专利摘要

本发明涉及一类新型芳酰胺类化合物、它们的制备方法、含有这些化合物的药用组合物以及它们的医疗用途，特别是作为Raf激酶抑制剂的用途。该新化合物组合物可单独使用或与用于治疗受蛋白激酶调节的疾病如癌症的至少一种其它药物联用。

说明书

发明领域

本发明涉及一类芳酰胺类新化合物、它们的制备方法、含有这些化合物的药用组合物以及它们的医疗用途，特别是作为Raf激酶抑制剂的用途。该新化合物组合物可单独使用或与用于治疗受蛋白激酶调节的疾病如癌症的至少一种其它药物联用。

背景技术

恶性肿瘤是严重威胁人类生命的常见病和多发病，抗肿瘤药物在肿瘤的临床治疗中发挥着重要作用。近年来，随着分子生物学技术的发展和对肿瘤发病机制进一步认识，针对肿瘤细胞内异常信号转导系统为靶标的靶向药物研发，由于其靶点明确、副作用小、容易控制和可口服等特点，取得了重大进展。信号转导网络与调控在肿瘤的发生、发展和复发、转移中起着重要作用，针对肿瘤信号转导通路中关键分子的靶向治疗已成为攻克恶性肿瘤的有效手段。如酪氨酸激酶受体单抗Trastuzumab、活性酪氨酸酶抑制剂Imatinib、表皮生长因子受体抑制剂Gefitinib，以及多靶点新药Sorafenib和Sunitinib等成功应用于临床，把肿瘤的靶向治疗推进到一个崭新的阶段。

蛋白质的磷酸化与去磷酸化作为传递各种信息的信号转导机制，在细胞的生物学活动中发挥着重要的作用。一系列的蛋白激酶及其磷酸化构成了信号传导的生物学中最具特征的通路。Ras/Raf/MAPK信号通路是迄今为止研究最为活跃的通路之一，Ras/Raf/MAPK通路是调节细胞生长与增殖的重要信号传导通路。该信号传导通路的激活可以引起从细胞表面到细胞核内一系列级联反应事件，最终导致特定基因的激活并引起细胞增殖、凋亡或分化等不同的细胞行为。已经证实该通路成员的体细胞突变或者表达水平的改变与多种肿瘤的发病相关。Raf激酶作为Ras下游的关键效应蛋白之一，是一种丝/苏氨酸蛋白激酶，是MAPK级联反应的第一个分子，Raf在Ras/Raf/MAPK信号转导通路中扮演着非常重要的角色，它以一种GTP依赖的方式被上游Ras激活，活化的Raf可以激活下游的MAPK激酶(MEK1/2)，进而激活MAPK(ERK1/2)，构成MAPK级联反应，MAPK激活后可以入核激活多种核转录因子和激酶，进而影响基因转录、调节细胞功能。Raf激酶包括3种主要的亚型：A-Raf、B-Raf和C-Raf。其中，A-Raf和C-Raf分别需要N端保守的丝氨酸和酪氨酸磷酸化来激活，但B-Raf的N端丝氨酸能持续磷酸化，因此B-Raf较A-Raf、C-Raf更易被激活。在B-Raf中，缬氨酸599和缬氨酸600组成活化环路的一部分。通常这些氨基酸残基负责在B-Raf未被磷酸化的情况下维持B-Raf的非活性构象，但是V599K或V600E突变使这些相互作用不稳定，引起活化并导致潜在的下游信号和细胞生长的失控。由突变而结构性活化的Raf激酶具有癌基因的特点，其所表达的激酶在体内不依赖于Ras而持续刺激ERK，并最终导致诸多生理功能，如细胞增殖、分化、血管生成、凋亡抑制以及肿瘤的发生。最常见的B-Raf突变发生在临近保守的DFG基序的600位残基，即谷氨酸取代了缬氨酸(V600E)。目前已确定B-Raf被激活后的体细胞突变率在黑色素瘤中高达50-70％，卵巢癌中达35％，甲状腺癌中达41％，结肠癌中达10％。B-Raf^V600E的催化活性比野生型B-Raf(B-Raf^WT)活性高500倍，并且B-Raf^V600E可以通过刺激血管内皮生长因子(VEGFR)的分泌从而促进肿瘤周围血管的生成。因此，B-Raf^V600E成为开发抗肿瘤药物的理想靶标。

Ras/Raf/MAPK信号通路是细胞生物学中最具特征的通路，在肿瘤发生、发展中起着重要的作用，从而为靶向药物的抗肿瘤研究提供了多个潜在的靶点。目前针对Raf激酶的靶向药物研究尤为引人瞩目，以其为靶标的化疗化合物包括双芳基脲衍生物Sorafenib和Regorafenib，以及氮杂吲哚衍生物Vemurafenib和嘧啶衍生物Dabrafnib。

发明内容

本发明通过研究Raf蛋白激酶的晶体结构模型，利用计算机辅助药物设计手段搭建了Raf抑制剂的构效关系模型和药物虚拟筛选模型，设计并合成了一系列全新结构的基于嘌呤和嘧啶等结构的芳酰胺类化合物，初步药理实验结果表明：本发明的化合物具有良好的Raf激酶抑制活性，从而可以抑制恶性肿瘤的生长。

本发明的技术方案如下：

通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：

其中Q为上所示的7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基、6-取代嘧啶-4-基、2-取代嘧啶-4-基、9H-嘌呤-6-基和2-取代吡啶-4-基；

其中R¹、R²各自独立地表示氢、烷基，或R¹、R²连接形成的3-6个碳原子的碳环；

R³表示氢、烷基、卤素、氰基、烷基氧基、烷基硫基；

R⁴、R⁵各自独立地选自氢、卤素、氰基、烷基、芳基或Het¹取代基，其中所述烷基可进一步被一个或多个卤素、氰基所取代，所述Het¹选自吡唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基；或下列的脂肪族杂环：四氢吡咯基、吗啉基、吗啉基烷基、吗啉基烷氧基、吗啉基烷氨基、哌嗪基、哌嗪基烷基、哌嗪基烷氧基、哌嗪基烷氨基、哌啶基、哌啶基烷基、哌啶基烷氧基、哌啶基烷氨基；

R⁶选自H、-NHR、-NH(CH₂)_1-6OR、-NH(CH₂)_1-6SR、-NH(CH₂)_1-6NHR、-NH(CH₂)_1-6NR₂、-NHCONHR、-CONHR、-NH(CH₂)_1-6CO₂H、-NH(CH₂)_1-6Het²和-O(CH₂)_1-6OR。所述R选自氢或烷基，所述Het²选自哌啶基、吡咯基、吡唑基、哌啶基、咪唑基、呋喃基、吗啉基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、哌嗪基、取代哌嗪基、吡嗪基或哒嗪基的单环杂环；或选自喹啉基、喹喔啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧六环基或苯并[d][1，3]二氧戊环基的双环杂环；各单环或双环杂环任选被1、2或3个取代基取代，各取代基独立选自卤素、卤代烷基、羟基、烷基或烷氧基，或选自C₃-C₈的脂肪族碳环，或下列的脂肪族杂环：四氢吡咯基、吗啉基、烷氧基吗啉基、哌嗪基、哌啶基、烷氨基哌啶基；

L各自独立地表示CONH、NHCO、NHCONH、NHSO₂或SO₂NH等连接子；

上述烷基为具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基；或为具有3-6个碳原子的环状饱和烃基；或为连接具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的具有3-6个碳原子的环状饱和烃基；

烷氧基为具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃氧基，或为具有3-6个碳原子的环状饱和烃氧基，或为连接具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的具有3-6个碳原子的环状饱和烃氧基；

烷硫基为具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃硫基，或为具有3-6个碳原子的环状饱和烃硫基；或为连接具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的具有3-6个碳原子的环状饱和烃硫基；

芳香性碳环为选自苯基、萘基、苊基或四氢萘基的碳环，其各自任选被1、2或3个取代基取代，各取代基独立地选自氢、烷基、氰基、卤素、卤代烷基、羟基、巯基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、烷氧基烷基、芳基或Het、芳基烷基或Het烷基；

卤素为选自氟、氯、溴或碘。

本发明的优选方案在于：

R¹、R²各自独立地表示烷基；或R¹、R²连接形成的3-6个碳原子的碳环；

R³表示烷基、卤素；

R⁴、R⁵各自独立地表示氢、卤素、氰基、烷基、芳基或Het¹取代的芳基，其中所述烷基可进一步被一个或多个卤素、氰基所取代，Het¹选自脂肪族杂环：吗啉基、烷基吗啉基、烷氧基吗啉基、哌嗪基、烷基哌嗪基、烷氧基哌嗪基、取代哌嗪基、哌啶基、烷基哌啶基、烷氧基哌啶基；

R⁶选自H、-NHR、-NH(CH₂)_1-6OR、-NH(CH₂)_1-6NHR、-NH(CH₂)_1-6NR₂、-NHCONHR、-CONHR、-NH(CH₂)_1-6CO₂H、-NH(CH₂)_1-6Het²或-O(CH₂)_1-6OR，R表示氢、烷基；所述Het²选自下列的脂肪族杂环：四氢吡咯基、吗啉基、烷氧基吗啉基、哌嗪基、哌啶基、烷氨基哌啶基；

L各自独立地表示CONH、NHCO、NHCONH、NHSO₂或SO₂NH等连接子。

本发明的另一优选方案在于：

R¹、R²各自独立地优选甲基，或R¹、R²连接形成的3元或五元的碳环；

R³优选为甲基或卤素；

R⁴、R⁵各自独立地优选为氢、卤素、甲基、乙基、丙基、异丙基、三氟甲基、吗啉基、吗啉甲基、2-(吗啉-1-基)乙氧基、3-(吗啉-1-基)丙氧基、哌啶基、哌啶-4-基甲基、1-甲基哌啶-4-基氧基、1-甲基哌啶-4-基甲氧基、哌嗪基、4-甲基哌嗪基或4-甲基哌嗪甲基；

R⁶优选为甲氨基、甲氧基乙氨基、二甲氨基丙氨基、羟乙基氨基、2-(四氢吡咯-1-基)乙基氨基、2-(四氢吡咯-1-基)丙基氨基、2-(哌啶-1-基)乙基氨基、1-甲基哌啶-4-基氨基、1-甲基哌啶-4-基甲氨基、2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基氨基、3-(吗啉基-1-基)丙基氨基、氨基甲酰基或甲氨基甲酰基；

L各自独立地表示CONH、NHCO或NHCONH连接子。

通式I的化合物优选以下结构化合物：

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-1)，

N-[3-[1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基]-4-甲基苯基]-4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(I-2)，

N-[5-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基脲基]-2-甲基苯基]-1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-1-环丙烷甲酰胺(I-3)，

N-[4-吗啉基-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-4)，

N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-5)，

N-[4-(1-甲基哌啶-4-基氧基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-6)，

N-[4-[(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基]-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-7)，

N-[4-(3-吗啉基丙氧基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-8)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(6-甲氨基嘧啶-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-1)，

N-[3-[1-[6-(甲氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]-4-甲基苯基]-4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(II-2)，

N-[5-[3-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]脲基]-2-甲基苯基]-1-[6-(甲氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰胺(II-3)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[2-甲基-2-[6-(甲氨基)嘧啶-4-基]丙酰氨基]苯甲酰胺(II-4)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-(2-羟乙基氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-5)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-[2-(甲氧基乙氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-6)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-[3-(二甲氨基丙氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-7)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-氟-3-[1-[6-[1-(甲基哌啶-4-基)甲氨基]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-8)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-[2-(四氢吡咯-1-基)乙氨基]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-9)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-[2-(哌啶-1-基)乙氨基]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-10)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-(3-吗啉基丙氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-11)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-(1-甲基哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-12)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-[(1-甲基哌啶基-4-基)甲氨基]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-13)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氨基]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-14)，

N-[4-[1-(甲基哌啶-4-基)氧基]-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-(甲氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-15)，

N-[4-[(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基]-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-(甲氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-16)，

N-[4-(3-吗啉基丙氧基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-(甲氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-17)，

N-[4-(吗啉基甲基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-(甲氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-18)，

N-[4-[(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基]-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[2-甲基-2-[6-(甲氨基)嘧啶-4-基]丙酰氨基]苯甲酰胺(II-19)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[2-(甲氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-20)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[2-[3-(二甲氨基)丙氨基]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-21)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[2-[3-(吗啉基)丙氨基]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-22)，

N-[4-(3-吗啉基丙氧基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[2-(甲氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-23)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-(甲基氨基)嘧啶-4-基]环戊烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(II-24)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(9H-嘌呤-6-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(III-1)，

N-(3-异丙基苯基)-4-甲基-3-[1-(9H-嘌呤-6-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(III-2)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-氟-3-[1-(9H-嘌呤-6-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(III-3)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[2-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基)丙酰氨基]苯甲酰胺(III-4)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(9H-嘌呤-6-基)环戊烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(III-5)，

N-[4-(吗啉基甲基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(9H-嘌呤-6-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(III-6)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-(2-氨甲酰基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(IV-1)，

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[6-(2-甲氨基甲酰基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(IV-2)。

根据本发明，药学上可接受的盐包括通式I化合物与下列酸形成的酸加成盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘磺酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、苯磺酸、琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸或杏仁酸。此外还包括无机碱的酸式盐，如：含有碱性金属阳离子、碱土金属阳离子、铵阳离子盐。

本发明进一步涉及通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或药学上可接受的载体。

本发明进一步涉及通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或包含其的药物组合物在制备用于预防或治疗与Raf激酶抑制剂有关的疾病的药物中的用途。

本发明进一步涉及通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或包含其的药物组合物在制备治疗癌症类疾病的药物中的用途，其中所述的癌症选自黑色素瘤、肝癌、肾癌、急性白血病、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、皮肤癌、结肠直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、骨髓增生异常综合症、食管癌、胃癌或间皮瘤等。

本发明的部分化合物制备方法如下：

方法1-1：

方法1-2：

方法1-3：

方法1-4：

本发明化合物都可以用上述或类似上述的制备方法制备得到，根据取代基的不同和取代基位置的不同选用相应的原料即可。

方法1-1至方法1-4中所应用的RNH₂包括双芳基酰胺苯胺、双芳基胺酰苯胺、双芳基脲苯胺和Het¹取代的双芳基酰胺苯胺。这4种胺的合成方法如下：

方法1-5：双芳基酰胺苯胺类化合物的合成方法：

方法1-6：双芳基胺酰苯胺类化合物的合成方法：

方法1-7：双芳基脲苯胺类化合物的合成方法：

方法1-8：Het¹取代的双芳基酰胺苯胺的合成方法：

本发明中胺类化合物都可以用上述的制备方法制备得到，根据取代基的不同选用相应的原料即可。

下面是部分药理学试验及结果：

(1)部分化合物对Raf^V600E激酶抑制活性的研究

材料

仪器：伯乐Westernblot电泳仪(美国BIO-RAD公司)；黑壁黑底384孔板(美国Corning公司)；平板摇床(江苏省光明实验仪器厂)。

试剂：B-Raf(truncated)(美国Sigma)；Lck(truncated)；MEK1unactive(美国Sigma)；AssayDilutionBuffer1(美国Sigma)；Magnesium/ATPCocktail(美国Sigma)；Anti-phospho-MEK1(Ser218/222)/MEK2(美国Sigma)；Goatanti-rabbitHRPconjugatedlgG(美国Sigma)；DMSO(美国Sigma)。

方法

取EP管(50μL)，加入20μLMagnesium/ATPCocktail；加入1μLB-Raf；加入待筛药物2μL(1.0×10^-5mol/mL)；加入0.84μLMEK1unactive，再加入14.16μLAssayDilutionBuffer1；微型离心机离心后，摇床上30℃30min；再加入40μLsamplebuffer，沸水煮5min；每孔10μL，SDS-PAGE电泳，转膜，三蒸水洗膜两遍；含5％脱脂奶粉的TBST封闭，温室摇床上轻轻摇动30min；孵一抗Anti-phospho-MEK1(Ser218/222)/MEK2，4℃过夜；三蒸孵Goatanti-rabbitHRPconjugatedlgG二抗；三蒸水洗膜两遍；用TBS-0.05％Tween-20洗膜3-5min；三蒸水漂洗膜4-5次；Westernblot化学发光检测。

部分优选化合物抑制Raf^V600E的实验结果：

(2)部分化合物对Raf^V600E激酶高表达的癌细胞抑制活性的研究

材料：

仪器：超净台(上海上净净化设备有限公司产)；电子天平(METTLERTOLEDOAL104型)；离心机(Anke/飞鸽TDL80-2B)；倒置显微镜(LeicaDMI3000B，使用LASV3.7软件)；CO₂培养箱(Thermo)；酶标仪(TECANGENion)。

试剂：CellTiter-Glo(CTG)(Promega，产品号：G7573)；培养基(DMEM、RPMI1640、EMEM、L-15(100％air)和McCoy′s5a)：(Gibco产)；FBS-胎牛血清(Gibco产，批号为C2027050)；胰酶(Amresco产)；PBS，PH7.2(Gibco，产品号：10010-023)；DMSO(Sigma，产品号D2650).

细胞株：人肾癌细胞株A498；人结肠癌细胞株HT-29；人结肠癌细胞株COLO-205；人大细胞肺癌细胞株NCI-H460；人黑色素瘤细胞株A375；人肝癌细胞株HepG2；肺癌细胞株EBC-1；人甲状腺鳞癌细胞株SW579；急性白血病细胞株MV4-11。

阳性对照药：Vemurafenib、Dabrafenib、Sorafenibtosylate、LY3009120

方法：CellTiter-Glo法测试细胞活性抑制率及细胞活性抑制IC₅₀值

细胞铺板：收集处于指数生长期的细胞并用Vi-CellXR细胞计数仪进行活细胞计数。用培养基将细胞悬液调整到适当的浓度，每孔加90μl细胞悬液于96-孔细胞培养板。铺好的细胞置于37℃，5％CO₂的培养箱培养24小时。

化合物处理：对设定为化合物处理板，每株细胞每孔分别加10μl相应的3倍梯度稀释的10×化合物溶液(最终起始浓度20μM或10μM)，每个药物浓度各3个复孔。

读T3：药物处理72小时后，每孔加入50μl预先融化并平衡到室温的CTG溶液，用微孔板震荡器混匀2分钟，于室温放置10分钟后用Envision2104读板仪测定luminescence信号。

数据分析与实验结果：POC(percentofcontrol：与对照的百分比)的计算公式：化合物处理孔的值/DMSO处理孔的平均值*100％，其中化合物处理孔的值为药物处理孔的T3luminescence值，DMSO处理孔的平均值为每块板上6个DMSO处理孔的T3luminescence值的平均值，应用GraphPadPrism5.0软件，使用非线性回归模型绘制S型剂量-POC曲线并计算IC₅₀值。

细胞活性测试的结果(部分化合物测试IC₅₀值)：

(ND表示未测试)

药理测试结果表明，通式I的化合物及其药学上可接受的盐对体外Raf激酶均有不同程度的抑制作用。因此，通式I化合物及其药学上可接受的盐可以用于预防或治疗与Raf激酶抑制剂有关的临床病症。所述与Raf激酶抑制剂有关的疾病可以是黑色素瘤、肝癌、肾癌、急性白血病、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、皮肤癌、结肠直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、骨髓增生异常综合症、食管癌、胃癌或间皮瘤。

具体实施方式

¹H-NMR用JEOLFX90Q型傅立叶变换核磁共振仪、BRUKERACF-300型核磁共振仪和BRUKERAM-500型核磁共振仪完成(TMS内标)；MS用Nicolet2000型傅立叶变换质谱仪和MAT-212型质谱仪测定。

实施例1

4-氯-7-(4-甲基苯磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(I-a)

在250mL茄形瓶中加入4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(3.0g，20mmo])和三乙胺(6.1g，60mmol)，加100mL无水二氯甲烷搅拌溶解，加入对甲苯磺酰氯(2.6g，24mmol)，室温搅拌5h，TLC检测原料点消失。减压蒸除溶剂，柱层析分离纯化得白色固体I-a4.85g，收率79.2％。ESI-MSm/z：308[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ2.37(3H，s，CH₃)，6.96(1H，d，ArH，J＝4.0Hz)，7.48(2H，d，ArH，J＝8.1Hz)，8.05(2H，d，ArH，J＝8.1Hz)，8.12(1H，d，ArH，J＝4.0Hz)，8.82(1H，s，ArH)。

实施例2

2-[7-(4-甲基苯磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]丙二酸二乙酯(I-b)

在250mL茄形瓶中加入丙二酸二乙酯(5.3g，33mmol)，50mL无水THF溶解，冰浴下缓慢加入氢化钠(60％，800mg，33mmol)并搅拌5min，将I-a(1.0g，3.3mmol)以20mL无水THF溶解后缓慢加入反应瓶中，回流2.5h，TLC检测原料点消失。冷却至室温，倒入饱和氯化铵溶液100mL中，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机层，饱和氯化钠洗涤(30mL×3)，无水硫酸镁干燥过夜。减压蒸除溶剂，柱层析纯化，得无色油状物I-b1.4g，收率98.6％。ESI-MSm/z：432[M+H]⁺。

实施例3

2-[7-(4-甲基苯磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]乙酸乙酯(I-c)

将I-b(850mg，2mmol)溶于无水乙醇50mL中，加入乙醇钠(13mg，0.2mmol)，回流2.5h，TLC检测原料点消失。冷却至室温，稀盐酸(1mol/L)调节pH至中性，减压蒸除溶剂，柱层析分离纯化得白色固体I-c530mg，收率77.0％。ESI-MSm/z：360[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ1.19(3H，t，CH₂CH₃，J＝7.1Hz)，2.36(3H，s，ArCH₃)，4.08(2H，q，CH₂CH₃，J＝7.1Hz)，4.34(2H，s，CH₂CO)，7.03(1H，d，ArH，J＝4.0Hz)，7.46(1H，d，ArH，J＝8.2Hz)，7.99(1H，d，ArH，J＝4.0Hz)，8.04(2H，d，ArH，J＝8.2Hz)，8.87(1H，s，ArH)。

实施例4

1-[7-(4-甲基苯磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酸乙酯(I-d)

将I-c(1.0g2.7mmol)溶于无水DMF40mL中，冰浴下缓慢加入氢氧化钠(334mg，8.3mmol)，搅拌5min后滴加1，2-二溴乙烷(2.8g，14mmol)，升温至室温搅拌5h，TLC检测原料点消失。加入水100mL，以稀盐酸(1mol/L)调节pH至中性，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机层，饱和氯化钠洗涤(50mL×3)，无水硫酸镁干燥。减压蒸除溶剂，柱层析分离纯化得棕黄色固体I-d350mg，收率33，0％。ESI-MSm/z：386[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ1.04(3H，t，CH₂CH₃，J＝7.0Hz)，1.51～1.54(2H，m，CH₂CH₂)，1.57～1.62(2H，m，CH₂CH₂)，2.36(3H，s，ArCH₃)，4.06(2H，t，CH₂CH₃)，6.84(1H，d，ArH，J＝4.0Hz)，7.47(2H，d，ArH，J＝8.1Hz)，7.98(1H，d，ArH，J＝4.0Hz)，8.06(2H，d，ArH，J＝8.1Hz)，8.86(1H，s，ArH)。

实施例5

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[7-(4-甲基苯磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-e-1)

在100mL三颈瓶中加入I-d(100mg，0.26mmol)，N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-氨基苯甲酰胺(V-c-1，85mg，0.26mmol)，无水甲苯30mL溶解，氮气保护，冰浴下缓慢加入三甲基铝的甲苯溶液(2M，0.39mL，0.78mmol)，缓慢升温至80℃搅拌5h，TLC检测原料点消失。以1M稀盐酸萃灭反应，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，饱和氯化钠溶液洗涤(30mL×3)，无水硫酸镁干燥。减压蒸除溶剂得黄色固体I-e-193mg，收率53.7％，直接投下一步反应。

实施例6

N-[4-甲基-3-[1-[7-(4-甲基苯磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯基]-4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(I-e-2)

以I-d(100mg，0.26mmol)，N-(4-甲基-3-氨基苯基)-4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(VI-c，85mg，0.26mmol)为原料，操作方法同I-e-1，得黄色固体I-e-287mg，收率50.2％，直接投下一步反应。

实施例7

N-[5-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基脲基]-2-甲基苯基]-1-[7-(4-甲基苯磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰胺(I-e-3)

以I-d(100mg，0.26mmol)，N-(3-氨基-4-甲基苯基)-N′-(4-氯-3-三氟甲基苯基)脲(VII-b，89mg，0.26mmol)为原料，操作方法同I-e-1，得黄色固体I-e-397mg，收率54.7％，直接投下一步反应。

实施例8

N-[4-吗啉基-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[7-(4-甲基苯磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-e-4)

以I-d(100mg，0.26mmol)，N-[4-吗啉基-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-氨基苯甲酰胺(VIII-d-1，65mg，0.26mmol)为原料，操作方法同I-e-1，得黄色固体I-e-489.5mg，收率47.9％，直接投下一步反应。

实施例9

N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[7-(4-甲基苯磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-e-5)

以I-d(100mg，0.26mmol)，N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-氨基苯甲酰胺(VIII-d-2，56mg，0.26mmol)为原料，操作方法同I-e-1，得黄色固体I-e-5106mg，收率55.7％，直接投下一步反应。

实施例10

N-[4-(1-甲基哌啶-4-基氧基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[7-(4-甲基苯磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-e-6)

以I-d(100mg，0.26mmol)，N-[4-(1-甲基哌啶-4-基氧基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-氨基苯甲酰胺(VIII-h-1，56mg，0.26mmol)为原料，操作方法同I-e-1，得黄色固体I-e-5113mg，收率58.2％，直接投下一步反应。

实施例11

N-[4-[(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基]-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[7-(4-甲基苯磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-e-7)

以I-d(100mg，0.26mmol)，N-[4-[(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-氨基苯甲酰胺(VIII-h-2，56mg，0.26mmol)为原料，操作方法同I-e-1，得黄色固体I-e-7107.4mg，收率54.3％，直接投下一步反应。

实施例12

N-[4-(3-吗啉基丙氧基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-[7-(4-甲基苯磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-e-8)

以I-d(100mg，0.26mmol)，N-[4-(3-吗啉基丙氧基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-氨基苯甲酰胺((VIII-h-3，56mg，0.26mmol)为原料，操作方法同I-e-1，得黄色固体I-e-8119.6mg，收率59.2％，直接投下一步反应。

实施例13

N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-1)

在50mL茄形瓶中加入I-e-1(93mg，0.14mmol)，乙醇20mL溶解，滴加1M氢氧化钠溶液0.5mL，室温搅拌1h，TLC检测原料点消失。减压蒸除。柱层析(洗脱液：乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)分离纯化得黄色固体I-153mg，收率74.4％.ESI-MS：m/z：513[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ1.68～1.71(2H，m，CH₂)，1.90～1.98(2H，m，CH₂)，2.27(3H，s，ArCH₃)，6.58(1H，d，ArH，J＝1.7Hz)，7.37(1H，d，ArH，J＝8.0Hz)，7.57(1H，t，J＝2.8Hz)，7.71(2H，d，ArH，J＝8.5Hz)，8.08(1H，s，ArH)，8.12(1H，d，ArH，J＝8.9Hz)，8.35(1H，d，ArH，J＝2.3Hz)，8.75(1H，s，ArH)，10.10(1H，s，CONH)，10.57(1H，s，CONH)，12.18(1H，s，NH)。

实施例14

N-[3-[1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基]-4-甲基苯基]-4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(I-2)

以I-e-2(87mg，0.13mmol)为原料，操作方法同I-1，得黄色固体45mg，收率67.3％。ESI-MSm/z：513[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ1.61～1.63(2H，m，CH₂)，1.65～1.67(2H，m，CH₂)，2.10(3H，s，ArCH₃)，6.58(1H，s，ArH)，7.18(1H，d，ArH，J＝8.2Hz)，7.51～7.56(2H，m，ArH)，7.90～7.95(2H，m，ArH)，8.26(1H，d，ArH，J＝8.3Hz)，8.38(1H，s，ArH)，8.74(1H，s，ArH)，10.05(1H，s，CONH)，10.50(1H，s，CONH)，12.19(1H，s，NH)。

实施例15

N-[5-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基脲基]-2-甲基苯基]-1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-1-环丙烷甲酰胺(I-3)

以I-e-3(97mg，0.14mmol)为原料，操作方法同I-1，得黄色固体53mg，收率70.6％。ESI-MSm/z：529[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ1.61～1.63(2H，m，CH₂)，1.69～1.71(2H，m，CH₂)，2.06(3H，s，ArCH₃)，7.07(1H，d，ArH，J＝8.2Hz)，7.20(1H，d，ArH，J＝7.8Hz)，7.56～7.69(3H，m，ArH)，7.95(1H，s，ArH)，8.11(1H，s，ArH)，8.74(1H，s，NHCONH)，8.84(1H，s，ArH)，9.04(1H，s，NHCONH)，10.00(1H，s，CONH)，12.21(1H，s，NH)。

实施例16

N-[4-吗啉基-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-4)

以I-e-4(86.3mg，0.12mmol)为原料，操作方法同I-1，得黄色固体56.6mg，收率83.5％。ESI-MSm/z：565[M+H]⁺。¹H-NMR[300MHz，DMSO-d₆]：δ1.62(2H，m，CH₂)，1.69(2H，m，CH₂)，2.20(3H，s，ArCH₃)，2.84(4H，s，CH₂NCH₂)，3.70(4H，s，CH₂OCH₂)，6.59(1H，m，ArH)，7.36(1H，d，ArH，J＝7.7Hz)，7.58～7.61(2H，m，ArH)，7.70～7.73(1H，d，ArH，J＝7.9Hz)，8.06(1H，s，ArH)，8.15(1H，s，ArH)，8.75(1H，s，ArH)，10.08(1H，s，CONH)，10.42(1H，s，CONH)，12.20(1H，s，NH)。

实施例17

N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-5)

以I-e-5(102.5mg，0.14mmol)为原料，操作方法同I-e-1，得黄色固体67.8mg，收率83.9％。ESI-MSm/z：578[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ1.61(2H，m，CH₂)，1.68(2H，m，CH₂)，2.37(3H，s，NCH₃)，2.56(3H，s，ArCH₃)，2.84～2.88(4H，m，CH₂NCH₂)，3.68～3.71(4H，m，CH₂NCH₂)，6.57(1H，d，ArH，J＝3.6Hz)，7.20(1H，d，ArH，J＝6.0Hz)，7.25(1H，d，ArH，J＝5.6Hz)，7.30(1H，d，ArH，J＝4.0Hz)，7.60(2H，d，ArH，J＝7.9Hz)，7.77(1H，d，ArH，J＝8.5Hz)，7.94(1H，d，ArH，J＝2.1Hz)，8.45(1H，m，ArH)，8.77(1H，s，ArH)，8.83(1H，s，CONH)，9.68(1H，s，CONH)，11.75(1H，s，NH)。

实施例18

N-[4-(1-甲基哌啶-4-基氧基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-6)

以I-e-6(89.6mg，0.12mmol)为原料，操作方法同I-1，得黄色固体59.9mg，收率84.2％。ESI-MSm/z：593[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ1.59～1.61(2H，m，CH₂)，1.68～1.71(5H，m，CH₂)，1.91～1.93(3H，m)，2.20(4H，m)，2.22(3H，s，ArCH₃)，2.34(2H，m，NCH₂)，2.58(2H，m，NCH₂)，3.99～4.06(1H，m，OCH)，6.59(1H，d，ArH，J＝2.0Hz)，7.30～7.36(2H，m，ArH)，7.56～7.58(1H，m，ArH)，7.69～7.72(1H，m，ArH)，7.98(1H，d，ArH，J＝8.9Hz)，8.05～8.08(2H，m，ArH)，8.75(1H，s，ArH)，10.08(1H，s，CONH)，10.30(1H，s，CONH)，12.21(1H，s，NH)。

实施例19

N-[4-[(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基]-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-7)

以I-e-7(91.3mg，0.12mmol)为原料，操作方法同I-1，得黄色固体61mg，收率83.8％。ESI-MSm/z：607[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ1.39～1.43(4H，m，CH₂CHCH₂)，δ1.61(2H，m，CH₂)，1.68(2H，m，CH₂)，1.76～1.80(1H，m，CH)，2.19(3H，s，NCH₃)，2.35(3H，s，ArCH₃)，2.50(4H，m，CH₂NCH₂)，3.96～3.97(2H，m，OCH₂)，6.58(1H，d，ArH，J＝2.0Hz)，7.26(1H，d，ArH，J＝9.0Hz)，7.35(1H，d，ArH，J＝8.1Hz)，7.57(1H，m，ArH)，7.71(2H，m，ArH，J＝8.0Hz)，8.00(1H，d，ArH，J＝8.7Hz)，8.05～8.08(2H，m，ArH)，8.75(1H，s，ArH)，10.00(1H，s，CONH)，10.30(1H，s，CONH)，12.21(1H，s，NH)。

实施例20

N-[4-(3-吗啉基丙氧基)-3-(三氟甲基)苯基]-4-甲基-3-[1-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)环丙烷-1-甲酰氨基]苯甲酰胺(I-8)

以I-e-8(93.2mg，0.12mmol)为原料，操作方法同I-1，得黄色固体62.5mg，收率83.6％。ESI-MSm/z：623[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ1.62(2H，m，CH₂)，1.68(2H，m，CH₂)，1.85～1.90(2H，m，OCH₂CH₂CH₂N)，2.27(3H，s，ArCH₃)，2.34(4H，m，CH₂NCH₂)，2.43(2H，t，CH₂N)，3.55～3.58(4H，m，CH₂OCH₂)，4.11～4.15(2H，m，OCH₂CH₂)，6.59(1H，d，ArH，J＝2.4Hz)，7.27(1H，d，ArH，J＝8.8Hz)，7.35(1H，d，ArH，J＝7.9Hz)，7.58(1H，m，ArH)，7.69～7.72(1H，d，ArH，J＝7.7Hz)，7.99(1H，d，ArH，J＝9Hz)，8.05～8.08(2H，m，ArH)，8.75(1H，s，ArH)，10.00(1H，s，CONH)，10.30(1H，s，CONH)，12.21(1H，s，NH)。

实施例21

(6-氯嘧啶-4-基)丙二酸二乙酯(II-a-1)

以4，6-二氯嘧啶5.0g(33mmol)为原料，制备方法同I-b，得浅黄色油状物II-a-19.0g，收率98.3％。产物无需纯化，直接投下一步反应。

实施例22

(2-氯嘧啶-4-基)丙二酸二乙酯(II-a-2)

以2，4-二氯嘧啶5.0g(33mmol)为原料，制备方法同I-b，得浅黄色油状物II-a-28.8g，收率95.6％。产物无需纯化，直接投下一步反应。

实施例23

(6-氯嘧啶-4-基)乙酸乙酯(II-b-1)

以II-a-19g(33mmol)为原料，制备方法同I-c，得黄色油状物II-b-15.7g，收率86.6％。

实施例24

(2-氯嘧啶-4-基)乙酸乙酯(II-b-2)

以II-a-29.0g(33mmol)为原料，制备方法同I-c，得黄色油状物II-b-25.9g，收率89.2％。

实施例25

1-(6-氯嘧啶-4-基)环丙烷-1-乙酸乙酯(II-c-1)

以II-b-15.6g(28mmol)为原料，制备方法同I-d，得黄色油状物产品II-c-15.5g，收率87.3％。

实施例26

2-(6-氯嘧啶-4-基)-2-甲基丙酸乙酯(II-c-2)

以II-b-12.0g(10mmol)和碘甲烷5.7g(40mmol)为原料，制备方法同I-d，得黄色油状物II-c-22.1g，收率90.7％。

实施例27

(2-氯嘧啶-4-基)环丙烷-1-乙酸乙酯(II-c-3)

以II-b-25.6g(28mmol)为原料，制备方法同I-d，得黄色油状物产品II-c-35.5g，收率87.3％。

实施例28

1-(6-氯嘧啶-4-基)环戊烷-1-乙酸乙酯(II-c-4)

以II-b-12.0g(10mmol)和1，4-二溴丁烷8.6g(40mmol)为原料，制备方法同I-d，得黄色油状物产品II-c-42.1g，收率82.3％。

实施例29

1-(6-甲氨基嘧啶-4-基)环丙烷-1-乙酸乙酯(II-d-1)

在250mL的茄形瓶中将II-c-15.7g(28mmol)溶于异丙醇，在冰浴下滴加33％甲胺醇溶液24mL(170mmol)。室温搅拌2h，减压蒸除溶剂。水30mL洗涤，乙酸乙酯50mL提取，饱和食盐水30mL洗涤，无水硫酸镁干燥。柱层析分离纯化得白色固体II-d-13.3g，收率87.9％。MS(LR-ESI)：m/z：222.1[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ1.18(3H，t，OCH₂CH₃，J＝7.1Hz)，1.42-1.48(4H，m，CH₂)，2.81(3Hd，NHCH₃，J＝4.2Hz)，4.01～4.16(2H，m，OCH₂CH₃)，6.72(1H，s，ArH)，7.35(1H，s，NH)，8.32(1H，s，ArH)。

实施例30

2-甲基-2-[6-(甲氨基)嘧啶-4-基]丙酸乙酯(II-d-2)

II-c-22.0g(8.7mmol)和甲胺醇溶液6mL(43.5mmol)为原料，制备方法同II-d-1，得黄色固体II-d-111.8g，收率93.5％。MS(LR-ESI)：m/z：224.1[M+H]⁺。

实施例31

1-[6-(2-羟基乙氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-乙酸乙酯(II-d-3)

在250mL茄形瓶中依次加入II-c-15.3g(24mmol)、乙醇胺1.74mL(29mmol)、碳酸铯15.6g(48mmol)、2滴无水乙醇和无水DMF60mL，60℃回流3小时。向反应液中加水30mL，用二氯甲烷萃取(40mL×3)，合并有机层，饱和食盐水30mL洗涤，无水硫酸钠干燥。经柱层析分离纯化得白色固体II-d-35.5g，收率87.3％，MS(LR-ESI)：m/z：252[M+H]⁺。

实施例32

1-[6-(2-甲氧基乙氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-乙酸乙酯(II-d-4)

以II-c-15.5g(24mmol)和2-甲氧基乙胺1.8g(24mmol)为原料，制备方法同II-d-3，得白色固体II-d-45.4g，收率85.2％。MS(LR-ESI)：m/z：266.3[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)：δ1.11(3H，t，OCH₂CH₃，J＝7.1Hz)，1.25～1.27(4H，m，CH₂CH₂)，3.20(3H，s，OCH₃)，3.38～3.42(4H，m，OCH₂CH₂NH)，4.00-4.072(2H，m，OCH₂CH₃)，6.68(1H，m，NH)，7.45(1H，s，ArH)，8.25(1H，s，ArH)。

实施例33

1-[6-(3-二甲氨基丙氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-乙酸乙酯(II-d-5)

以II-c-15.5g(24mmol)和3-二甲氨基丙胺为原料，制备方法同II-d-3，得白色固体II-d-55.9g，收率84.6％。MS(LR-ESI)：m/z：293.2[M+H]⁺。

实施例34

1-[6-[1-(甲基哌啶-4-基)甲氨基]嘧啶-4-基]环丙烷-1-乙酸乙酯(II-d-6)

以II-c-12.0g(8.8mmol)，1-甲基-4-哌啶甲胺5mL(35.2mmol)和二异丙基乙基胺溶液7.3mL(44.1mmol)为原料，制备方法同II-d-3，得黄色固体II-d-62.3g，收率82.3％。MS(LR-ESI)：m/z：319[M+H]⁺。

实施例35

1-[6-[2-(四氢吡咯-1-基)乙氨基]嘧啶-4-基]环丙烷-1-乙酸乙酯(II-d-7)

以II-c-12.0g(8.8mmol)，2-(四氢吡咯-1-基)乙胺4.0g(35.2mmol)和二异丙基乙基胺溶液7.3mL(44.1mmol)为原料，制备方法同II-d-3，得黄色固体II-d-72.24g，收率83.6％。MS(LR-ESI)：m/z：305[M+H]⁺。

实施例36

1-[6-[2-(哌啶-1-基)乙氨基]-嘧啶-4-基]环丙烷-1-乙酸乙酯(II-d-8)

以II-c-12.0g(8.8mmol)，2-(哌啶-1-基)乙胺4.5g(35.2mmol)和二异丙基乙基胺溶液7.3mL(44.1mmol)为原料，制备方法同II-d-3，得黄色固体II-d-82.44g，收率87％。MS(LR-ESI)：m/z：319.2[M+H]⁺。

实施例37

1-[6-(3-吗啉基丙氨基)嘧啶-4-基]环丙烷-1-乙酸乙酯(II-d-9)

以II-c-42.0g(8.8mmol)，3-吗啉基丙胺4.3mL(35.2mmol)和二异丙基乙基胺溶液7.3mL(44.1mmol)为原料，制备方法同II-d-3，得黄色固体II-d-92.44g，收率87％。MS(LR-ESI)：m/z：319.2[M+H]

新型芳酰胺类Raf激酶抑制剂及其制备方法和用途专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。