整个反应体系恒温在25～30℃，并用Metron自动滴加仪滴加4M盐酸使整个反应体系pH保持在7.5～8.0；反应2小时后，取反应液进行HPLC测试(外标法)，生成阿莫西林0.43g，总转化率为86.0％。

实施例15  氨苄西林的制备

在150mL的三口反应瓶中，加入40mL水，而后再加入青霉素G钾(通式(IV)，R₃为苄基，)0.5g，同时进行搅拌，滴加4M氨水调pH至6.5并使其溶解；然后向反应器中加入苯甘氨酸乙二醇酯3.0g，再加入PGA-450固定化酰化酶1.5g；使整个反应体系恒温在15～20℃，并用Metron自动滴加仪滴加4M盐酸使整个反应体系pH保持在6.0～6.2；反应6小时后，取反应液进行HPLC测试(外标法)，生成氨苄西林0.42g，总转化率为84.0％。

酶催化“一锅法”制备β-内酰胺抗生素的方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。