IPC分类号 : C07K14/01,C12N15/34,C12N15/70,C12N1/21,G01N33/569,C12R1/19
专利摘要
一种人工改造的猪圆环病毒2型Rep′蛋白，其特征在于，所述的人工改造的猪圆环病 毒2型Rep′蛋白简称PCV2 Rep′，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。 2.一种人工改造的猪圆环病毒2型Rep′蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法包括： 构建表达区的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的基因工程菌，然后经诱导表达与纯化即得。 3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： 步骤1、构建人工改造的猪圆环病毒2型Rep′蛋白表达工程菌： S1、以pET 28a PCV2 Rep M2质粒为模板，以如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示序列为 引物，经PCR扩增得到产物片段A； S2、以pET 28a PCV2 Rep M2质粒为模板，以如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示序列为 引物，经PCR扩增得到产物片段B； S3、以所述片段A和片段B的混合物为模板，以如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6所示序列 为引物，经PCR扩增得到PCR产物； S4、将上述PCR产物进行胶回收后与pTopo‑T载体连接，转化大肠杆菌并挑取单克隆，菌 液PCR鉴定后提质粒，与pET28a同时用BamHI/XhoI双酶切，连接、转化大肠杆菌，菌液PCR鉴 定，阳性克隆的工程菌命名为：E.coli BL21/pET28a PCV2 Rep′M1； 步骤2、将所得阳性克隆的工程菌进行人工改造的猪圆环病毒2型Rep′蛋白的诱导表达 及纯化。 4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中诱导表达所用的诱导剂为 α‑乳糖，所述诱导剂的工作浓度为0.03mol/L。 5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中纯化步骤为：诱导完毕后收 集表达菌并用pH7.4，0.05M PBS重悬菌体，超声破碎得到破菌液；将所述破菌液上清用0.22 μm滤膜过滤，上样至Ni柱，用含20mM咪唑的0.05mol/L，pH7.4 PBS淋洗完全；用含250mM咪唑 的0.05mol/L，pH7.4 PBS洗脱，收集含蛋白洗脱液。 6.一种权利要求1所述的人工改造的猪圆环病毒2型Rep′蛋白的表达载体，其特征在 于，所述表达载体的表达区的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。 7.一种人工改造的猪圆环病毒2型Rep′蛋白表达工程菌，其特征在于，该工程菌包含权 利要求6所述的人工改造的猪圆环病毒2型Rep′蛋白表达载体。 8.一种人工改造的猪圆环病毒2型Rep′蛋白的抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在 于，所述的ELISA检测试剂盒包括： (A)包被有权利要求1所述的人工改造的猪圆环病毒2型Rep′蛋白的ELISA酶标板； (B)标准阴性血清：PCV2抗体阴性的猪血清； (C)标准阳性血清：PCV2抗体阴性的猪，用猪圆环病毒2型灭活疫苗SH株接种后的血清； (D)辣根过氧化物酶标记的酶标二抗：羊抗猪IgG或羊抗豚鼠IgG； (E)样品稀释液、包被液、封闭液、ELISA酶标板洗涤液、抗体稀释液、显色液和终止液。 9.一种非疾病诊断目的的人工改造的猪圆环病毒2型Rep′蛋白的抗体的检测方法，其 特征在于，所述的检测方法包括以下步骤： (1)制备检测ELISA酶标板：采用包被液将权利要求1所述的人工改造的猪圆环病毒2型 Rep′蛋白稀释后加到酶标板中吸附，洗板并空干包被液，加包被用封闭液封闭； (2)待检血清、阴性血清、阳性血清分别作为一抗，加样至ELISA酶标板孔中进行孵育； (3)酶标二抗的孵育：将辣根过氧化物酶标记的酶标二抗加入ELISA酶标板，洗涤液洗 涤，甩干； (4)加入显色液，室温避光孵育，加入终止液终止反应；在酶标仪上450nm波长下测定OD 值。 10.权利要求8所述的ELISA检测试剂盒在区分PCV2 Cap蛋白亚单位疫苗免疫猪的血清 抗体和全病毒感染猪的血清抗体或全病毒灭活疫苗免疫猪的血清抗体中的非疾病诊断目 的方面的应用。
人工改造的猪圆环病毒2型Rep′蛋白、ELISA检测试剂盒及其应用专利购买费用说明
Q：办理专利转让的流程及所需资料
A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。
1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。
2：按规定缴纳著录项目变更手续费。
3：同时提交相关证明文件原件。
4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。
Q:专利著录项目变更费用如何缴交
A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式
Q：专利转让变更，多久能出结果
A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。
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