专利摘要
一种齿叶冬青体细胞胚胎间接发生和植株再生的方法，其特征在于，所述方法包括： 步骤1、采集齿叶冬青的未成熟种子，清洗消毒后，剥出幼胚作为外植体备用； 步骤2、将所得幼胚接种至愈伤组织诱导培养基上培养，获得胚性愈伤组织，所述愈伤 组织诱导培养基的配方为：1/4MS+0～0.1mg/L6‑BA+0.5～5mg/L2，4‑D； 步骤3、将所得胚性愈伤组织转移至增殖培养基上增殖培养，所述增殖培养基的配方 为：WPM+1mg/L ZT或者1～2mg/L2‑ip+0.5～4mg/L 2，4‑D+30～60g/L蔗糖+6～7g/L琼脂+ 480～520mg/L谷氨酰胺； 步骤4、增殖培养后转移至体胚诱导培养基暗培养获得体细胞胚，所述体胚诱导培养基 的配方为：WPM+0mg/L ZT或者1～2mg/L2‑ip+0.5～4mg/L 2，4‑D+60～90g/L蔗糖+5～ 7mg/LABA+6～7g/L琼脂+480～520mg/L谷氨酰胺培养基上； 步骤5、将所得的体细胞胚转移至MS培养基上萌发培养，然后转移至光照条件下培养至 形成生根的完整植株； 步骤6、将所得生根的完整植株移栽至栽培基质中培养。 2.如权利要求1所述的齿叶冬青体细胞胚胎间接发生和植株再生的方法，其特征在于， 所述步骤1中清洗消毒的具体步骤为：将冬青的未成熟种子用流水冲洗10～30min，转移至 超净工作台上用无菌水润洗；种子的表面消毒先用75％的酒精浸泡5～30min，再用8％次氯 酸钠浸泡10～30min，最后用无菌水冲洗5‑6次，放入无菌水中待用。 3.如权利要求1所述的齿叶冬青体细胞胚胎间接发生和植株再生的方法，其特征在于， 所述步骤2中培养条件为：培养的温度为25±1℃，光照强度为1000‑3000Lx，光照时间为16 ～18h/d。 4.如权利要求1所述的齿叶冬青体细胞胚胎间接发生和植株再生的方法，其特征在于， 所述步骤2中愈伤组织诱导培养基的配方为：1/4MS+0～0.1mg/L6‑BA+0mg/L 2，4‑D。 5.如权利要求1所述的齿叶冬青体细胞胚胎间接发生和植株再生的方法，其特征在于， 所述步骤3中增殖培养基的配方为：WPM+0mg/L ZT/2‑ip+2.0mg/L 2，4‑D+30g/L蔗糖+ 6.5g/L琼脂+500mg/L谷氨酰胺。 6.如权利要求1所述的齿叶冬青体细胞胚胎间接发生和植株再生的方法，其特征在于， 所述步骤3中增殖培养的条件为：培养的温度为25±1℃，光照强度为1000‑3000Lx，光照时 间为16～18h/d。 7.如权利要求1所述的齿叶冬青体细胞胚胎间接发生和植株再生的方法，其特征在于， 所述步骤4中体胚诱导培养基的配方为：WPM+0mg/L ZT/2‑ip+2.0mg/L2，4‑D+60g/L蔗糖+ 6mg/LABA+6.5g/L琼脂+500mg/L谷氨酰胺。 8.如权利要求1所述的齿叶冬青体细胞胚胎间接发生和植株再生的方法，其特征在于， 所述步骤5中MS培养基上萌发12～16d后转移至光照条件下培养26～30d，所述光照条件下 的光照强度为1000‑3000Lx，光照时间为16～18h/d。 9.如权利要求1所述的齿叶冬青体细胞胚胎间接发生和植株再生的方法，其特征在于， 所述步骤6中移栽至栽培基质中置于温室苗床上喷雾系统下生长。
一种齿叶冬青体细胞胚胎间接发生和植株再生的方法专利购买费用说明
Q：办理专利转让的流程及所需资料
A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。
1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。
2：按规定缴纳著录项目变更手续费。
3：同时提交相关证明文件原件。
4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。
Q:专利著录项目变更费用如何缴交
A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式
Q：专利转让变更，多久能出结果
A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。
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