专利摘要

本发明公开了一种用于从发酵液中分离纯化维生素B12的高分子吸附材料，涉及生物医药提取技术领域，其制备方法包括如下步骤：(1)大孔吸附树脂的制备；(2)大孔吸附树脂的预处理；(3)大孔吸附树脂的改性。本发明所制大孔吸附树脂对维生素B12的吸附量达到18.5mg/g以上，经65％甲醇溶液冲洗后能实现维生素B12的高效解吸，解吸率达到98.5％以上，所制维生素B12的纯度达到58％以上，因此该大孔吸附树脂适用于从发酵液中分离纯化维生素B12。

权利要求

1.用于从发酵液中分离纯化维生素B₁₂的高分子吸附材料，其特征在于：其制备方法包括如下步骤：

(1)大孔吸附树脂的制备：向水中按比例加入甲基丙烯酸氢化松香醇酯、季戊四醇三丙烯酸酯、丙烯酸二甲氨基乙酯、纳米致孔剂和引发剂，充分混合后于超声频率40kHz、输出功率200W下超声处理15min，再于微波频率2450MHz、输出功率700W下微波处理10min，并于0-5℃环境中静置30min，混合均匀后继续微波处理10min，然后于-5-0℃环境中静置15min，混合均匀后再次微波处理10min，所得混合液以5℃/min的降温速度降温至40-45℃保温混合1h，随后将混合液固液分离，所得固相用40-45℃温水水洗三次得到白球，最后将白球于60-65℃下真空干燥，即得大孔吸附树脂；

(2)大孔吸附树脂的预处理：向上述所制大孔吸附树脂中加入泊洛沙姆、N-羟甲基丙烯酰胺和水解聚马来酸酐，并以5℃/min的升温速度升温至65-70℃保温混合30min，再向所得混合物中加入3倍重量30-35℃水，继续以5℃/min的升温速度升温至回流状态保温混合15min，然后自然冷却至室温，过滤，所得树脂球体水洗三次，最后于60-65℃下真空干燥；

(3)大孔吸附树脂的改性：向烯丙基缩水甘油醚中加入聚乙烯醇缩丁醛和纳米二氧化钛，以5℃/min的升温速度升温至115-120℃保温混合15min，再加入经预处理后的大孔吸附树脂，继续在115-120℃保温混合30min，待自然冷却至室温后水洗三次，最后经所得树脂球体于60-65℃下真空干燥。

2.根据权利要求1所述的用于从发酵液中分离纯化维生素B₁₂的高分子吸附材料，其特征在于：所述步骤(1)中水、甲基丙烯酸氢化松香醇酯、季戊四醇三丙烯酸酯、丙烯酸二甲氨基乙酯、纳米致孔剂和引发剂的质量用量比为400-500:40-50:30-40:10-20:40-50:0.5-1。

3.根据权利要求1所述的用于从发酵液中分离纯化维生素B₁₂的高分子吸附材料，其特征在于：所述步骤(2)中大孔吸附树脂、泊洛沙姆、N-羟甲基丙烯酰胺和水解聚马来酸酐的质量用量比为60-65:1-2:0.5-1:0.5-1。

4.根据权利要求1所述的用于从发酵液中分离纯化维生素B₁₂的高分子吸附材料，其特征在于：所述步骤(3)中大孔吸附树脂、烯丙基缩水甘油醚、聚乙烯醇缩丁醛和纳米二氧化钛的质量用量比为60-65:3-5:0.5-1:3-5。

5.根据权利要求1所述的用于从发酵液中分离纯化维生素B₁₂的高分子吸附材料，其特征在于：所述纳米致孔剂由如下重量份数的原料制成：微晶纤维素5-10份、多聚谷氨酸3-5份、氢化蓖麻油1-2份、聚二甲基二烯丙基氯化铵0.5-1份、葡萄糖酸钠0.5-1份、二茂铁0.05-0.1份、水30-50份，其制备方法为：向水中加入微晶纤维素和氢化蓖麻油，并升温至回流状态保温混合15min，待自然冷却至40-45℃后加入多聚谷氨酸和聚二甲基二烯丙基氯化铵，搅拌30min形成乳液，然后加入葡萄糖酸钠和二茂铁，混合均匀后将所得混合物送入喷雾干燥机中，干燥所得颗粒经研磨制成纳米粉末，最后将纳米粉末加水制成固含量30-35wt％的乳液，即得纳米致孔剂。

6.根据权利要求1所述的用于从发酵液中分离纯化维生素B₁₂的高分子吸附材料，其特征在于：所述纳米二氧化钛是由二氧化钛经改性处理后制成的纳米粉体，其制备方法为：向二氧化钛中加入交联聚维酮和六羟甲基三聚氰胺六甲醚，先以5℃/min的升温速度升温至120-125℃保温混合30min，再加入阴离子聚丙烯酰胺和环氧大豆油，继续在120-125℃下保温混合30min，所得混合物以10℃/min的降温速度降温至40-50℃，并加入40-50℃水，以10℃/min的升温速度升温至回流状态保温混合10min，经自然冷却至室温后静置1h，过滤，所得固体于75-80℃下烘干，最后送入纳米研磨机中，经研磨得到纳米二氧化钛。

7.根据权利要求6所述的用于从发酵液中分离纯化维生素B₁₂的高分子吸附材料，其特征在于：所述二氧化钛、交联聚维酮、六羟甲基三聚氰胺六甲醚、阴离子聚丙烯酰胺、环氧大豆油和水的质量用量比为30-40:3-5:0.5-1:2-3:0.1-0.3:100-150。

说明书

技术领域：

本发明涉及生物医药纯化技术领域，具体涉及一种用于从发酵液中分离纯化维生素B₁₂的高分子吸附材料。

背景技术：

维生素B₁₂，又称钴胺素，是一类含有咕啉环化合物的总称。目前，维生素B₁₂的制备方法主要分为化学合成法和发酵生产法两种。其中，化学合成生产维生素B₁₂的成本高，副产物多，难以提纯。维生素B₁₂的发酵生产法主要有抗生素废液提取、放线菌发酵、丙酸菌发酵和采用转基因的E.Coli发酵生产。脱氮假单胞杆菌是今年兴起的新型维生素B₁₂好氧发酵产生菌种，具有生长快且产率高等特点，所产生的维生素B₁₂以相对稳定羟钴胺素为主要形式，避免了在转化过程中加入剧毒氰化物的危险。

传统维生素B₁₂的分离纯化采用有机溶剂或有机溶剂与水的混合液进行萃取，存在有机溶剂用量大和因部分有机溶剂易挥发存在的环境污染问题，因此人们转为尝试用离子交换树脂提取维生素B₁₂，并取得了较好的效果，具有吸附量高和解吸性好的特点，但洗脱剂用量较大。为了提高从发酵液中分离纯化维生素B₁₂的收率和纯度，同时降低分离纯化成本，目前人们致力于寻找吸附量大、吸附速度快且解吸容易的高分子吸附材料。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于提供一种吸附量大、吸附速度快且解吸容易的用于从发酵液中分离纯化维生素B₁₂的高分子吸附材料。

本发明所要解决的技术问题采用以下的技术方案来实现：

用于从发酵液中分离纯化维生素B₁₂的高分子吸附材料，其制备方法包括如下步骤：

(1)大孔吸附树脂的制备：向水中按比例加入甲基丙烯酸氢化松香醇酯、季戊四醇三丙烯酸酯、丙烯酸二甲氨基乙酯、纳米致孔剂和引发剂，充分混合后于超声频率40kHz、输出功率200W下超声处理15min，再于微波频率2450MHz、输出功率700W下微波处理10min，并于0-5℃环境中静置30min，混合均匀后继续微波处理10min，然后于-5-0℃环境中静置15min，混合均匀后再次微波处理10min，所得混合液以5℃/min的降温速度降温至40-45℃保温混合1h，随后将混合液固液分离，所得固相用40-45℃温水水洗三次得到白球，最后将白球于60-65℃下真空干燥，即得大孔吸附树脂；

(2)大孔吸附树脂的预处理：向上述所制大孔吸附树脂中加入泊洛沙姆、N-羟甲基丙烯酰胺和水解聚马来酸酐，并以5℃/min的升温速度升温至65-70℃保温混合30min，再向所得混合物中加入3倍重量30-35℃水，继续以5℃/min的升温速度升温至回流状态保温混合15min，然后自然冷却至室温，过滤，所得树脂球体水洗三次，最后于60-65℃下真空干燥；

(3)大孔吸附树脂的改性：向烯丙基缩水甘油醚中加入聚乙烯醇缩丁醛和纳米二氧化钛，以5℃/min的升温速度升温至115-120℃保温混合15min，再加入经预处理后的大孔吸附树脂，继续在115-120℃保温混合30min，待自然冷却至室温后水洗三次，最后经所得树脂球体于60-65℃下真空干燥。

所述步骤(1)中水、甲基丙烯酸氢化松香醇酯、季戊四醇三丙烯酸酯、丙烯酸二甲氨基乙酯、纳米致孔剂和引发剂的质量用量比为400-500:40-50:30-40:10-20:40-50:0.5-1。

所述步骤(2)中大孔吸附树脂、泊洛沙姆、N-羟甲基丙烯酰胺和水解聚马来酸酐的质量用量比为60-65:1-2:0.5-1:0.5-1。

所述步骤(3)中大孔吸附树脂、烯丙基缩水甘油醚、聚乙烯醇缩丁醛和纳米二氧化钛的质量用量比为60-65:3-5:0.5-1:3-5。

所述纳米致孔剂由如下重量份数的原料制成：微晶纤维素5-10份、多聚谷氨酸3-5份、氢化蓖麻油1-2份、聚二甲基二烯丙基氯化铵0.5-1份、葡萄糖酸钠0.5-1份、二茂铁0.05-0.1份、水30-50份，其制备方法为：向水中加入微晶纤维素和氢化蓖麻油，并升温至回流状态保温混合15min，待自然冷却至40-45℃后加入多聚谷氨酸和聚二甲基二烯丙基氯化铵，搅拌30min形成乳液，然后加入葡萄糖酸钠和二茂铁，混合均匀后将所得混合物送入喷雾干燥机中，干燥所得颗粒经研磨制成纳米粉末，最后将纳米粉末加水制成固含量30-35wt％的乳液，即得纳米致孔剂。

所述纳米二氧化钛是由二氧化钛经改性处理后制成的纳米粉体，其制备方法为：向二氧化钛中加入交联聚维酮和六羟甲基三聚氰胺六甲醚，先以5℃/min的升温速度升温至120-125℃保温混合30min，再加入阴离子聚丙烯酰胺和环氧大豆油，继续在120-125℃下保温混合30min，所得混合物以10℃/min的降温速度降温至40-50℃，并加入40-50℃水，以10℃/min的升温速度升温至回流状态保温混合10min，经自然冷却至室温后静置1h，过滤，所得固体于75-80℃下烘干，最后送入纳米研磨机中，经研磨得到纳米二氧化钛。

所述二氧化钛、交联聚维酮、六羟甲基三聚氰胺六甲醚、阴离子聚丙烯酰胺、环氧大豆油和水的质量用量比为30-40:3-5:0.5-1:2-3:0.1-0.3:100-150。

本发明的有益效果是：

(1)在大孔吸附树脂的制备阶段采用三步微波处理法协以降温操作，在缩短制备时间的同时提高大孔吸附树脂的耐高低温性；

(2)通过水溶性的泊洛沙姆、N-羟甲基丙烯酰胺和水解聚马来酸酐的预处理，降低大孔吸附树脂的表面张力，增加大孔吸附树脂的表面活性，以利于下步的改性处理；

(3)利用烯丙基缩水甘油醚、聚乙烯醇缩丁醛和纳米二氧化钛对大孔吸附树脂的改性处理，增大其比表面积，增强其吸附活性；

(4)所制大孔吸附树脂替代目前应用广泛的苯乙烯型大孔吸附树脂，避免使用苯乙烯型大孔吸附树脂存在的有毒单体残留问题，提高大孔吸附树脂的使用安全性；

(5)所制大孔吸附树脂对维生素B₁₂的吸附量达到18.5mg/g以上，经65％甲醇溶液冲洗后能实现维生素B₁₂的高效解吸，解吸率达到98.5％以上，所制维生素B₁₂的纯度达到58％以上，因此该大孔吸附树脂适用于从发酵液中分离纯化维生素B₁₂。

具体实施方式：

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。

实施例1

(1)大孔吸附树脂的制备：向400份水中按比例加入45份甲基丙烯酸氢化松香醇酯、30份季戊四醇三丙烯酸酯、15份丙烯酸二甲氨基乙酯、40份纳米致孔剂和0.5份引发剂，充分混合后于超声频率40kHz、输出功率200W下超声处理15min，再于微波频率2450MHz、输出功率700W下微波处理10min，并于0-5℃环境中静置30min，混合均匀后继续微波处理10min，然后于-5-0℃环境中静置15min，混合均匀后再次微波处理10min，所得混合液以5℃/min的降温速度降温至40-45℃保温混合1h，随后将混合液固液分离，所得固相用40-45℃温水水洗三次得到白球，最后将白球于60-65℃下真空干燥，即得大孔吸附树脂；

(2)大孔吸附树脂的预处理：向上述所制60份大孔吸附树脂中加入2份泊洛沙姆、0.5份N-羟甲基丙烯酰胺和0.5份水解聚马来酸酐，并以5℃/min的升温速度升温至65-70℃保温混合30min，再向所得混合物中加入3倍重量30-35℃水，继续以5℃/min的升温速度升温至回流状态保温混合15min，然后自然冷却至室温，过滤，所得树脂球体水洗三次，最后于60-65℃下真空干燥；

(3)大孔吸附树脂的改性：向5份烯丙基缩水甘油醚中加入0.5份聚乙烯醇缩丁醛和3份纳米二氧化钛，以5℃/min的升温速度升温至115-120℃保温混合15min，再加入经预处理后的60份大孔吸附树脂，继续在115-120℃保温混合30min，待自然冷却至室温后水洗三次，最后经所得树脂球体于60-65℃下真空干燥。

纳米致孔剂的制备：向50份水中加入5份微晶纤维素和1份氢化蓖麻油，并升温至回流状态保温混合15min，待自然冷却至40-45℃后加入5份多聚谷氨酸和0.5份聚二甲基二烯丙基氯化铵，搅拌30min形成乳液，然后加入0.5份葡萄糖酸钠和0.05份二茂铁，混合均匀后将所得混合物送入喷雾干燥机中，干燥所得颗粒经研磨制成纳米粉末，最后将纳米粉末加水制成固含量30-35wt％的乳液，即得纳米致孔剂。

纳米二氧化钛的制备：向40份二氧化钛中加入3份交联聚维酮和0.5份六羟甲基三聚氰胺六甲醚，先以5℃/min的升温速度升温至120-125℃保温混合30min，再加入3份阴离子聚丙烯酰胺和0.2份环氧大豆油，继续在120-125℃下保温混合30min，所得混合物以10℃/min的降温速度降温至40-50℃，并加入40-50℃150份水，以10℃/min的升温速度升温至回流状态保温混合10min，经自然冷却至室温后静置1h，过滤，所得固体于75-80℃下烘干，最后送入纳米研磨机中，经研磨得到纳米二氧化钛。

实施例2

(1)大孔吸附树脂的制备：向400份水中按比例加入50份甲基丙烯酸氢化松香醇酯、40份季戊四醇三丙烯酸酯、10份丙烯酸二甲氨基乙酯、50份纳米致孔剂和0.5份引发剂，充分混合后于超声频率40kHz、输出功率200W下超声处理15min，再于微波频率2450MHz、输出功率700W下微波处理10min，并于0-5℃环境中静置30min，混合均匀后继续微波处理10min，然后于-5-0℃环境中静置15min，混合均匀后再次微波处理10min，所得混合液以5℃/min的降温速度降温至40-45℃保温混合1h，随后将混合液固液分离，所得固相用40-45℃温水水洗三次得到白球，最后将白球于60-65℃下真空干燥，即得大孔吸附树脂；

(2)大孔吸附树脂的预处理：向上述所制65份大孔吸附树脂中加入2份泊洛沙姆、1份N-羟甲基丙烯酰胺和0.5份水解聚马来酸酐，并以5℃/min的升温速度升温至65-70℃保温混合30min，再向所得混合物中加入3倍重量30-35℃水，继续以5℃/min的升温速度升温至回流状态保温混合15min，然后自然冷却至室温，过滤，所得树脂球体水洗三次，最后于60-65℃下真空干燥；

(3)大孔吸附树脂的改性：向5份烯丙基缩水甘油醚中加入0.5份聚乙烯醇缩丁醛和5份纳米二氧化钛，以5℃/min的升温速度升温至115-120℃保温混合15min，再加入经预处理后的65份大孔吸附树脂，继续在115-120℃保温混合30min，待自然冷却至室温后水洗三次，最后经所得树脂球体于60-65℃下真空干燥。

纳米致孔剂的制备：向50份水中加入10份微晶纤维素和2份氢化蓖麻油，并升温至回流状态保温混合15min，待自然冷却至40-45℃后加入5份多聚谷氨酸和0.5份聚二甲基二烯丙基氯化铵，搅拌30min形成乳液，然后加入0.5份葡萄糖酸钠和0.05份二茂铁，混合均匀后将所得混合物送入喷雾干燥机中，干燥所得颗粒经研磨制成纳米粉末，最后将纳米粉末加水制成固含量30-35wt％的乳液，即得纳米致孔剂。

纳米二氧化钛的制备：向40份二氧化钛中加入5份交联聚维酮和0.5份六羟甲基三聚氰胺六甲醚，先以5℃/min的升温速度升温至120-125℃保温混合30min，再加入2份阴离子聚丙烯酰胺和0.2份环氧大豆油，继续在120-125℃下保温混合30min，所得混合物以10℃/min的降温速度降温至40-50℃，并加入40-50℃150份水，以10℃/min的升温速度升温至回流状态保温混合10min，经自然冷却至室温后静置1h，过滤，所得固体于75-80℃下烘干，最后送入纳米研磨机中，经研磨得到纳米二氧化钛。

实施例3

(1)大孔吸附树脂的制备：向400份水中按比例加入50份甲基丙烯酸氢化松香醇酯、40份季戊四醇三丙烯酸酯、10份丙烯酸二甲氨基乙酯、50份纳米致孔剂和0.5份引发剂，充分混合后于超声频率40kHz、输出功率200W下超声处理15min，再于微波频率2450MHz、输出功率700W下微波处理10min，并于0-5℃环境中静置30min，混合均匀后继续微波处理10min，然后于-5-0℃环境中静置15min，混合均匀后再次微波处理10min，所得混合液以5℃/min的降温速度降温至40-45℃保温混合1h，随后将混合液固液分离，所得固相用40-45℃温水水洗三次得到白球，最后将白球于60-65℃下真空干燥，即得大孔吸附树脂；

(2)大孔吸附树脂的预处理：向上述所制65份大孔吸附树脂中加入2份泊洛沙姆、1份N-羟甲基丙烯酰胺和0.5份水解聚马来酸酐，并以5℃/min的升温速度升温至65-70℃保温混合30min，再向所得混合物中加入3倍重量30-35℃水，继续以5℃/min的升温速度升温至回流状态保温混合15min，然后自然冷却至室温，过滤，所得树脂球体水洗三次，最后于60-65℃下真空干燥；

(3)大孔吸附树脂的改性：向5份烯丙基缩水甘油醚中加入0.5份聚乙烯醇缩丁醛和5份纳米二氧化钛，以5℃/min的升温速度升温至115-120℃保温混合15min，再加入经预处理后的65份大孔吸附树脂，继续在115-120℃保温混合30min，待自然冷却至室温后水洗三次，最后经所得树脂球体于60-65℃下真空干燥。

纳米致孔剂的制备：向50份水中加入10份微晶纤维素和2份氢化蓖麻油，并升温至回流状态保温混合15min，待自然冷却至40-45℃后加入5份多聚谷氨酸和0.5份聚二甲基二烯丙基氯化铵，搅拌30min形成乳液，然后加入0.5份葡萄糖酸钠和0.05份二茂铁，混合均匀后将所得混合物送入喷雾干燥机中，干燥所得颗粒经研磨制成纳米粉末，最后将纳米粉末加水制成固含量30-35wt％的乳液，即得纳米致孔剂。

对照例1

(1)大孔吸附树脂的制备：向400份水中按比例加入50份甲基丙烯酸氢化松香醇酯、40份季戊四醇三丙烯酸酯、10份丙烯酸二甲氨基乙酯、50份正戊烷和0.5份引发剂，充分混合后于超声频率40kHz、输出功率200W下超声处理15min，再于微波频率2450MHz、输出功率700W下微波处理10min，并于0-5℃环境中静置30min，混合均匀后继续微波处理10min，然后于-5-0℃环境中静置15min，混合均匀后再次微波处理10min，所得混合液以5℃/min的降温速度降温至40-45℃保温混合1h，随后将混合液固液分离，所得固相用40-45℃温水水洗三次得到白球，最后将白球于60-65℃下真空干燥，即得大孔吸附树脂；

(2)大孔吸附树脂的预处理：向上述所制65份大孔吸附树脂中加入2份泊洛沙姆、1份N-羟甲基丙烯酰胺和0.5份水解聚马来酸酐，并以5℃/min的升温速度升温至65-70℃保温混合30min，再向所得混合物中加入3倍重量30-35℃水，继续以5℃/min的升温速度升温至回流状态保温混合15min，然后自然冷却至室温，过滤，所得树脂球体水洗三次，最后于60-65℃下真空干燥；

(3)大孔吸附树脂的改性：向5份烯丙基缩水甘油醚中加入0.5份聚乙烯醇缩丁醛和5份纳米二氧化钛，以5℃/min的升温速度升温至115-120℃保温混合15min，再加入经预处理后的65份大孔吸附树脂，继续在115-120℃保温混合30min，待自然冷却至室温后水洗三次，最后经所得树脂球体于60-65℃下真空干燥。

纳米二氧化钛的制备：向40份二氧化钛中加入5份交联聚维酮和0.5份六羟甲基三聚氰胺六甲醚，先以5℃/min的升温速度升温至120-125℃保温混合30min，再加入2份阴离子聚丙烯酰胺和0.2份环氧大豆油，继续在120-125℃下保温混合30min，所得混合物以10℃/min的降温速度降温至40-50℃，并加入40-50℃150份水，以10℃/min的升温速度升温至回流状态保温混合10min，经自然冷却至室温后静置1h，过滤，所得固体于75-80℃下烘干，最后送入纳米研磨机中，经研磨得到纳米二氧化钛。

对照例2

(1)大孔吸附树脂的制备：向400份水中按比例加入50份甲基丙烯酸氢化松香醇酯、40份季戊四醇三丙烯酸酯、10份丙烯酸二甲氨基乙酯、50份正戊烷和0.5份引发剂，充分混合后于超声频率40kHz、输出功率200W下超声处理15min，再于微波频率2450MHz、输出功率700W下微波处理10min，并于0-5℃环境中静置30min，混合均匀后继续微波处理10min，然后于-5-0℃环境中静置15min，混合均匀后再次微波处理10min，所得混合液以5℃/min的降温速度降温至40-45℃保温混合1h，随后将混合液固液分离，所得固相用40-45℃温水水洗三次得到白球，最后将白球于60-65℃下真空干燥，即得大孔吸附树脂；

(2)大孔吸附树脂的预处理：向上述所制65份大孔吸附树脂中加入2份泊洛沙姆、1份N-羟甲基丙烯酰胺和0.5份水解聚马来酸酐，并以5℃/min的升温速度升温至65-70℃保温混合30min，再向所得混合物中加入3倍重量30-35℃水，继续以5℃/min的升温速度升温至回流状态保温混合15min，然后自然冷却至室温，过滤，所得树脂球体水洗三次，最后于60-65℃下真空干燥；

(3)大孔吸附树脂的改性：向5份烯丙基缩水甘油醚中加入0.5份聚乙烯醇缩丁醛和5份纳米二氧化钛，以5℃/min的升温速度升温至115-120℃保温混合15min，再加入经预处理后的65份大孔吸附树脂，继续在115-120℃保温混合30min，待自然冷却至室温后水洗三次，最后经所得树脂球体于60-65℃下真空干燥。

实施例4

将等量实施例1、实施例2、实施例3、对照例1和对照例2所制大孔吸附树脂用于等量且同批脱氮假单胞杆菌发酵液的分离纯化，并设置等量市售大孔吸附树脂HP-20作为对照例3。

维生素B₁₂分离纯化方法：将大孔吸附树脂加3倍重量的水润湿后装入玻璃吸附柱中，然后将等量且同批脱氮假单胞杆菌发酵液通过吸附柱，再利用65％甲醇溶液冲洗大孔吸附树脂，直至流出溶液中维生素B₁₂的质量含量低于0.5％，将所得洗脱液经干燥制得富含维生素B₁₂的粉末，测定大孔吸附树脂对维生素B₁₂的吸附量、解吸率和粉末中维生素B₁₂纯度，测定结果如表1所示。

表1所制大孔吸附树脂的处理效果

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

用于从发酵液中分离纯化维生素B12的高分子吸附材料专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。