专利摘要
本发明提供了一种化合物及其制备方法和应用，该化合物具有式(I)所示结构：其中，R为未被取代的或被取代基取代的含氮杂环基；所述含氮杂环基为五元或六元含氮脂杂环或含氮芳香杂环；所述取代基选自烷基、卤代烷基、羧基、卤素；以及，本发明还提供了式(I)化合物的药学上可接受的盐。本发明的化合物对胆管癌细胞QBC‑939和人胰腺癌细胞PANC‑1增殖具有较好的抑制活性，本发明化合物在0.2ug/mL对胆管癌细胞QBC‑939和人胰腺癌细胞PANC‑1增殖的抑制率普遍都高于80％，现活性远高于临床应用的氟尿嘧啶。
权利要求
1.化合物，其特征在于，其具有式(I)所示结构：
其中，R为未被取代的或被取代基取代的含氮杂环基；所述含氮杂环选自吡咯、噻唑、咪唑、吡唑、噁唑、异噁唑、吡啶、嘧啶、哒嗪和吡嗪；所述取代基选自C
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述取代为单取代或双取代。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，R选自以下基团：2-吡咯基、3-吡咯基、2-甲基-3-吡咯基、2-甲基-4-吡咯基、2-咪唑基、4-咪唑基、4-甲基-2-咪唑基、2-甲基-4-咪唑基、3-吡唑基、4-吡唑基、5-甲基-3-吡唑基、3-甲基-4-吡唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、2-噁唑基甲基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、4-异噁唑基甲基、3,5-二甲基异噁唑基-4-甲基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、3-甲基-2-吡啶基、4-甲基-2-吡啶基、5-甲基-2-吡啶基、2-甲基-3-吡啶基、4-甲基-3-吡啶基、5-甲基-3-吡啶基、2-甲基-4-吡啶基、3-甲基-4-吡啶基、3-三氟甲基-2-吡啶基、4-三氟甲基-2-吡啶基、5-三氟甲基-2-吡啶基、2-三氟甲基-3-吡啶基、4-三氟甲基-3-吡啶基、5-三氟甲基-3-吡啶基、2-三氟甲基-4-吡啶基、3-三氟甲基-4-吡啶基、3-羧基-2-吡啶基、4-羧基-2-吡啶基、5-羧基-2-吡啶基、2-羧基-3-吡啶基、4-羧基-3-吡啶基、5-羧基-3-吡啶基、2-羧基-4-吡啶基、3-羧基-4-吡啶基、3-吡啶基甲基、4-吡啶基甲基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、4-甲基-2-嘧啶基、5-甲基-2-嘧啶基、2-甲基-4-嘧啶基、2-甲基-5-嘧啶基、2-嘧啶基甲基、4-嘧啶基甲基、5-嘧啶基甲基、3-哒嗪基、4-哒嗪基、4-甲基-3-哒嗪基、5-甲基-3-哒嗪基、3-甲基-4-哒嗪基、3-哒嗪基甲基、4-哒嗪基甲基、2-吡嗪基、3-甲基-2-吡嗪基和2-吡嗪基甲基。
4.权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，；所述方法包括取薯蓣皂苷元溶解于溶剂中，加入RX和碱性物质反应，反应过程中保持溶液呈碱性，制备得到式(I)化合物；其中，所述R如权利要求1或3所述定义，X为卤素；所述反应温度为-20-300℃，反应时间为0.1-72h；
所述溶剂选自水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、甘油、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、苯、甲苯、二甲苯、1,4-二氧六环、1,2-二氯乙烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺和乙酸乙酯和二甲基亚砜中的一种或多种；
所述碱性物质选自γ-Al
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述溶剂的用量为每摩尔薯蓣皂苷元溶解于5-100L溶剂中。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述薯蓣皂苷元、RX、碱性物质的摩尔比为1：(0.1-10)：(0.01-10)。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述薯蓣皂苷元、RX、碱性物质的摩尔比为1:(1.0-1.2):(0.6-1.0)。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括以色谱法检测反应终点，反应结束后放置至室温，经分离纯化制备式(I)化合物。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述分离纯化的方法选自过滤、树脂处理、水洗、蒸馏、结晶、萃取、活性炭处理、分子筛处理和层析中的一种或多种的结合。
10.组合物，其包含权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
11.药物制剂，其包含权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求10中所述的组合物，与至少一种药物载体或辅料。
12.权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或权利要求10中所述的组合物、或权利要求11所述的药物制剂在制备抗癌药物中的应用；所述癌选自胰腺癌和胆管癌。
说明书
技术领域
本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种化合物及其制备方法和应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
胆管癌是一种常见的胆道恶性肿瘤，恶性程度高，预后极差，其发病率与死亡率逐年上升(王祥宇，等.肝门部胆管癌临床治疗进展[J]，中华肝脏外科手术学电子杂志，2018，7(4):253-257)。胆管癌临床中常用的化疗药物有5-氟尿嘧啶和顺铂。5-氟尿嘧啶达到20ug/mL时对人胆管癌QBC939细胞生长抑制有较好的效果，副作用主要有白细胞减少、血小板下降等骨髓抑制，食欲不振、恶心、呕吐、口腔炎、胃炎、腹痛及腹泻等胃肠道反应。顺铂达3.0μg/mL时对人胆管癌QBC939抑制细胞生长有较好的效果，顺铂主要有严重的恶心、呕吐等消化道反应，肾小管损伤等肾毒性，听神经损害所致耳鸣、听力下降较常见等神经毒性。由于胆管癌起病隐匿，早期诊断困难，临床症状出现较晚，流行病学研究表明，只有10-15％的患者有可能通过手术治愈，而许多患者发现即为晚期，但术后复发率仍为50-60％，五年存活率仅仅30％。目前胆管癌治疗原则仍采用手术切除为主的综合治疗方案，但确诊时仅有不足1/3的患者可行手术切除，且手术预后差，联合化疗对局部晚期或转移性不可切除胆管癌效果也不理想。因此，迫切需要开发新的治疗药物。
胰腺癌是常见的胰腺肿瘤，是一种恶性程度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，5年生存率<1％。胰腺癌早期的确诊率不高，手术死亡率较高，是预后最差的恶性肿瘤之一。目前主要的治疗药物有氟尿嘧啶、多柔比星、异环磷酰胺、司莫司汀、紫杉醇、吉西他滨、顺铂等，但临床上的治愈率很低，因此，研究开发疗效更好的抗胰腺癌药物是非常有必要的。
薯蓣皂苷元(diosgenin，CAS号为512-06-1)主要是由盾叶薯蓣、穿龙薯蓣、黄山药等薯蓣科植物的根茎中所含的薯蓣皂苷水解脱去糖基得到的一种甾体类化合物，是合成甾体激素类药物和甾体避孕药的重要原料。薯蓣皂苷具有一定的抗癌活性(原薯蓣皂苷在制备抗耐药性骨肉瘤药物中的应用CN201810091212.3)，对肺癌细胞A549(Wei Y,等.Anti-cancer effects of dioscin on three kinds of human lung cancer cell linesthrough inducing DNA damage and activating mitochondrial signal pathway.FoodChem Toxicol，2013，59)、胃癌细胞MGC-803(Zhao X,等.Potent effects of dioscinagainst gastric cancer in vitro and in vivo.Phytomedicine，2016，23)、肝癌细胞Huh7(Hsieh M J,等.Autophagy inhibition en hances apoptosis induced by dioscinin Huh7 cells.Evid Based Complement Alternat Med，2012)、宫颈癌细胞HeLa和SiHa(Zhao X,等.Dioscin induces apoptosis in human cervical carcinoma HeLa andSiHa cells through ROS-mediated DNA damage and the mitochondrial signalingpathway.Molecules，2016，21)具有一定的抗癌活性，薯蓣皂苷元也对肉瘤-180、肝瘤腹水型、小鼠宫颈癌、艾氏腹水癌有一定的活性(薯蓣皂苷元的新制药用途CN01129317.9)，薯蓣皂苷元3-位酰胺类含氮衍生物具有一定的抗肿瘤活性(一种薯蓣皂苷元抗肿瘤衍生物及其合成方法CN201711083013；耿倩,等.华西药学杂志,2009,24,475；蒋红平,等.药学学报,2011,46,539；曾春玲,等.华西药学杂志,2011,26,423；丁晓勇,等.药学学报,2012,46,539；吴亚克,等.华西药学杂志,2012,27,22)，薯蓣皂苷元3-位衍生物可抑制眼部血管异常增生(一种薯蓣皂苷元-3-位衍生物的用途CN201310325890.9)，氨基酸薯蓣皂苷元酯具有抗炎、抗肿瘤作用(薯蓣皂苷元-3-位衍生物、制备方法及其用途CN201210303318.8；傅微微,等.华西药学杂志,2010,25,658)，薯蓣皂苷元氨基酸衍生物对人结肠癌细胞Caco-2、人胃腺癌细胞、人肺腺癌细胞、人神经母细胞瘤细胞有不同程度的生长抑制作用(薯蓣皂苷元氨基酸衍生物及其在制备抗肿瘤药物中的应用CN201410250801.3；何忠梅,等.食品安全质量检测学报,2015,3,1061)，薯蓣皂苷元3-位苷如五碳糖苷、二糖，对乳腺癌细胞、人肝癌细胞有一定的抑制作用。
发明内容
具体地，本发明具有如下所述的技术方案：
在本发明的第一方面，本发明提供了一种化合物，其具有式(I)所示结构：
其中，R为未被取代的或被取代基取代的含氮杂环基；所述含氮杂环基为五元或六元含氮脂杂环或含氮芳香杂环；所述取代基选自烷基、卤代烷基、羧基、卤素；所述卤素选自F、Cl、Br和I。
以及，本发明还提供了式(I)化合物的药学上可接受的盐。
举例而言，“药学上可接受的盐”的例子包括无机酸盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐和硝酸盐；有机酸盐，例如醋酸盐、丙酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和抗坏血酸盐；无机碱盐，例如钠盐、钾盐、钙盐、锌盐、镁盐和铝盐；以及有机碱盐，例如精氨酸盐、苄星盐、胆碱盐、二乙胺盐、二醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、葡甲胺盐、乙醇胺盐和氨基丁三醇盐。
在本发明的实施方式中，所述含氮杂环选自吡咯、噻唑、咪唑、吡唑、噁唑、异噁唑、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪和哌啶。
在本发明的实施方式中，所述取代基选自C1-3烷基、三氟甲基和羧基；所述烷基尤其为甲基。
在本发明的实施方式中，所述取代为单取代或多取代，比如，在本发明的一些实施方式中，所述含氮杂环为异噁唑，其被甲基双取代，取代位置分别为异噁唑的C-3位和C-5位，则R为3,5-二甲基异噁唑基-4-基，可以表示为 所述含氮杂环为异噁唑，其被甲基三取代，取代位置分别为异噁唑的C-3位、C-4位和C-5位，则R为3,5-二甲基异噁唑基-4-甲基，可以表示为
在本发明的一些实施方式中，所述含氮杂环为未被取代的，则R选自2-吡咯基、3-吡咯基、2-咪唑基、4-咪唑基、3-吡唑基、4-吡唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、3-哒嗪基、4-哒嗪基和2-吡嗪基。
在本发明的一些实施方式中，R选自以下基团：2-吡咯基、3-吡咯基、2-甲基-3-吡咯基、2-甲基-4-吡咯基、2-咪唑基、4-咪唑基、4-甲基-2-咪唑基、2-甲基-4-咪唑基、3-吡唑基、4-吡唑基、5-甲基-3-吡唑基、3-甲基-4-吡唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、2-噁唑基甲基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、4-异噁唑基甲基、3,5-二甲基异噁唑基-4-甲基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、3-甲基-2-吡啶基、4-甲基-2-吡啶基、5-甲基-2-吡啶基、2-甲基-3-吡啶基、4-甲基-3-吡啶基、5-甲基-3-吡啶基、2-甲基-4-吡啶基、3-甲基-4-吡啶基、3-三氟甲基-2-吡啶基、4-三氟甲基-2-吡啶基、5-三氟甲基-2-吡啶基、2-三氟甲基-3-吡啶基、4-三氟甲基-3-吡啶基、5-三氟甲基-3-吡啶基、2-三氟甲基-4-吡啶基、3-三氟甲基-4-吡啶基、3-羧基-2-吡啶基、4-羧基-2-吡啶基、5-羧基-2-吡啶基、2-羧基-3-吡啶基、4-羧基-3-吡啶基、5-羧基-3-吡啶基、2-羧基-4-吡啶基、3-羧基-4-吡啶基、3-吡啶基甲基、4-吡啶基甲基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、4-甲基-2-嘧啶基、5-甲基-2-嘧啶基、2-甲基-4-嘧啶基、2-甲基-5-嘧啶基、2-嘧啶基甲基、4-嘧啶基甲基、5-嘧啶基甲基、3-哒嗪基、4-哒嗪基、4-甲基-3-哒嗪基、5-甲基-3-哒嗪基、3-甲基-4-哒嗪基、3-哒嗪基甲基、4-哒嗪基甲基、2-吡嗪基、3-甲基-2-吡嗪基和2-吡嗪基甲基。
进一步地，本发明的式(I)化合物包括表1中所示的结构：
表1式(I)化合物结构及其HR-MS结构分析
在本发明的第二方面，本发明还提供了式(I)化合物的制备方法，所述方法包括以薯蓣皂苷元为起始反应物与RX反应制备得到式(I)化合物；其中，R如本发明上文第一方面中所定义，X为卤素。
在本发明的实施方式中，所述方法包括取薯蓣皂苷元溶解于溶剂中，加入RX和碱性物质反应，反应过程中保持溶液呈碱性，制备得到式(I)化合物。
在本发明的实施方式中，所述反应温度为-20-300℃，反应时间为0.1-72h；优选地，所述反应温度为-20-120℃，在该反应温度下，反应更容易进行。
在本发明的实施方式中，所述溶剂选自水、甲醇、乙醇(无水乙醇为优)、丙醇、丁醇、戊醇、甘油、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、苯、甲苯、二甲苯、1,4-二氧六环、1,2-二氯乙烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和乙酸乙酯和二甲基亚砜(DMSO)中的一种或多种；优选为甲苯、无水乙醇、甲醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、四氯化碳、DMF和四氢呋喃中的任一种，在这些溶剂中，反应更容易进行。
在本发明的实施方式中，所述溶剂的用量为每摩尔薯蓣皂苷元溶解于5-100L溶剂中。
在本发明的实施方式中，所述碱性物质选自γ-Al2O3-Na、γ-Al2O3-K、γ-Al2O3-NaOH-Na、γ-Al2O3-NaOH-K、γ-Al2O3-KOH-Na、γ-Al2O3-KOH-K、甲醇钠、乙醇钠、丙醇钠、丁醇钠、氨基钠、金属钠、氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氧化钠、氧化钾、氧化钙、碳酸锶、碳酸钾、碳酸钠、磷酸钾、氨水、乙胺、二乙胺、三乙胺、甲胺、二甲胺、三甲胺、吡啶和哌啶中的一种或多种。
在一些优选的实施方式中，所述碱性物质为氢化钠、氢化钾、乙醇钠、碳酸锶、碳酸钾、γ-Al2O3-K、碳酸钾、三乙胺、叔丁醇钠、乙醇钠、γ-Al2O3-KOH-Na或二乙胺，在这些碱性物质存在下，反应更容易进行。
在本发明的实施方式中，所述薯蓣皂苷元、RX、碱性物质的摩尔比为1：(0.1-10)：(0.01-10)，优选为1:(1.0-1.2):(0.6-1.0)。
在本发明的一些实施方式中，所述薯蓣皂苷元、RX、碱性物质的质量比为(4-20)：(1.5-10)：(0.01-5)。
在本发明的实施方式中，本发明所述的式(I)化合物的制备方法还包括以色谱法检测反应终点，反应结束后放置至室温，经分离纯化制备式(I)化合物。
在本发明的实施方式中，所述分离纯化的方法选自过滤、树脂处理、水洗、蒸馏、结晶、萃取、活性炭处理、分子筛处理和层析中的一种或多种的结合。
本发明所述的分离纯化的方法可以为：比如，在一些实施方式中，TLC检测薯蓣皂苷元全部反应，升温至室温后，加水，用二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮或乙酸乙酯萃取1至多次，比如3次(比如50mL×3-300mL×3)，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，萃取液回收，得固体物在干燥比如在60℃下干燥4h，得到目标产物。
比如，在一些实施方式中，所述分离纯化方法可以为：HPLC检测薯蓣皂苷元全部反应，蒸出溶剂至液体体积减少至1/4，冷却结晶过夜，比如冷却至5℃结晶过夜，过滤，HPLC追踪反应与产物的分离纯化过程，固体物干燥，比如在60℃下干燥4h，得到目标产物。
比如，在又一些实施方式中，所述分离纯化方法可以为：HPLC检测薯蓣皂苷元全部反应，减压出溶剂，进行层析，比如采用色谱柱层析，用乙酸乙酯-乙醇(比如v/v＝10:1)或二氯甲烷-甲醇(v/v＝5:1)洗脱，HPLC追踪反应与产物的分离纯化过程，收集并合并产品流分，用旋转蒸发仪(比如在60℃下)蒸出溶剂，得到目标产物。
在本发明的第三方面，本发明还提供了一种组合物，其包含本发明上述第一方面中所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明的第四方面，本发明还提供了一种药物制剂，其包含本发明上述第一方面中所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或含有所述式(I)化合物或其盐的组合物，与至少一种药物载体或辅料。
本发明所述的药物组合物通常安全、无毒且为生物学上所需要的，本发明中所述药学上可接受的载体或辅料是无毒且安全的，而且其与本发明所述化合物的组合也是无毒且安全的。本发明所述的药学上可接受的载体和辅料通常为本领域人员所熟知的，或者可由本领域技术人员根据实际情况能够确定的。合适的载体和辅料的实例包括葡萄糖、水、甘油、乙醇、丙二醇、玉米淀粉、明胶、乳糖、蔗糖、海藻酸、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、磷酸二钙、氯化钠、交联羧甲基纤维素钠和淀粉羟乙酸钠等等聚山梨酯80、聚乙二醇300、聚乙二醇400、环糊精或其衍生物，比如((2-羟基丙基)-环糊精)和(2-羟基乙基)-环糊精，其又称为HPCD、聚乙二醇化蓖麻油、泊洛沙姆(比如泊洛沙姆407或188)；亲水载体、疏水载体，或其组合等。疏水载体包括，例如脂肪乳剂、脂质、聚乙二醇化磷脂、生物相容的聚合物、脂质球、脂质体、小囊泡、聚合物基质、颗粒等等。此外，本领域技术人员会理解的是，稀释剂包括在术语载体和辅料的范围之内。
载体或辅料在药物组合物中的含量可以是1wt％-98wt％，通常大约占到80wt％。为方便起见，局部麻醉剂、防腐剂、缓冲剂等可直接溶于载体中。
本发明化合物的药物组合物，可以以选自以下任意方式施与：口服、喷雾吸入、直肠给药、鼻腔给药、阴道给药、局部给药、非肠道给药如皮下、静脉、肌内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内或颅内注射或输入，或借助一种外植的储器用药，其中优选口服、肌注、腹膜内或静脉内用药方式。药物剂型可以是液体剂型、固体剂型。液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混旋剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂、包合物、填埋剂、贴剂、擦剂等。
在本发明的第五方面，本发明还提供了本发明上述第一方面中所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、或含有所述式(I)化合物或其盐的组合物、或含有所述式(I)化合物或其盐的药物制剂在制备抗癌药物中的应用；在本发明的实施方式中，所述癌优选为胰腺癌和/或胆管癌。
在本发明的一些实施方式中，本发明所述式(I)化合物0.2ug/mL对胆管癌细胞QBC-939增殖的抑制率均高于70％，可高达95％；本发明所述式(I)化合物0.2ug/mL对人胰腺癌细胞PANC-1增殖的抑制率均高于70％，可高达95％。本发明的化合物的活性远高于临床使用的5-氟尿嘧啶。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。本发明所使用的试剂或原料均可通过常规途径购买获得，如无特殊说明，本发明所使用的试剂或原料均按照本领域常规方式使用或者按照产品说明书使用。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
称取薯蓣皂苷元4.2g、氢化钠0.5g溶于100mL无水乙醇500mL于三口烧瓶中，再加入2-氯吡咯1.5g，搅拌冷冻至-20℃，并保温搅拌反应72h，TLC(展开剂:石油醚-乙酸乙酯(1:1)，显色剂:5％磷钼酸乙醇溶液)检测薯蓣皂苷元全部反应，蒸出乙醇，降温至室温，加水50mL，用二氯甲烷萃取3次(60mL×3)，萃取液回收二氯甲烷，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物3.2g。目的产物的熔点：192.5-194.5℃，
按照与实施例1相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可制备得到化合物2(R为3-吡咯基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g、氢化钾1.0g溶于100mL甲醇500mL于三口烧瓶中，再加入2-甲基-3-氯-吡咯1.5g，搅拌加热25℃，并保温搅拌反应36h，TLC(展开剂:石油醚-乙酸乙酯(1:1)，显色剂:5％磷钼酸乙醇溶液)检测薯蓣皂苷元全部反应，蒸出甲醇，降温至室温，加水50mL，用二氯甲烷萃取3次(60mL×3)，萃取液回收二氯甲烷，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物3.4g。目的产物的熔点：191.7-193.9℃，
按照与实施例2相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可制备得到化合物4(R＝2-甲基-4-吡咯基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g、乙醇钠0.8g溶于100mL正丙醇于500mL三口烧瓶中，再加入2-氯咪唑1.5g，搅拌加热75℃，并保温搅拌反应48h，TLC(展开剂:石油醚-乙酸乙酯(1:1)，显色剂:5％磷钼酸乙醇溶液)检测薯蓣皂苷元全部反应，蒸出正丙醇，降温至室温，用硅胶层析柱分离，乙酸乙酯-乙醇(比如10:1)洗脱剂，收集产物馏分，旋蒸出溶剂后得固体物，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物3.5g。目的产物的熔点：195.1-196.8℃，
按照与实施例3相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可制备得到化合物6(R＝4-咪唑基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g、碳酸锶0.05g溶于100mL正丙醇于500mL三口烧瓶中，再加入2-甲基-4-溴-咪唑2.0g，加热搅拌95℃，并保温搅拌反应18h，TLC检测薯蓣皂苷元全部反应，减压蒸出溶剂，降温至室温，加水50mL，用丙酮萃取3次(50mL×3)，萃取液用无水Na2SO4干燥8h，过滤，滤液回收丙酮后即得固体物，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物3.7g。目的产物的熔点：194.5-196.6℃，
按照与实施例4相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可制备得到化合物7(R＝4-甲基-2-咪唑基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g、碳酸钾1.5g溶于100mL四氯化碳于500mL三口烧瓶中，再加入4-溴-吡唑2.0g，搅拌加热至沸(97℃)，并保温搅拌反应16h，TLC检测薯蓣皂苷元全部反应，减压蒸出溶剂，降温至室温，加水100mL，经101大孔树脂吸附，再用95％洗脱，收集产物馏分，回收乙醇后即得固体物，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物2.9g。目的产物的熔点：195.4-197.3℃，
按照与实施例5相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可制备得到化合物9(R＝3-吡唑基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g、γ-Al2O3-K 0.5g溶于100mL异丙醇于500mL三口烧瓶中，再加入5-甲基-3-溴-吡唑2.2g，加热搅拌98℃，并保温搅拌反应24h，TLC(展开剂:石油醚-乙酸乙酯(1:1)，显色剂:5％磷钼酸乙醇溶液)检测薯蓣皂苷元全部反应，减压蒸出溶剂，降温至室温，加水50mL，用丙酮萃取3次(50mL×3)，萃取液用无水Na2SO4干燥8h，过滤，滤液回收丙酮后即得固体物，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物3.2g。目的产物的熔点：192.5-193.9℃，
按照与实施例6相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可制备得到化合物12(R＝3-甲基-4-吡唑基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g、碳酸钾1.5g溶于100mL正丁醇于500mL三口烧瓶中，再加入2-溴-噻唑1.8g，加热搅拌100℃，并保温搅拌反应12h，TLC(展开剂:石油醚-乙酸乙酯(1:1)，显色剂:5％磷钼酸乙醇溶液)检测薯蓣皂苷元全部反应，减压蒸出溶剂，降温至室温，加水50mL，用丙酮萃取3次(50mL×3)，萃取液用无水Na2SO4干燥8h，过滤，滤液回收丙酮后即得固体物，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物3.9g。目的产物的熔点：195.7-197.5℃，
按照与实施例7相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可分别制备得到化合物14(R＝4-噻唑基)、化合物15(R＝5-噻唑基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g、碳酸钾1.5g溶于100mL甲苯于500mL三口烧瓶中，再加入4-溴-噁唑1.8g，加热搅拌90℃，并保温搅拌反应12h，TLC(展开剂:石油醚-乙酸乙酯(1:1)，显色剂:5％磷钼酸乙醇溶液)检测薯蓣皂苷元全部反应，减压蒸出溶剂，降温至室温，加水100mL，101大孔树脂吸附、95％乙醇洗脱，收集产物馏分，蒸出溶剂后即得固体物，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物4.0g。目的产物的熔点：191.4-193.3℃，
按照与实施例8相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可分别制备得到化合物16(R＝2-噁唑基)、化合物18(R＝5-噁唑基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g、碳酸钾1.5g溶于100mL四氢呋喃于500mL三口烧瓶中，再加入2-噁唑基甲基溴2.0g，加热搅拌50℃，并保温搅拌反应12h，TLC(展开剂:石油醚-乙酸乙酯(1:1)，显色剂:5％磷钼酸乙醇溶液)检测薯蓣皂苷元全部反应，减压蒸出溶剂，降温至室温，加水50mL，用丙酮萃取3次(50mL×3)，萃取液用无水Na2SO4干燥8h，过滤，滤液回收丙酮后即得固体物，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物3.7g。目的产物的熔点：190.4-192.1℃，
称取薯蓣皂苷元4.2g溶于80mL乙酸乙酯于500mL三口烧瓶中，再加入三乙胺10mL、4-氯-异噁唑1.8g，搅拌冷冻至-10℃并保温反应72h，TLC(展开剂:石油醚-乙酸乙酯(1:1)，显色剂:5％磷钼酸乙醇溶液)检测薯蓣皂苷元全部反应，升温至室温、保温2h，减压蒸至液体体积为20mL，冷却至5℃结晶过夜，过滤，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物2.9g。目的产物的熔点：190.2-192.0℃，
按照与实施例10相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可分别制备得到化合物20(R＝3-异噁唑基)、化合物22(R＝5-异噁唑基)、化合物23(R＝4-异噁唑基甲基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g溶于80mL DMF于500mL三口烧瓶中，再加入三乙胺10mL、3,5-二甲基-4-氯甲基异噁唑2.0g，搅拌冷冻至0℃并保温反应36h，TLC(展开剂:石油醚-乙酸乙酯(1:1)，显色剂:5％磷钼酸乙醇溶液)检测薯蓣皂苷元全部反应，升温至室温、保温2h，减压蒸至液体体积为20mL，冷却至5℃结晶过夜，过滤，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物3.3g。目的产物的熔点：189.5-191.2℃，
称取薯蓣皂苷元4.2g溶于80mL乙酸丁酯于500mL三口烧瓶中，再加入乙醇钠1.0g、2-氯-吡啶2.0g，搅拌，室温反应24h，TLC(展开剂:石油醚-乙酸乙酯(1:1)，显色剂:5％磷钼酸乙醇溶液)检测薯蓣皂苷元全部反应，减压蒸至液体体积为20mL，冷却至5℃结晶过夜，过滤，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物3.4g。目的产物的熔点：192.5-194.3℃，
按照与实施例12相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可分别制备得到化合物26(R＝3-吡啶基)、化合物27(R＝4-吡啶基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g溶于200mL二氯甲烷于500mL三口烧瓶中，再加入叔丁醇钠1.8g、2-甲基-4-碘-吡啶2.5g，搅拌，室温反应24h，TLC(展开剂:石油醚-乙酸乙酯(1:1)，显色剂:5％磷钼酸乙醇溶液)检测薯蓣皂苷元全部反应，减压蒸至液体体积为20mL，冷却至5℃结晶过夜，过滤，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物4.0g。目的产物的熔点：191.5-193.3℃，
按照与实施例13相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可分别制备得到化合物28(R＝3-甲基-2-吡啶基)、化合物29(R＝4-甲基-2-吡啶基)、化合物30(R＝5-甲基-2-吡啶基)、化合物31(R＝2-甲基-3-吡啶基)、化合物32(R＝4-甲基-3-吡啶基)、化合物33(5-甲基-3-吡啶基)、化合物35(R＝3-甲基-4-吡啶基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g、乙醇钠0.8g溶于100mL正丙醇于500mL三口烧瓶中，再加入3-三氟甲基-2-溴-吡啶2.5g，搅拌加热60℃，并保温搅拌反应36h，TLC(展开剂:石油醚-乙酸乙酯(1:1)，显色剂:5％磷钼酸乙醇溶液)检测薯蓣皂苷元全部反应，蒸出正丙醇，降温至室温，加水80mL，用三氯甲烷萃取3次(100mL×3)，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，萃取液回收三氯甲烷，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物3.0g。目的产物的熔点：201.1-202.7℃，
按照与实施例14相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可分别制备得到化合物37(R＝4-三氟甲基-2-吡啶基)、化合物38(R＝5-三氟甲基-2-吡啶基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g、碳酸钾1.5g溶于100mL异丙醇于500mL三口烧瓶中，再加入2-三氟甲基-4-溴-吡啶2.6g，加热搅拌110℃，并保温搅拌反应12h，TLC(展开剂:石油醚-乙酸乙酯(1:1)，显色剂：5％磷钼酸乙醇溶液)检测薯蓣皂苷元全部反应，减压蒸出溶剂，降温至室温，加水50mL，用丙酮萃取3次(50mL×3)，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，萃取液用无水Na2SO4干燥8h，过滤，滤液回收丙酮后即得固体物，在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物3.3g。目的产物的熔点：102.9-1204.5℃，
按照与实施例15相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可分别制备得到化合物39(R＝2-三氟甲基-3-吡啶基)、化合物40(R＝4-三氟甲基-3-吡啶基)、化合物41(R＝5-三氟甲基-3-吡啶基)、化合物43(R＝3-三氟甲基-4-吡啶基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g、γ-Al2O3-KOH-Na 0.5g溶于100mL异丙醇于500mL三口烧瓶中，再加入3-羧基-2-氯-吡啶2.0g，加热搅拌120℃，并保温搅拌反应24h，HPLC(色谱条件：色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(4.6mm×150mm,5um),流动相为乙腈-水(90∶10),流速为1.0mL.min
按照与实施例16相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可分别制备得到化合物45(R＝4-羧基-2-吡啶基)、化合物46(R＝5-羧基-2-吡啶基)、化合物47(R＝2-羧基-3-吡啶基)、化合物48(R＝4-羧基-3-吡啶基)、化合物49(R＝5-羧基-3-吡啶基)、化合物50(R＝2-羧基-3-吡啶基)、化合物51(R＝3-羧基-4-吡啶基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g溶于80mL乙酸乙酯于500mL三口烧瓶中，再加入三乙胺10mL、3-氯甲基吡啶1.5g，搅拌，冷冻至-10℃并保温反应72h，HPLC(色谱条件：色谱柱为AgilentZorbax SB-C18(4.6mm×150mm,5um),流动相为乙腈-水(90∶10),流速为1.0mL.min
按照与实施例17相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可制备得到化合物53(R＝4-吡啶基甲基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g溶于二氯甲烷100mL于500mL三口烧瓶中，再加入二乙胺10mL、4-氯嘧啶1.5g，搅拌，20℃下并保温反应18h，HPLC(色谱条件：色谱柱为AgilentZorbax SB-C18(4.6mm×150mm,5um),流动相为乙腈-水(90∶10),流速为1.0mL.min
按照与实施例18相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可分别制备得到化合物54(R＝2-嘧啶基)、化合物56(R＝5-嘧啶基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g溶于二氯甲烷100mL于500mL三口烧瓶中，再加入二乙胺10mL、2-甲基-4-溴-嘧啶2.5g，搅拌，40℃下并保温反应8h，HPLC(色谱条件：色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(4.6mm×150mm,5um),流动相为乙腈-水(90∶10),流速为1.0mL.min
按照与实施例19相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可制备得到化合物57(R＝4-甲基-2-嘧啶基)、58(R＝5-甲基-2-嘧啶基)、化合物60(R＝2-甲基-5-嘧啶基)。
称取薯蓣皂苷元16.8g、氢化钠0.8g溶于400mL甲醇于1000mL三口烧瓶中，再加入2-氯甲基嘧啶5.8g，搅拌加热65℃，并保温搅拌反应6h，TLC检测薯蓣皂苷元全部反应，蒸出甲醇，降温至室温，加水150mL，用二氯甲烷萃取3次(200mL×3)，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，萃取液回收二氯甲烷，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物12.2g。目的产物的熔点：187.6-189.3℃，
按照与实施例20相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可制备得到化合物62(R＝4-嘧啶基甲基)。
称取薯蓣皂苷元16.8g、乙醇钠2.1g溶于400mL无水乙醇于1000mL三口烧瓶中，再加入5-氯甲基嘧啶8.0g，搅拌加热78.5℃，并保温搅拌反应4h，TLC检测薯蓣皂苷元全部反应，蒸出无水乙醇，降温至室温，加水120mL，用三氯甲烷萃取3次(200mL×3)，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，萃取液回收三氯甲烷，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物13.5g。目的产物的熔点：183.5-185.3℃，
称取薯蓣皂苷元4.2g、碳酸钾1.40g溶于100mL丙醇于500mL三口烧瓶中，再加入4-甲基-3-溴-哒嗪2.1g，加热搅拌98℃，并保温搅拌反应4h，TLC检测薯蓣皂苷元全部反应，减压蒸出溶剂，降温至室温，加水50mL，用丙酮萃取3次(100mL×3)，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，萃取物经硅胶层析柱、二氯甲烷-无水乙醇(5﹕1)洗脱，收集产物馏分、蒸出溶剂，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物3.5g。目的产物的熔点：184.5-186.2℃，
按照与实施例22相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可分别制备得到化合物64(R＝3-哒嗪基)、化合物65(R＝4-哒嗪基)、化合物67(R＝5-甲基-3-哒嗪基)、化合物68(R＝3-甲基-4-哒嗪基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g溶于100mL四氢呋喃于500mL三口烧瓶中，再加入三乙胺10mL、4-溴甲基哒嗪2.2g，搅拌，加热至66℃(加热回流)并保温反应0.5h，TLC检测薯蓣皂苷元全部反应，升温至室温，用乙酸乙酯萃取3次(100mL×3)，减压蒸至液体体积为40mL，冷却至5℃结晶过夜，过滤，TLC追踪反应与产物的分离纯化过程，固体物在60℃下干燥4h，即得淡黄色粉末状的产物3.2g。目的产物的熔点：184.0-186.0℃，
按照与实施例23相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可制备得到化合物69(R＝3-哒嗪基甲基)。
称取薯蓣皂苷元4.2g溶于二氯甲烷100mL于500mL三口烧瓶中，再加入二乙胺10mL、2-溴甲基吡嗪2.2g，搅拌，0℃下并保温反应48h，HPLC检测薯蓣皂苷元全部反应，蒸出二氯甲烷至液体体积减少至1/4，冷却至5℃结晶过夜，过滤，HPLC追踪反应与产物的分离纯化过程，固体物在60℃下干燥4h，即得黄色粉末状的产物3.1g。目的产物的熔点：182.5-184.4℃，
按照与实施例24相似的方法，选用适宜的卤代含氮杂环基(卤素可以为Cl或Br)可分别制备得到化合物71(R＝2-吡嗪基)、化合物72(R＝3-甲基-2-吡嗪基)。
对胆管癌细胞QBC-939和人胰腺癌细胞PANC-1增殖的抑制活性筛选实验
取对数生长期生长状态良好的胆管癌细胞QBC-939和人胰腺癌细胞PANC-1以2×10
所合成的典型化合物1至73、5-氟尿嘧啶，对胆管癌细胞QBC-939和人胰腺癌细胞PANC-1增殖的抑制活性实验结果见表2。
(R基团如表2中所示)
表2对胆管癌细胞QBC-939和人胰腺癌细胞PANC-1增殖的抑制率
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
一种化合物及其制备方法和应用专利购买费用说明
Q：办理专利转让的流程及所需资料
A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。
1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。
2：按规定缴纳著录项目变更手续费。
3：同时提交相关证明文件原件。
4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。
Q:专利著录项目变更费用如何缴交
A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式
Q：专利转让变更，多久能出结果
A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。
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